黄晖
- 作品数：27 被引量：139H指数：7
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
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- 感觉神经肽P物质特异性受体在表皮干细胞上的表达被引量：2
- 2006年
- 近10年来，表皮干细胞（epidermal stem cells，ESCs）作为皮肤细胞发生、修复、改建的源泉，因其与上皮源肿瘤、皮肤变应性疾病的发生密切相关而成为研究的热点。体内实验结果显示，皮肤伤口中外源性感觉神经肽P物质可促进ESCs增殖并将其大量募集于创缘，加速修复过程。为进一步探讨P物质对ESCs生物学行为影响的机制，本实验分别从蛋白水平和mRNA水平观察体外培养的ESCs上P物质的两种特异性受体：神经激肽1受体（NK—1R）和NK-2R的表达情况。
- 刘育杰赖西南王正国黄晖艾军华王丽丽
- 关键词：感觉神经肽P物质表皮干细胞特异性受体ESCS皮肤伤口MRNA水平
- 外源性P物质诱导的表皮干细胞P物质自分泌现象研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究表皮干细胞P物质（substance P，SP）自分泌特点。方法体外培养表皮干细胞，给予外源性SP刺激，采用免疫荧光、ELISA、Western blot、定量PCR等方法检测刺激后细胞的SP基因、蛋白以及外周环境中SP蛋白的表达变化。结果外源性SP刺激后，表皮干细胞及其培养液中SP蛋白表达上调，24h达到峰值，浓度明显高于外加的SP浓度；SP基因在6h即已达到峰值；封闭自然杀伤（NK）细胞受体后给予刺激，则SP表达不上调。结论给予外源性SP能诱导表皮干细胞自身的SP自分泌。
- 黄晖赖西南王正国蒋伟刘育杰王丽丽
- 关键词：表皮干细胞P物质自分泌
- 感觉神经肽P物质激活Wnt/β-catenin信号通路促进间充质干细胞增殖的实验研究
- 2015年
- 目的探讨感觉神经肽P物质(substance P,SP)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响并初步揭示其中可能的机制。方法体外培养SD(Sprague-Dawley)大鼠BMSCs。细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测不同浓度SP刺激下的BMSCs增殖活性;在10-8 mol/L的SP刺激下,采用实时荧光定量PCR(real-time qPCR,RT-qPCR)检测第1、3、5和7天时Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、c-myc、cyclin D)的表达情况。SP组单纯添加10-8 mol/L的SP,SP+LiCl(糖原合成激酶-3的抑制剂LiCl)组在SP组基础上添加6×10-3 mol/L的LiCl,SP+Dkk-1(Dickkopf-1)组在SP组基础上添加10-9 mol/L的Dkk-1,以添加等量聚丁烯琥珀酸酯(poly butylenes succinate,PBS)为空白对照组。结果 CCK-8法显示SP明显促进BMSCs增殖,以10-8 mol/L的SP作用最为显著。RT-qPCR结果显示SP刺激下,β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA表达有显著差异,10-8 mol/L的浓度差异最为显著,并且呈明显的时间依赖,第5天mRNA表达出现顶峰。并且SP+LiCl组β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA和蛋白水平显著增强,而SP+Dkk-1组明显抑制。结论 SP通过激活Wnt/β-catenin通路而显著促进BMSCs增殖。
- 喻伟程鹏黄晖黄鑫陈安民
- 关键词：感觉神经肽P物质骨髓间充质干细胞增殖WNT/Β-CATENIN信号通路
- CK1毰表达在SP调控毬-catenin表达中的作用
