韩琳
- 作品数：10 被引量：24H指数：4
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会重点学科基金国家自然科学基金上海市卫生局重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白酶体抑制剂与肾间质纤维化被引量：1
- 2008年
- 蛋白酶体是一种庞大的、多价复合酶，泛素-蛋白酶体（Ubiquitn proteasome pathway，UPP）系统是细胞内依赖ATP的蛋白质水解系统。蛋白酶体抑制剂通过促进细胞凋亡、减少炎症细胞浸润及炎症因子的释放、降低细胞外基质的产生等延缓肾间质纤维化的进程，在保护肾脏方面有良好的应用前景。
- 韩琳王伟铭(审校)陈楠(审校)
- 关键词：蛋白酶体抑制剂肾硬化症
- 姜黄素对内毒素所致肾脏炎症的抑制作用被引量：8
- 2009年
- 目的:肾脏的急慢性炎症与肾脏疾病的进展密切相关,本研究拟探讨姜黄素对内毒素(LPS)所致肾脏炎症的抑制作用。方法:SPF级昆明种小鼠40只,鼠龄6～8周,体重20～25g。小鼠分为3组:(1)正常对照组:腹腔注射生理盐水;(2)模型组(LPS组):腹腔注射LPS(1mg/kg和5mg/kg);(3)治疗组(LPS+姜黄素):动物先腹腔注射姜黄素(1mg/kg或5mg/kg)3d,然后腹腔注射LPS1mg/kg或5mg/kg。于处理后6h取材,切取部分肾组织用10%甲醛固定,HE染色,进行病理学观察。部分肾组织用于MCP-1mRNA检测。将肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养于KSF培养液中,设正常对照组给予正常培养液,LPS刺激组(1ng/ml,100ng/ml和10μg/ml),LPS刺激+姜黄素(5μmol/L和50μmol/L)处理组,分别培养4h和24h后收集细胞,应用Real-timePCR检测各组细胞MCP-1的表达。ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1的表达。EMSA检测肾小管上皮细胞NF-κB的活性。结果:腹腔注射LPS(1mg/kg和5mg/kg)虽未引起光镜下肾脏组织的病理改变,但可显著增加小鼠肾脏MCP-1 mRNA的表达,分别增加20倍和26倍,而姜黄素处理可降低LPS所诱导的肾脏MCP-1 mRNA的表达,尤以LPS(1mg/kg)+姜黄素(1mg/kg)为明显(下降至基础值的2.5倍)。应用不同浓度的LPS刺激HK-2细胞4h,HK-2细胞MCP-1 mRNA表达量显著增加,且呈剂量依赖的效应(分别增加1.60、2.15和14.7倍)。而以100ng/ml的LPS刺激HK-2细胞4h,观察姜黄素的干预作用,可见不同浓度的姜黄素(5μmol/L和50μmol/L)可显著抑制LPS所诱导的HK-2细胞MCP-1 mRNA的表达,且以50μmol/L姜黄素干预组为明显。同时ELSA检测细胞上清液中MCP-1的表达结果相似。EMSA结果显示NF-κB的DNA结合活性随LPS的浓度增加而增加,而应用姜黄素预处理后,由LPS所诱导的增高的NF-κB的DNA结合活性随之下降。结论:早期给予姜黄素治疗,能明显改善LPS诱导的小鼠肾脏趋化因子MCP-1的表达,从而发挥其肾脏损伤的保护功能;而体外研究表明姜�
- 仲芳陈慧韩琳靳远萌王伟铭陈楠
- 关键词：姜黄素内毒素急慢性炎症肾脏疾病
- 脂多糖对小鼠肾脏炎症因子、过氧化物酶体增殖物活化受体γ及其辅调节因子表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:观察腹腔注射脂多糖(LPS)对小鼠肾脏单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPAR-γ)及其辅调节因子表达的影响。方法:雄性云南昆明小白鼠[(20±2)g]随机分成两组:LPS组,腹腔注射LPS(5mg/kg);对照组,腹腔注射等体积磷酸盐缓冲液。分别于0～72h后处死小鼠,检测血清尿素氮和肌酐变化;留取肾脏,EMSA法检测NF-κB及PPAR-γ的DNA结合活性;Real-time PCR法检测肾组织MCP-1、iNOS、PPAR-γ及其辅激活因子1(PGC-1)、类固醇受体辅激活因子1(SRC-1)、SRC-2、SRC-3及核辅抑制因子(NCoR)mRNA的表达;ELISA检测肾组织MCP-1蛋白表达,Western Blot检测肾组织核蛋白PPAR-γ表达;HE染色观察病理改变,免疫组织化学法观察肾组织巨噬细胞的浸润情况。结果:小鼠腹腔注射LPS后血清尿素氮升高明显(P<0.05),但血肌酐无明显变化。