倪健
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗人F1-F0 ATP合成酶beta亚基单抗的制备及其抗肿瘤活性研究被引量：8
- 2008年
- 目的:制备鼠抗人F1-F0ATP合成酶beta亚基(hATP5B)单抗,并对其特异性和抗肿瘤活性进行研究。方法:以原核表达人hATP5B免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,筛选分泌抗hATP5B单抗的杂交瘤细胞株。采用Protein A亲和层析法纯化抗体腹水,SDS-PAGE检测纯化产物纯度。利用Western blot、细胞免疫荧光对其特异性进行鉴定,并通过抑制乳腺癌细胞MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr表面ATP生成,细胞毒性实验进行抗肿瘤活性研究。结果:获得一株稳定表达抗hATP5B单抗的杂交瘤细胞株Mab3B8,Western blot和细胞免疫荧光结果表明,该抗体与乳腺癌MCF-7及其耐药细胞MCF-7/Adr细胞天然抗原结合;可明显抑制MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr细胞膜表面ATP合成;与化疗药物多柔比星(曾用名:阿霉素)联合作用,可降低化疗药物多柔比星对肿瘤细胞的IC50。结论:成功建立了一株可特异性识别天然hATP5B的单抗,有阻断肿瘤细胞膜表面ATP合成活性并可明显增强MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr细胞对多柔比星敏感性的作用。此项研究对膜表达F1-F0ATP合成酶功能探讨及肿瘤治疗研究都具有重要意义。
- 张霞彭艳俞丽丽陈建鹤王怡波林建波倪健殷明
- 关键词：多柔比星肿瘤耐药
- 人F1F0-ATP合成酶β亚基的原核表达、纯化及抗体制备被引量：3
- 2008年
- 目的:原核表达、纯化人F1F0-ATP合成酶β亚基(hATP5B)并制备其多克隆抗体。方法:以人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增hATP5B成熟肽编码序列,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)并诱导表达,表达产物用Ni2+螯合层析纯化,纯化产物用透析复性,产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。复性产物免疫家兔,制备多克隆抗体;多抗的效价用间接ELISA法检测,并用Western blot和细胞免疫荧光分析多抗的特异性和抗原结合性。结果:测序证实获得hATP5B成熟肽编码序列。SDS-PAGE鉴定表明,表达、纯化、复性产物的相对分子质量(Mr)均约55000,与理论值相符。灰度扫描分析重组hATP5B(recombinant hATP5B,rhATP5B)的表达量占菌体蛋白总量的36.8%,纯化产物纯度达98.3%,复性产物纯度达99.2%。Western blot反应阳性。多抗的平均抗体效价为1∶640000,可特异识别HUVEC中的天然抗原。结论:原核表达的hATP5B具有良好的免疫原性,其免疫家兔后获得的多抗具有高效价和特异性。hATP5B的原核高效表达和其抗体制备为进一步研究hATP5B的功能奠定了实验基础。
- 俞丽丽张元军张霞王怡波林建波倪健彭艳
- 关键词：原核表达多克隆抗体
