马正海
- 作品数：126 被引量：449H指数：11
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型上游调控区DNA多态性分析被引量：14
- 2006年
- 目的探讨新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV-16)上游调控区(upstream regulatory region,URR)的变异及其与新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生的关系。方法从19份中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA,以此DNA为模板,PCR扩增HPV-16 URR DNA片段,PCR产物直接测序或克隆后测序,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV-16 URR DNA多态性。结果PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV-16 URR阳性率为89．47％(17/19)；测序和序列分析表明,与HPV-16原型比较,HPV-16 URR核苷酸多处发生变异,URR在核苷酸水平上形成11种突变模式(XJU-1～XJU-11),XJU-1和XJU-4突变模式各占23．53％(4/17),其余各突变模式均占5．88％(1/17),各模式与HPV-16 URR原型比较,同源性在98．50％～99．68％之间。在各位点的突变中,7192位(G→T)、7520位(G→A)的突变(100％,17/17)在新疆地区趋于恒定,该两处突变在亚裔美洲型(AA)中普遍存在,与病毒感染及宫颈癌发生相关；7729位(A→C)、7843位(A→G)、7792位(C→T)的突变可显著提高启动子的转录活性；其余突变尚未见报道,部分突变为新疆地区分离的HPV-16 URR所特有。结论中国新疆南部HPV-16 URR基因发生变异,HPV-16 URR的突变与HPV-16的系统发生以及新疆维吾尔族妇女高发宫颈癌存在一定关系。
- 余勐马正海王艳萍热西旦张富春
- 关键词：人乳头状瘤病毒16型宫颈癌上游调控区多态性
- 新疆株HPV-16 L1在真核细胞中表达水平的初探被引量：1
- 2008年
- 以密码子优化的人乳头瘤病毒16型(HPV-16)主要衣壳蛋白基因L1作为对照研究新疆株HPV-16L1在真核细胞中的表达水平。将新疆株HPV-16L1与密码子优化的HPV-16L1分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1;重组质粒通过水动力转染技术注入小鼠体内或采用脂质体法转染293T细胞,RT-PCR检测HPV-16L1在小鼠肝脏及293T细胞中的转录;Western印迹检测HPV-16L1在293T细胞中表达的蛋白质。结果显示新疆株及密码子优化的HPV-16L1在小鼠肝脏及293T细胞中均发生转录,但新疆株L1的表达水平显著低于密码子优化L1的表达水平。
- 许璐刘立鸿李轶杰张富春马正海
- 关键词：人乳头状瘤病毒16型密码子优化
- EgM123免疫犬血清抗体监测被引量：4
- 2011年
- 【目的】探索EgM家族重组蛋白(EgM 123)与弗氏佐剂结合免疫犬后血清抗体变化规律。【方法】利用间接ELISA法检测免疫组与对照组血清特异性抗体(IgG)的变化规律,并以Western-blotting方法进行验证。【结果】ELISA实验结果经统计学方法分析显示,不中和免疫组与对照组血清抗体时,特异性抗体IgG差异不显著(P>0.05),但中和血清抗体时,差异显著(P<0.05)。【结论】中和血清抗体,能够更明显的看到EgM家族重组蛋白(EgM 123)引起的犬特异性免疫应答。
- 赵莉张壮志石保新古努尔.吐尔逊米晓云吐尔洪.依米提王进成马正海张文宝李国庆
- 关键词：特异性抗体ELISA
- 重组溶瘤单纯疱疹病毒抑制小鼠结肠癌肺转移瘤的实验研究被引量：1
- 2020年
