贺超
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 淋病奈瑟菌主要外膜蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果观察被引量：6
- 2006年
- 目的克隆淋病奈瑟菌孔蛋白I B型(PIB)基因并构建其真核表达载体pC I-PIB,了解pC I-PIB免疫接种后诱导小鼠特异性体液和细胞免疫反应的效果。方法采用聚合酶联反应(PCR)扩增淋病奈瑟菌主要外膜蛋白PIB全长基因片段(960 bp),构建表达PIB的真核表达载体pC I-PIB。pC I-PIB肌内注射免疫BALB/c小鼠65只,100μg次//只,亲和素-生物素-过氧化酶复合物(ABC)法检测其中10只pC I-PIB免疫小鼠肌细胞中PIB的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)和特异性淋巴细胞增殖反应(MTT)法检测余下pC I-PIB免疫小鼠的特异性体液和细胞免疫应答效果。采用玻片凝集试验和补体溶菌试验检测pC I-PIB免疫小鼠血清的抗菌活性。结果PCR可扩增出预期大小的全长PIB基因片段(960 bp),与报道PIB基因序列(GenBank No:AF090801)比较,重组质粒pC I-PIB中目的插入片段的核苷酸序列同源性可达99.28%。免疫小鼠的肌细胞能摄取pC I-PIB并表达PIB。pC I-PIB免疫小鼠的血清中可产生较高效价的特异性IgG(1∶4000),并产生特异性T细胞增殖反应,增殖指数(4.031)明显高于对照组(1.127)(t=71.71,P<0.05)。pC I-PIB免疫小鼠血清及阴道冲洗液均有凝集淋病奈瑟菌的作用,在补体参与下可杀灭细菌。结论本研究成功地构建了淋病奈瑟菌PIB基因重组真核表达载体pC I-PIB。pC I-PIB接种小鼠后可有效地引起特异性体液和细胞免疫反应,具有作为淋病奈瑟菌候选DNA疫苗的应用前景。
- 廖芳贺超刘海鹏宋启发严杰
- 关键词：细菌外膜蛋白质类免疫性
- 淋病奈瑟菌孔蛋白PIA真核表达系统的构建及序列分析
- 2006年
- 目的:构建淋病奈瑟菌孔蛋白PIA(Porin IA)基因的真核表达系统,为淋病DNA疫苗的研究提供材料。方法:PCR技术扩增淋病奈瑟菌捷克标准株的PIA基因片段,将其定向插入真核表达载体pC I-neo多克隆位点中,构建重组表达载体。并用酶切分析、PCR扩增及序列测定方法,对重组载体进行鉴定。结果:淋病奈瑟菌PIA基因被正确克隆到真核表达载体pC I-neo中,测序结果与Genebank中AF090819等菌株序列有99.99%同源性。结论:真核表达系统(pC I-PIA)构建成功。
- 贺超廖芳刘海鹏刘丽江
- 关键词：淋病奈瑟菌真核表达
- 淋球菌孔蛋白PIB和PIA融合蛋白真核表达载体构建及体内表达
- 2006年
- 目的克隆淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因并构建融合蛋白真核表达质粒pCI-PIB-PIA,了解pCI-PIB-PIA能否被小鼠骨骼肌细胞摄取并表达。方法采用PCR方法从质粒pET-PIB和pET-PIA中获得孔蛋白PIB和PIA全长DNA片段,构建表达融合蛋白PIB和PIA的真核表达载体pCI-PIB-PIA。pCI-PIB-PIA肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ABC法检测pCI-PIB-PIA免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达。结果PCR可扩增出预期大小的全长PIB和PIA基因片段。与GenBank报道的PIB和PIA序列比较,重组质粒pCI-PIB-PIA中目的插入片段的核苷酸序列同源性达到99%以上。免疫小鼠的肌细胞能摄取pCI-PIB-PIA并表达PIB-PIA融合蛋白。结论本研究成功地构建了淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因重组真核表达载体pCI-PIB-PIA;pCI-PIB-PIA接种小鼠后可见免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达,该结果可作为淋球菌多价DNA疫苗的研究基础。
- 廖芳贺超戴翔宋启发熊萍
- 关键词：淋球菌孔蛋白融合蛋白
- 淋球菌孔蛋白疫苗在动物体内诱导的免疫应答
- 2005年
- 目的:观察淋球菌孔蛋白疫苗免疫日本大耳白兔后所诱导的免疫应答。方法:兔背皮下注射经原核构建表达并纯化的淋球菌孔蛋白B,ELISA动态检测免疫后大耳兔血清抗体滴度的变化及最高效价;后腿皮内注射孔蛋白B,观察迟发型超敏反应(DTH)、免疫血清体外玻片凝集及抗菌作用。结果:初次免疫后2周,大耳兔体内已产生抗体,但效价较低;第2次免疫后2周血清效价达到1∶2000;第3次免疫后2周血清抗体水平成倍升高,效价为1∶4000;第4次免疫后2周血清最高效价达到1∶12000。大耳兔腿部发生DTH反应,出现明显红肿,于注射后第4天消退。血清体外凝集试验呈阳性,加入补体后发生淋球菌菌体裂解。结论:淋球菌孔蛋白疫苗可诱发动物特异性免疫应答,这为淋病疫苗的进一步研究提供了理论和实验依据。
- 廖芳贺超刘丽江宋启发万沐芬杨振德李雍龙
- 关键词：淋球菌孔蛋白免疫应答疫苗
- 淋病奈瑟菌感染动物模型的建立及探讨被引量：1
- 2005年
- 目的尝试建立淋球菌感染动物模型,为研究淋球菌致病机制提供良好的动物模型。方法采用野生株淋球菌FA1090接种雌二醇预处理的雌性BALB-c小鼠,小鼠生殖道拭子接种WGC选择培养基培养分离淋球菌,取小鼠阴道分泌物涂片Gram染色观察有无淋球菌,并用瑞氏染色观察小鼠阴道分泌物中多形核白细胞(polymorphonuclearleukocytes,PMN)的数目。结果受试小鼠生殖道中淋球菌平均存活了8d(2×106CFU接种量),阴道分泌物涂片Gram染色可见淋球菌粘附在上皮细胞上,88%的受试小鼠发生了炎症。结论成功建立了淋球菌感染的动物模型,为研究淋球菌的致病机制、毒力及抗菌药物的研究奠定了基础。
- 刘海鹏廖芳贺超万沐芬
- 关键词：淋病奈瑟菌生殖道感染动物模型
