赵瑾 作品数:6 被引量:13 H指数:2 供职机构: 宁夏医科大学检验学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 宁夏高等学校科学技术研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
miR-1247-5p对Smad2基因的靶向调控作用 2016年 目的利用miR-1247-5p过表达模拟物mimics,研究miR-1247-5p对TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的靶向调控作用。方法合成模拟miR-1247-5p过表达的模拟物mimics,及抑制miR-1247-5p表达的抑制物inhibitors;同时构建与miR-1247-5p互补靶基因Smad2的3'非翻译区,将其克隆到线性化的Report荧光报告载体中。将测序鉴定阳性的report-Smad2 3'-UTR重组质粒,与miR-1247-5p的mimics/inhibitors共转染至HEK-293T细胞,通过relative luciferase activity实验验证靶向关系,并通过Western blot实验进一步检测Smad2蛋白表达水平。结果成功构建report-Smad2 3'-UTR重组质粒,Western blot实验表明转染miR-1247-5p mimics组中Smad2蛋白表达下调(P<0.05);而转染miR-1247-5p inhibitors组中,Smad2蛋白表达上调(P<0.05)。结论证实miR-1247-5p直接靶向TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的表达,在蛋白水平对其进行调控,为进一步研究miRNA在细胞通路中的调控作用提供了依据。 张议心 王利新 徐广贤 杨丽 赵瑾 郭文伟 刘新兰关键词:TGF-Β信号通路 SMAD2基因 肿瘤 犬细小病毒宁夏株的分离与鉴定 2015年 本试验采集宁夏地区疑似犬细小病毒感染病犬的粪便拭子,经过预处理后同步接种胎猫肾细胞(FK81),盲传3代后发现FK81细胞出现明显的细胞毒性改变(CPE)。冻融收获病毒后,对分离出来的病毒进行电镜观察、间接免疫荧光试验(IFA)检测、特异性PCR鉴定及VP2全基因序列扩增分析,成功分离培养出1株犬细小病毒(CPV)。 杨丽 段相国 刘宏鹏 徐广贤 郭文伟 张议心 赵瑾关键词:犬细小病毒 VP2基因 雷帕霉素对RAW264.7巨噬细胞10种与细胞自噬相关的miRNAs表达的影响 被引量:3 2014年 目的:为了探讨雷帕霉素对RAW264.7细胞miR-30b、miR-200a和miR-17-5p等10种与细胞自噬相关的miRNAs表达水平的影响,为进一步研究miRNAs调控细胞自噬的机制提供理论依据。方法:雷帕霉素刺激RAW264.7巨噬细胞后,分别在2、4、6、8 h提取细胞small RNA,利用miRNA特异性的茎环引物反转录成cDNA,采用Real-Time PCR检测miR-30b、miR-30c、miR-106a、miR-214、miR-183、miR-200a、miR-376c、miR-17-5p、miR-142-3p、miR-377分子的表达情况。结果:雷帕霉素作用RAW264.7细胞后,miR-17-5p、miR-106在2、4、6 h表达上调(大于2.1倍P<0.05),miR-214在2、8小时表达上调(>2.4倍,P<0.05),miR-30b、miR-30c、miR-183、miR-200a、miR-376c、miR-142-3p在2、6、8 h表达上调(>2.4倍,P<0.05),而miR-183、miR-200a在4 h表达下调(>2.1倍,P<0.05),miR-30b在8小时则是显著性表达下调(大于50倍,P<0.05),miR-377在4 h则是表达上调(>2.5倍,P<0.05),但在2、8 h则是显著表达下调(>50倍,P<0.05)。结论:雷帕霉素刺激RAW264.7巨噬细胞后miR-200a、miR-30b、miR-377、miR-30c、miR-376c、miR-17-5p有显著性变化,说明这些miRNAs可能通过调控某些自噬相关基因在细胞自噬过程中发挥着重要作用。 张涛 郑锡铭 周林林 刘鑫 赵瑾 徐广贤关键词:MIRNA 雷帕霉素 REAL-TIME 犬瘟热病毒的分离与鉴定 被引量:6 2016年 本试验收集了疑似犬瘟热病毒(CDV)感染病犬的粪便拭子,预处理后接种于非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离培养。对分离出的病毒进行毒力测定、电镜形态学观察、特异性基因鉴定和N基因全长扩增、间接免疫荧光(IFA)检测。结果显示,在Vero细胞盲传至第4代,90%以上细胞出现稳定的细胞毒性改变(CPE);病毒粒子有囊膜,形状不规则;RT-PCR成功扩增出特异性基因和N基因。IFA结果显示,在细胞胞质中可观察到特异性绿色荧光。结果表明,本试验成功分离并鉴定出1株宁夏地区CDV毒株。 杨丽 徐广贤 段相国 张议心 郭文伟 赵瑾关键词:犬瘟热病毒 N基因 基因扩增 雷帕霉素对RAW264.7细胞6种miRNAs表达的影响及miR-20a对ATG16L1的靶向调控作用 被引量:2 2016年 目的:探讨雷帕霉素对miR-17-92簇中的6种miRNAs表达的影响,及miR-20a对ATG16L1基因的靶向调控作用。方法:利用qRT-PCR检测雷帕霉素对RAW264.7细胞miR-17-92簇中的miR-20a等6种miRNAs的表达水平;通过双荧光素酶报告系统、Western blot,验证miR-20a对ATG16L1的靶向调控关系。结果:与正常组相比,雷帕霉素组RAW264.7细胞的miR-17、miR-18a、miR-20a表达水平显著上调(P<0.05);3-MA组RAW264.7细胞的miR-20a表达水平显著下调(P<0.05)。双荧光素酶报告系统结果显示,miR-20a可靶向ATG16L1-3'-UTR,抑制其表达;Western blot结果显示,miR-20a能明显抑制ATG16L1蛋白的表达,说明miR-20a可靶向抑制ATG16L1的表达,参与调控细胞自噬过程。结论:miR-20可靶向抑制Atg16L1的表达,参与调控RAW264.7细胞自噬过程。 赵瑾 刘宏鹏 段相国 张爱君 丁淑琴 徐广贤关键词:靶向调控 细胞自噬 5-杂氮-2'脱氧胞苷对肝癌细胞SMMC-7721 miR-1247-5p基因表达及其启动子区甲基化的影响 被引量:2 2016年 目的观察正常人肝细胞系LO_2和肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p的表达,研究去甲基化药物5-杂氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p表达及其基因启动子区Cp G岛甲基化水平的影响。方法用不同浓度(0、5和10μmol/L)去甲基化药物5-杂氮-2'脱氧胞苷处理SMMC-7721细胞,用甲基化特异性PCR法检测miR-1247-5p基因启动子区甲基化水平;用SYBR Green qReal Time PCR法检测miR-1247-5p的表达。结果与正常人肝细胞系LO_2相比,肝癌细胞系SMMC-7721中miR-1247-5p表达降低(P<0.05)且其基因启动子区Cp G岛甲基化水平高;经去甲基化药物干预后miR-1247-5p的表达较对照组有明显上调(P<0.01),且其基因启动子区Cp G岛甲基化水平降低。结论 miR-1247-5p基因甲基化调控可能参与了肝癌的发生。 郭文伟 徐广贤 段相国 赵瑾 杨丽 张议心 魏军关键词:肝癌细胞 甲基化