- 探讨携载p53和IL-12的重组溶瘤单纯疱疹病毒(Oncolytic Herpes Simplex Virus-1,oHSV)MH1004和MH1006对小鼠结肠癌皮下移植瘤和肺转移瘤的治疗作用.蚀斑法和MTT法分析重组oHSV对结肠癌细胞CT26的感染和溶瘤特性;小鼠背部皮下注射CT26建立皮下移植瘤模型,瘤内注射重组oHSV后分析小鼠血清中IL-12含量,观察肿瘤大小和小鼠生存率;小鼠尾静脉注射CT26建立肺转移模型,尾静脉注射重组oHSV后显微观察肺组织中肿瘤细胞浸润,观察肺脏肿瘤结节和小鼠生存率.重组oHSV能够感染CT26并高效复制和抑制肿瘤细胞.皮下移植瘤小鼠治疗12 d后观察到抑瘤效应,MH1004和MH1006组21 d时肿瘤体积(2477.31±2017.02 mm3和1414.36±1639.19 mm3)均极显著小于Mock组(7682.92±2648.74 mm3)(P<0.01),42 d时生存率(均为100%)明显高于HSV-wt和Mock组(均为50%);MH1006组小鼠血清中IL-12含量增加,第16 d时极显著高于Mock组(P<0.01);治疗后肿瘤消失小鼠血清中IL-12含量明显增高.肺转移瘤小鼠治疗后,MH1004和MH1006组小鼠肺脏肿瘤结节数在治疗5 d、9 d和13 d时均极显著低于Mock组(P<0.01),13 d极显著低于HSV-wt组(P<0.01),且o HSV治疗小鼠肺组织浸润的肿瘤细胞明显减少;60 d时MH1004组、MH1006组、HSV-wt组和Mock组的生存率依次为83.3%、66.7%、66.7%和50%,MH1004组和MH1006组死亡小鼠肺脏肿瘤结节少于Mock组和HSV-wt组.携载IL-12和p53的重组o HSV经尾静脉注射治疗小鼠结肠癌肺转移瘤效果显著,该研究为转移瘤治疗提供了新的思路.
- 张政彭瑞娟阿木提喀日·马木提刘晓娟王雪莹马正海
- 关键词：IL-12P53结肠癌肺转移瘤
- 咳嗽变异型哮喘13例临床误诊分析
- 2009年
- 资料与方法
临床资料2001-2007年收治咳嗽变异性哮喘（CVA）患者13例，其中男8例，女5例，年龄13～50岁，病程32天～6个月。既往有荨麻疹病史2例，药物过敏史3例。
- 张红艳马正海
- 关键词：咳嗽变异型哮喘误诊分析咳嗽变异性哮喘药物过敏史荨麻疹
- O型口蹄疫病毒VP1基因的体外表达鉴定与蛋白结构分析被引量：1
- 2005年
- 刘进金华利张富春李轶杰马正海涂亦娴路君张馨玉王宾
- 关键词：O型口蹄疫病毒VP1基因基因表达蛋白结构
- 细粒棘球绦虫Hsp70基因的克隆、表达及抗体制备被引量：3
- 2012年
- 【目的】克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,E.g)热休克蛋白家族基因Hsp70,在原核细胞中表达、纯化Hsp70蛋白并制备其特异性抗体。【方法】从包囊中分离原头蚴,提取RNA,RT-PCR扩增EgHsp70基因的cDNA,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株。通过改变诱导温度、IPTG浓度和诱导时间筛选出EgHsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件。并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白。纯化蛋白经皮下多点注射免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blotting检测血清效价和特异性。【结果】RT-PCR扩增获得EgHsp70基因的cDNA,酶切和测序结果表明EgHsp70基因已克隆入pMAL-p2x。表达条件优化实验结果筛选出Hsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当A600为0.6时,以0.3 mmol.L-1 IPTG于30℃条件下诱导表达4 h。SDS-PAGE显示Hsp70融合蛋白相对分子质量约为68.6kD,经麦芽糖亲和层析法纯化获得了Hsp70融合蛋白,其表达量为2.5 mg.L-1。Western blotting检测证明制备的抗血清与EgHsp70融合蛋白、原头蚴粗提抗原、E.granulosis虫体蛋白和E.granulosis虫体表面蛋白均能特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1﹕256 000。【结论】在大肠杆菌中表达并纯化获得了EgHsp70融合蛋白,并制备了高效价的兔抗EgHsp70蛋白抗血清,为研制包虫病疫苗及相关诊断试剂奠定了基础。