- 赖西南黄晖
- 早期干预对腰椎间盘突出症的影响——多中心大样本量随访被引量：19
- 2014年
- [目的]通过对腰椎间盘退变引起的腰椎间盘突出症病人的相关资料分析探讨腰椎问盘突出症的早期干预对腰椎间盘突出症愈后功能康复的影响。[方法]采用前瞻性和回顾性相结合的研究方法，以同济医院骨科及周边兄弟医院骨科收治的2007年6月～2010年10月术前确诊为腰椎问盘突出症的605例患者进行前瞻性研究并随访，2006年6月～2009年10月已诊断并行相应治疗的腰椎间盘突出症的710例患者病例进行分析并随访，按照RDQ功能障碍评分（Roland—morris指数）、腰痛JOA评分及VAS疼痛评分标准进行评定。[结果]所有病例，手术治疗占67％，保守治疗占33％，随访8—24个月（平均14．6个月）并按RDQ功能障碍评分、腰痛JOA评分及VAS疼痛评分标准进行近期效果评估。前瞻性研究的病例，RDQ评分患者由治疗前的（18．3±1．4）分改善为末次随访时的（8．1±1．5）分；腰痛JOA评分由治疗前的（8．5±1．3）分改善为末次随访时的（24．5±1．6）分。治疗前与末次随访时相比两个评分均有大幅改善，有统计学差异（P〈0．05）。VAS疼痛主观评分治疗前与末次随访时也有明显改善。回顾性研究的病例表明RDQ评分患者由治疗前的（16．3±1．5）分改善为末次随访时的（9．8±1．4）分；腰痛JOA评分由治疗前的（9．3±1．7）分改善为末次随访时的（20．2±1．4）分。治疗前与末次随访时相比两个评分均有改善，VAS疼痛主观评分治疗前与末次随访时也有明显改善。但早期干预患者（前瞻性研究）与未干预患者（回顾性研究）相比，有统计学差异（P〈0．05），表明在腰椎间盘突出症患者功能恢复方面有差异。[结论]早期干预对于腰椎间盘突出症患者来说，比未干预患者功能改善率高，治疗后功能恢复更好。
- 尹德龙程鹏范震波胡汉生黄晖郭风劲陈安民
- 关键词：腰椎间盘突出症早期干预治疗
- 骨内输液技术在海水浸泡战伤早期救治中应用的实验研究
- 2001年
- 赖西南王丽丽黄晖
- 关键词：海水浸泡火器伤急救动物实验
- P物质对糖尿病鼠难愈创面修复的影响及其机制的初步研究被引量：7
- 2007年
- 目的研究外源性感觉神经肽P物质（substance P，SP）对糖尿病鼠难愈伤口的作用及其对创缘表皮干细胞（ESCs）迁移的影响。方法筛选糖尿病成模大鼠56只，随机分为对照组和SP组。于实验鼠背部制备2个直径1cm的全层皮肤切割伤口。SP组伤口给予外源性SP。分别于伤前及伤后4，7，10，14，17，21d描记伤口大小，动态观察各组治疗效果并取材，苏木精-伊红染色观察伤口上皮化速度和质量，并以角蛋白19（K19）、β1整合素做为ESCs表面标记物，观察创缘ESCs分布及数量变化规律。结果对照组和SP组创面伤后14d愈合率分别是83．94％和100％。组织学观察伤后SP组创面上皮化速度及愈合质量明显高于对照组。随着时间的推移，创缘标记阳性细胞数量明显增加，SP组较对照组增加明显，且主要位于新生基底层上层细胞及新生上皮。结论糖尿病难愈创面中，SP可以诱导ESCs向创缘迁移，这可能是SP加速创面愈合的原因之一。
- 刘育杰赖西南王正国郭文治黄晖王丽丽
- 关键词：表皮干细胞P物质难愈性伤口
- 大鼠骨骺干细胞免疫纯化和Sox9基因真核表达载体的克隆构建被引量：4
- 2008年
- 目的:Sox9基因是一种重要的早期胚胎发育相关基因,是前软骨细胞浓聚所必需的因子,其促进成骨但同时可以抑制骨骺细胞的终末分化,以延长软骨发育成熟过程,延迟软骨发育,抑制软骨细胞凋亡,有利于骨骼在生长发育阶段形成复杂的形状和结构。从骨骺干骨细胞中克隆得Sox9基因,并构建其真核表达载体。方法:实验于2007-03/07在同济医学院矫形外科实验室完成。①实验材料:出生<24h纯系清洁级新生SD大白鼠,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:参考游洪波等方法,采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的大鼠骨骺干细胞,以FGFR-3抗体对骨骺干细胞的细胞爬片进行免疫细胞化学鉴定。