肾组织NF-κB的DNA结合活性在0.5h后即明显增高,而PPAR-γ的DNA结合活性早期增强,8h后开始减弱。与同时间点对照组及基础值相比,小鼠腹腔注射LPS后6h,12h及24h,肾组织MCP-1 mRNA及蛋白表达均显著增加(P<0.01);而iNOS mRNA表达在6h及12h后显著增加(P<0.01)。PPAR-γ及PGC-1 mRNA表达则显著下调(P<0.01),核内PPAR-γ蛋白含量早期升高,24h时显著下降(P<0.01)。SRC-1、SRC-2、SRC-3及NCoR mRNA的表达与对照组相比无显著差异。LPS作用后肾组织HE染色未见显著改变,免疫组化可见肾组织巨噬细胞浸润,最初主要分布在髓质肾小管周围,在48h及72h浸润更为明显,皮质肾小球周围也可见巨噬细胞浸润。结论:小鼠腹腔注射LPS后肾组织中NF-κB活性及相关炎症因子MCP-1和iNOS表达上调,肾组织内有明显的巨噬细胞浸润,表明处于炎症状态,而PPAR-γ及其辅激活因子PGC-1的表达下调可能与炎症发展相关。
- 陈慧韩琳仲芳王伟铭陈楠
- 关键词：脂多糖炎症
- 蛋白酶体抑制剂抑制肾间质成纤维细胞细胞外基质表达及其机制被引量：5
- 2008年
- 目的:本研究旨在观察蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激下的大鼠肾间质成纤维细胞的细胞外基质表达的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK/49F),利用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)分别观察MG132不同浓度直接刺激细胞和对TGF-β1(5ng/ml)诱导下产生的结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连结蛋白(FN)和III型胶原(ColIII)mRNA表达的影响。应用相同浓度的MG132(2.5μmol/L)预处理后,再加以TGF-β1分别刺激不同时间(0h,6h,12h,24h),同样用Realtime PCR检测上述因子的mRNA水平。利用Western blot观察MG132对TGF-β1诱导的FN和Smads蛋白表达的影响。ELISA方法观察MG132对TGF-β1诱导的FN蛋白分泌的影响。结果:MG132直接作用NRK/49F细胞即可明显降低CTGF、α-SMA和FN、ColIII的mRNA表达水平,随着MG132浓度(0.5、1、2.5、5μmol/L)增大,CTGF的mRNA表达均下降,分别为对照组的65%、46%、17%和20%;α-SMA的mRNA表达均下降,分别为对照组的10%、7%、4%和3%;FN的mRNA表达均下降,分别为对照组的54%、42%、25%和24%;ColIII的mRNA表达均下降,分别为对照组的30%、12%、5%和1%(均为P<0.05)。5ng/mlTGF-β1分别使CTGF、α-SMA和FN、ColIII mRNA表达增加为对照组的6.91、2.11、1.38和3.60倍(P<0.05),用MG132不同浓度(0.5、1、2.5、5μmol/L)预处理后,CTGF mRNA均下降,分别为对照组的3.30、2.84、1.06和0.74倍,α-SMA mRNA均下降,分别为对照组的0.50、0.31、0.28和0.19倍,FN mRNA均下降,分别为对照组的0.80、0.67、0.55和0.37倍,ColIII mRNA均下降,分别为对照组的0.57、0.35、0.28和0.05倍。MG132在各时间点均能使TGF-β1所引起的纤维化相关因子的mRNA表达水平下调。5ng/mlTGF-β1以时间依赖方式诱导p-Smad2、p-Smad3磷酸化增加,1h达到高峰。MG132预处理组p-Smad2、p-Smad 3及FN蛋白表达量与TGF-β1刺激组相比显著下降,各组Smad2/3蛋白表达无显著变�
- 韩琳陈慧朱冰冰靳远萌王伟铭陈楠
- 关键词：蛋白酶体抑制剂转化生长因子Β细胞外基质SMAD
- 蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞增殖、凋亡及其相关蛋白的影响