- 赵莉陈皓斐张文宝马正海张壮志张旭古努尔·吐尔逊米晓云金映红薛晶石保新
- 关键词：细粒棘球绦虫抗血清
- 单纯疱疹病毒1型囊膜糖蛋白gD在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫活性的鉴定
- 2014年
- 目的:在大肠杆菌中表达1型单纯疱疹病毒(HSV-1)囊膜糖蛋白gD,纯化重组蛋白并对其免疫活性进行鉴定。方法:将HSV-1 gD基因克隆入原核表达载体p ET-28b,利用异丙基-B-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒转化的大肠杆菌,探讨IPTG浓度、诱导时间、诱导温度对重组蛋白表达的影响;盐酸胍裂解变性包涵体,镍柱亲和层析法纯化gD蛋白,并对纯化后的蛋白进行透析复性;Western blot和ELISA检测gD蛋白的免疫活性。结果:酶切和测序结果表明gD基因克隆入p ET-28b载体。该重组质粒转化的大肠杆菌经IPTG诱导后重组蛋白主要以包涵体形式存在,大小约40k Da。gD蛋白诱导表达的最佳条件为0.5mmol/L IPTG于37℃诱导8h。镍柱亲和层析法纯化获得的gD蛋白总量为3.1mg/L,透析复性后获得的gD蛋白总量为1.3mg/L,复性率为41.37%。Western blot及ELISA检测表明表达的gD蛋白具有免疫活性。结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得具有免疫活性的HSV-1 gD蛋白,为进一步制备HSV-1诊断试剂和预防疫苗奠定了基础。
- 毛红艳马正海
- 关键词：1型单纯疱疹病毒GD大肠杆菌免疫活性
- 溶瘤病毒靶向肿瘤的分子机制被引量：4
- 2009年
- 溶瘤病毒(oncolytic virus)能特异性地感染和裂解肿瘤细胞,而并不损伤正常细胞。一些病毒,如呼肠孤病毒,本身即具有溶瘤特性和肿瘤靶向性。近年来,随着肿瘤和病毒分子生物学研究的深入以及现代生物技术的成熟,人们可以利用基因工程手段有目的地改造病毒以使其特异性靶向肿瘤细胞,其中的一些已开发为治疗肿瘤的药物应用于临床研究。溶瘤病毒作为抗肿瘤药物的关键在于提高其靶向性和溶瘤效应,本文主要就溶瘤病毒靶向肿瘤的分子机制作一些探讨。由于肿瘤细胞在遗传和生理特性方面显著区别于正常细胞(尤其是获得或丧失一些功能的突变,或一些基因功能的上调或下调),则溶瘤病毒可特异性地靶向肿瘤细胞中变异的分子或信号通路,如pRB、p53、干扰素、蛋白激酶R、表皮生长因子受体、Ras、Wnt、抗凋亡分子、低氧诱导因子和病毒受体等。溶瘤病毒靶向肿瘤的另一策略是通过删除病毒在正常细胞中复制所必需的基因而实现,而这些基因对于病毒在肿瘤细胞中复制是非必需的。另外,将病毒复制所必需的基因置于肿瘤特异性或组织特异性启动子控制之下,也能使溶瘤病毒靶向肿瘤细胞。
- 马正海
- 关键词：溶瘤病毒肿瘤
- HPV-16早期基因E1在果蝇细胞S2中的表达和鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:在果蝇S2细胞中表达人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E1。方法:PCR扩增HPV-16 E1全长,将PCR产物连接至pMD18-T并测序鉴定,继而将HPV-16 E1构建至果蝇表达载体pMT/Bip/V5-HisA中。大量提取pMT/Bip/V5/His-E1重组表达载体并与筛选质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,经杀稻瘟菌素(Blasticidin S)筛选获得具有抗性的稳定转染S2细胞。提取稳转S2细胞基因组DNA,PCR鉴定S2细胞中整合的E1。以终浓度为5μmol/L CdCl2诱导表达,收集上清进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果:双酶切及测序结果显示HPV-16 E1基因已克隆人重组质粒pMT/Bip/V5-E1,PCR和Western blot结果表明HPV-16 E1基因已整合至果蝇S2细胞基因组并稳定表达。结论:获得HPV-16 E1转染的果蝇S2细胞株,该细胞株可持续稳定表达E1蛋白。
- 赵晓飞刘琼郭景霞刘晓娟曾贝妮马正海
- 关键词：人乳头瘤病毒16型