提取骨骺干细胞总RNA,以RT-PCR方法获得Sox9基因的全长,插入pGEM○R-TEasyVectorSystem克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pEGFP-IRE2构建重组复合质粒。结果:免疫组织化学证实,显微取材分离并纯化的细胞为骨骺干细胞。从骨骺干细胞中提取的总RNA经电泳可得28s、18s和5s共3条带,测吸光度值为0.2635,A260/A280为1.8741,说明提取的总RNA完整性较好,纯度高,符合RT-PCR的要求。PCR产物经电泳可得到约2000bp的特异性条带,与预期大小一致。经限制性内切酶酶切图谱分析DNA序列测定证实的目的基因已经插入重组质粒,成功地构建了Sox9质粒。结论:成功地分离纯化了骨骺干细胞,克隆出Sox9基因并构建了Sox9基因的真核表达载体,为进一步研究Sox9的生物学功能及其在成软骨和成骨分化过程中的作用奠定了基础。
- 张伟凯陈安民郭风劲黄晖祁军
- 关键词：骨骺干细胞SOX9基因质粒
- 感觉神经肽SP对创面表皮干细胞迁移影响的实验研究被引量：23
- 2003年
- 目的 探讨感觉神经肽P物质 (SP)对创面表皮干细胞迁移的影响。方法 新生 3～ 4天Wistar大鼠 90只 ,随机分为正常组、SP组、辣椒素组 ,采用BrdU标记干细胞结合检测表皮干细胞特异性标记蛋白K19和β1整合素表达 ,观察皮肤全层缺损后 2 1天伤口局部应用SP对伤口表皮干细胞迁移及伤口愈合的影响 ,并与预先注射辣椒素毁损感觉神经元 (辣椒素组 )和单纯皮肤损伤 (正常组 )比较。结果 致伤后 18天SP组伤口闭合 ,较正常组提前 3天 ,而辣椒素组仅闭合创面面积的 2 5 5 4%。伤后SP组创缘及肉芽组织出现较多表皮干细胞 ;而抑制感觉神经肽SP的辣椒素组仅在创缘观察到少量表皮干细胞 ;正常组在肉芽组织中尚未发现表皮干细胞 ,在创缘的表皮干细胞数介于SP组和辣椒素组之间。结论 感觉神经肽SP能明显加快创面愈合速度 ,并具有诱导表皮干细胞向创缘和肉芽组织中迁移的作用。
- 黄晖赖西南王正国付小兵王丽丽
- 关键词：表皮干细胞感觉神经肽P物质溴脱氧尿苷伤口愈合
- 不同频率低强度电磁场促表皮干细胞分化机制初探被引量：1
- 2014年
- 目的观察不同频率低强度电磁场对表皮干细胞（EpSCs）分化的影响，并从基因水平初步探讨其调控机制。方法取sD大鼠乳鼠背部皮肤组织，通过体外分离培养获取第2代EpSCs，将其分为3个磁刺激组及对照组，各磁刺激组细胞分别给予15，50及75Hz，5mT电磁场干预，对照组细胞未给予电磁场刺激。于实验进行10d后对各组细胞进行免疫荧光检测以了解细胞分化情况，同时采用RT-PCR技术检测各组细胞c．myc、B-连环蛋白（B—catenin）mRNA基因表达，应用免疫组化方法检测各组细胞角蛋白18（CK18）表达情况。结果不同频率低强度电磁场刺激均能促进EpSCs分化，各磁刺激组细胞分化相关角蛋白（即CK18）表达均为阳性，并以50Hz磁刺激组CK18阳性表达尤为显著。各磁刺激组c—myemRNA表达（15，50及75Hz磁刺激组c—mycmRNA吸光度值分别为27324，37037及24790）均较对照组增强（对照组c—mycmRNA吸光度值为19037）（P〈0．01），且以50Hz磁刺激组上调幅度较显著（P〈0．05）。B—cateninmRNA表达（15，50及75Hz磁刺激组p-eateninmRNA吸光度值分别为23199，22385及15688）则较对照组（对照组B—cateninmRNA吸光度值为30591）减低（P〈0．05）。结论15，50及75Hz，5mT电磁场刺激均能促进EpSCs分化，并以50Hz，5mT电磁场对EpSCs的促分化作用较显著，其调控机制可能与增强细胞c．myc表达、抑制B—catenin表达有关。
- 尹德龙靳国青程鹏胡汉生范震波黄晖郭风劲陈安民
- 关键词：表皮干细胞分化