- 2009年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖、凋亡及其相关蛋白的影响。方法用5μg／L的TGF-β1作用于NRK-49F。不同浓度（0-5μmol／L）MG-132预处理NRK-49F细胞后，MTT法检测细胞增殖；应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率；DNA凝胶电泳法观察细胞的凋亡情况；Western印迹检测p53、p27、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的变化。结果TGF-β1（5μg／L）可促进NRK-49F细胞增殖，而MG-132（0．25-5μmol／L）呈剂量依赖性地抑制这种效应，使细胞生长停滞在G1期。TGF-β1（5μg／L）单独不能诱导NRK-49F的凋亡（3．880％±0．365％比4．723％±1．582％），而MG-132（0．10、0．25、0．50、0．75、1．00、2．50μmol／L）预处理可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡（调亡率分别为8．8％、18．7％、22．8％、31．3％、37．7％、38．9％）。MG-132（2．5μmol／L）＋TGF-β1组及MG-132（2．5μmol／L）组在DNA电泳中呈典型的梯状条带现象。Western印迹结果显示，MG-132可剂量依赖性地激活TGF-β1诱导的细胞周期及凋亡相关蛋白p53蛋白表达，促进caspase-3的活性片段产生，Bcl-2表达下调，并能使Bax和p21表达上调，但对p27没有明显的影响。结论MG-132可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖，并促其凋亡。该作用可能与MG-132对细胞周期及凋亡相关蛋白p53、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关，提示泛素蛋白酶体抑制剂可能成为将来防治。肾间质纤维化的一个潜在的治疗手段。
- 朱冰冰靳远萌韩琳陈慧王伟铭陈楠
- 关键词：转化生长因子Β1成纤维细胞细胞增殖蛋白酶体抑制剂
- 姜黄素抑制内毒素所致肾脏炎症的作用基因表达谱的分析研究
- 目的:肾脏的急慢性炎症与肾脏疾病的进展密切相关,本研究拟通过基因芯片技术及病理学方法探讨姜黄素对内毒素脂多糖(LPS)所致肾脏炎症的保护作用的机制。方法:SPF级昆明种小鼠9只,鼠龄6～8周,体重20～25g。小鼠分为3...
- 仲芳陈慧韩琳郭山脉王伟铭陈楠
- 关键词：姜黄素脂多糖肾脏炎症基因芯片
- 文献传递
- 姜黄素抑制内毒素所致肾脏炎症的作用基因表达谱的分析研究被引量：4
- 2010年
- 目的:肾脏的急慢性炎症与肾脏疾病的进展密切相关,本研究拟通过基因芯片技术及病理学方法探讨姜黄素对内毒素脂多糖(LPS)所致肾脏炎症的保护作用的机制。方法:SPF级昆明种小鼠9只,鼠龄6～8周,体重20～25 g。小鼠分为3组:(1)正常对照组:腹腔注射生理盐水;(2)模型组(LPS组):腹腔注射LPS(5 mg/kg);(3)治疗组(姜黄素+LPS):动物先腹腔注射姜黄素(5 mg/kg)3 d,然后腹腔注射LPS 5 mg/kg。于处理后6 h取材,切取部分肾组织用10%甲醛固定,HE,PAS染色及免疫组化,进行病理学观察;利用Affymetrix公司生产的mouse 430基因芯片分别检测正常对照组、模型组、姜黄素治疗组肾组织基因表达谱,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析。结果:肾组织基因表达谱显示,符合LPS刺激后基因表达水平上升,并经姜黄素治疗后表达水平下降的共有148个Affy IDs(A组),而呈相反趋势的有133个Affy IDs(B组)。在前组的差异基因中,统计筛选得21个Gene Ontology(GO)的功能节点(P≤0.01)。在生物过程角度方面,其中富集量最高的为调节巨噬细胞活化和巨噬细胞活化相关基因。在细胞定位角度方面,有4个GO的功能节点(P≤0.01),在分子结构角度方面,有7个GO的功能节点(P≤0.01)。在B组中,在生物学过程角度方面,有2个GO的功能节点(P≤0.01);在细胞定位角度方面,有1个GO的功能节点(P≤0.01)。研究还发现了姜黄素抑制内毒素所致肾脏炎症作用机制的信号通路及可能的靶位基因。结论:利用基因芯片技术在阐明了炎症状态下肾脏基因的表达谱同时,证实姜黄素治疗可以改变其基因的表达谱,为进一步研究肾脏炎症纤维化的分子发病机制和姜黄素治疗的作用机制创造了条件。
- 仲芳陈慧韩琳郭山脉王伟铭陈楠
- 关键词：姜黄素脂多糖肾脏炎症基因芯片
- 白细胞介素1β对肾小管上皮细胞过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ及辅调节因子表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨白细胞介素1β（1L-1β）介导的炎性反应中过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ（PPAR-γ）及其辅调节因子的表达变化，分析其相互作用机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2），应用IL-1β作用于HK-2细胞，收集细胞总mRNA、胞核蛋白和细胞培养上清液。应用实时定量PCR、Western印迹法、ELISA法、凝胶电泳迁移率实验（EMSA）法分别从mRNA水平、蛋白质水平、DNA结合活性水平检测PPARγ及其辅调节因子（包括辅激活因子和辅抑制因子）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达变化。结果不同浓度的IL-1β（0～20μg／L）刺激24h后，PPARγ、辅激活因子SRC-1、SRC-2和PGC-1 mRNA表达水平均呈总体下调趋势（P〈0．05），同时辅抑制因子NCoR呈显著上调趋势（P〈0．05）。以10μg／L作为IL-1β最佳刺激浓度，SRC-2和PGC-1的mRNA水平在刺激1h后就分别显著下调了57％（P〈0．01）和48％（P〈0．01）；SRC-1的mRNA水平在刺激2h后显著下调了43％（P〈0．05），而PPARγ在刺激4h时下调了55％（P〈0．01）；NCoR在刺激8h后出现显著上调（为对照组的2．17倍，P〈0．05），之后又缓慢下降，至24h仍高于对照组，但差异无统计学意义。Western印迹结果显示，PPARγ的蛋白表达在IL-1β（10μg／L）刺激4h后出现显著下降。ELISA结果显示MCP-1的分泌水平呈持续增高，8h后达到最高值[（160．56±2．8）ng／L，P〈0．011，至24h仍为（50．82±1．25）ng／L（P〈0．01）。EMSA结果显示PPARγ的DNA结合活性呈总体减弱趋势，至24h达到最低值，而NF—κB的DNA结合活性均呈总体增强趋势，至24h达到高峰。结论在肾脏炎性反应进程中，IL-1β诱导的NF—κB炎性通路激活可引起PPARγ及辅激活因子的表达下调，MCP-1和辅抑制因子的表达上调。不仅PPARγ，其辅调节因子也积极参与肾脏炎性反应。
- 靳远萌陈慧朱冰冰韩琳王伟铭陈楠
- 关键词：白细胞介素1PPARΓ单核细胞化学吸引蛋白质1
- 姜黄素抑制内毒素所致肾脏炎症的作用基因表达谱的分析研究
- 仲芳陈慧韩琳郭山脉王伟铭陈楠
- 姜黄素对脂多糖刺激的肾小管近端上皮细胞分泌的相关炎症因子的影响被引量：7
- 2009年
- 目的:本研究旨在观察姜黄素对脂多糖(LPS)刺激下的人肾小管近端上皮细胞分泌的单核细胞趋化因子(MCP-1)及白细胞介素8(IL-8)的表达水平变化,并初步探讨其作用机制。方法:将肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养于KSF培养液中,设正常对照组给予正常培养液,LPS刺激组(1ng/ml,100ng/ml和10μg/ml),姜黄素干预组(LPS100ng/ml+姜黄素5μM或50μM),分别培养4～24h后收集细胞,应用Real-time PCR检测各组细胞MCP-1及IL-8的表达。ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1及IL-8的表达。结果:在不同浓度的LPS刺激HK-2细胞24h后即可明显升高MCP-1及IL-8的mRNA表达水平,随着LPS浓度(1ng/ml,100ng/ml和10μg/ml)增加,MCP-1 mRNA表达分别上升为对照组的1.74、2.15和14.7倍(P<0.01);IL-8 mRNA表达上升为对照组的2.74、5.4和16.45倍(P<0.01)。而以100ng/ml的LPS刺激HK-2细胞4～24h,观察姜黄素的干预作用,可见不同浓度的姜黄素(5μM和50μM)均可显著抑制LPS所诱导的HK-2细胞MCP-1及IL-8 mRNA的表达,且以50μM姜黄素干预组为明显。同时ELISA检测细胞上清液中MCP-1蛋白水平,可见5μM姜黄素组在24h时较相应对照组下降9.5%(P<0.05),而50μM姜黄素组在8h时即较相应对照组下降19.5%(P<0.01)。而在4h和12h时,5μM的姜黄素干预组较相应对照组IL-8的表达下降的11.72%(P<0.05)和7.58%(P<0.01),在50μM姜黄素干预组则为32.90%和18.79%(P<0.01)。结论:姜黄素可抑制LPS所诱导的肾小管上皮细胞MCP-1及IL-8的表达,提示姜黄素在肾脏炎症过程中具有抑制肾小管上皮细胞炎症因子分泌及潜在抗纤维化作用。
- 仲芳陈慧韩琳靳远萌王伟铭陈楠
- 关键词：姜黄素脂多糖肾小管上皮细胞炎症因子
