葛银林
- 作品数：130 被引量：272H指数：9
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- KDR siRNA对乳癌细胞凋亡和NES1与RUNX3基因甲基化影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨体外水平利用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)敲减含激酶插入区受体(KDR)基因治疗乳癌的可行性和特异性。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000TM作为转染试剂,将针对人KDR基因的siRNA转染人乳癌细胞株MCF-7敲减KDR基因的表达。通过Hoechst 33258染色观察MCF-7细胞的凋亡情况;采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测NES1基因和RUNX3基因甲基化状态和mRNA的转录水平。结果靶向KDR的siRNA转染MCF-7细胞后可诱导细胞凋亡,NES1基因和RUNX3基因甲基化程度降低,出现非甲基化条带,同时mRNA表达上调。结论KDR siRNA在体外能逆转MCF-7细胞的NES1基因和RUNX3基因甲基化,并诱导细胞凋亡。
- 许秀娥徐宏伟葛银林张金玉冯翠萍
- 关键词：MCF-7细胞血管内皮生长因子受体2甲基化
- 神经母瘤细胞裸鼠模型建立及2,3-吲哚醌抗肿瘤研究
- 侯琳邢晓波张金玉田润华葛银林岳旺
- 该项目为青岛市科技局资助项目，项目编号为06-2-2-5-nsh。 2,3-吲哚醌(以下简称吲哚醌)是存在于海洋生物和动植物中的天然活性物质，化学结构明确，是单一成分而非混合成分，是天然存在于龙虾并维持其生存所必需的海...
- 关键词：
- 关键词：2,3-吲哚醌裸鼠模型抗肿瘤机制
- n-3多不饱和脂肪酸对小鼠体内肥胖相关基因的影响
- 2017年
- 研究n-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fat acids,PUFA)对小鼠体内肥胖相关基因的影响,探讨其作用机理。方法:用fat-1转基因小鼠作为实验模型,实验随机分为fat-1转基因组与野生型组,自由摄食饮水6周,每周记录小鼠体质量,实验结束时取小鼠脂肪,用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测瘦素 (Leptin)、解耦联蛋白-1(UCP-1)、解耦联蛋白-2(UCP-2)mRNA的水平;并提取脂肪中的蛋白,用western blot 检测蛋白水平。结果:转基因组与野生型组相比,转基因组体质量明显降低(P<0.05),Leptin mRNA水平升高(P<0.05),UCP-1,UCP-2mRNA水平明显升高(P<0.05),蛋白水平与mRNA水平一致。结论:n-3多不饱和脂肪酸可以使小鼠体重减轻的机制可能通过UCP-1和UCP-2调节, 可能不通过Leptin调节.
- 江亚娟葛银林张金玉
- 关键词：N-3多不饱和脂肪酸肥胖瘦素
- 有甲状腺大的先天性甲状腺功能减退症患儿双氧化酶成熟因子1基因突变研究被引量：2
- 2016年
- 目的对山东地区有甲状腺大的先天性甲状腺功能减退症（congenital hypothyroidism，CH）患儿双氧化酶成熟因子1（DUOXA1）基因进行突变筛查，阐明DUOXA1基因突变类型及特点，为CH的基因诊断及治疗提供理论依据。方法通过山东省新生儿筛查系统选取山东省52例有甲状腺大的CH患儿及100例健康对照者，抽取外周静脉血，提取白细胞全基因组DNA，采用8对序列特异性引物，运用PCR扩增与直接测序法对DUOXA1基因的全部编码序列（codingsequence，CDS）进行突变筛查。测序结果与DUOXA1基因的美国国立生物技术信息中心参考序列：NG_033105．1进行比对，并对发现的单核苷酸多态性（single nucleotide polymor—phisms，SNP）位点的基因频率进行，检验。结果在52例有甲状腺大的CH患儿及100例健康对照CDS区序列中均未发现突变，但在9例患儿及11例健康对照中的第7外显子发现1个SNP位点（rs75981505，c．398G〉T）为错义突变，导致密码子由CGC突变为CTC，相应133位氨基酸由精氨酸变为组氨酸（p．Arg133His）。2组SNP基因频率比较，差异无统计学意义（17．3％比11．0％,x^2=1．24，P〉0．05）。结论DUOXA1基因在山东地区有甲状腺大CH患儿突变率低，可能不是该地区伴甲状腺大CH患儿的主要病因。
- 董丽萍臧红伟韩文秀臧玉翠阎胜利刘世国葛银林
- 关键词：先天性甲状腺功能减退症突变
- 抑制MCF-7乳癌细胞VEGF表达对树突细胞免疫功能影响
- 2009年
- 目的探讨抑制MCF-7乳癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达对树突细胞(DC)免疫功能的影响。方法针对VEGF基因设计小干扰RNA(siRNA),以脂质体转染法将siRNA导入乳癌细胞MCF-7,RT-PCR检测干扰VEGF基因后mRNA的表达,Western blotting法检测VEGF蛋白的表达,观察VEGF基因沉默效果。以MCF-7乳癌细胞的培养上清和干扰VEGF基因后MCF-7乳癌细胞培养上清液同时添加粒-单细胞集落刺激因子、白细胞介素-4、肿瘤坏死因子α培养正常异基因DC,利用MTT法和Hoechst33258检测DC刺激正常外周血T细胞增殖的能力及DC激发的细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性;ELISA法检测DC培养上清液中白细胞介素12(IL-12)及DC与外周血单个核细胞(PBMC)共同培养液中干扰素γ(IFN-γ)的含量。结果VEGF基因经siRNA处理24 h后,MCF-7乳癌细胞VEGF mRNA和蛋白的表达明显降低,其诱生的DC与MCF-7乳癌细胞培养上清液诱生的DC相比,siRNA处理DC刺激T淋巴细胞增殖能力、CTL杀伤活性以及DC分泌IL-12和协同刺激外周血PBMC分泌INF-γ的能力明显增强。结论siRNA可靶向抑制乳癌MCF-7细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7细胞上清液对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低。
- 王海燕谭丽莉江彩玉葛银林
- 关键词：树突细胞MCF-7细胞
- 靶向癌基因和协同fat-1基因的抗癌药物研究
- 葛银林张金玉薛美兰田润华郑征
- 该研究属于基础医学、生物药物学范畴，方向为肿瘤基因治疗。基因治疗是现代医学前沿的领域，难度大、水平高，但其理论意义重大、应用前景广阔。该项目根据肿瘤的发病原因而设计的药物方法。血管内皮生长因子(VEGF)家族与肿瘤的代谢...
- 关键词：
- 关键词：抗癌药物细胞增殖肿瘤基因治疗
- 靶向VEGF基因的siRNA联合树突状细胞介导的CTL对MCF-7细胞作用的研究
- 2010年
- 目的探讨靶向血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的小干扰RNA(siRNA)联合负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)致敏的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的联合抗瘤作用。方法体外应用靶向VEGF基因最佳转染浓度(100nmol/L,增加浓度不再提高沉默作用)的siRNA联合负载人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)抗原的DC介导的CTL(siRNAVEGF+CTL组)共同作用于MCF-7细胞,同时设立空白对照组和空白+CTL组(只加无血清无抗生素培养基);脂质体组和脂质体+CTL组(只加LipofectamineTM2000);siRNAVEGF-组(100nmol/LsiRNA);siRNASCR组和siR-NASCR+CTL组(100nmol/LsiRNASCR),每组做6个平行孔,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测siRNAVEGF+CTL组和各对照组肿瘤杀伤活性(n=6),Hoechst33258核染色观察细胞的凋亡(n=3)。结果siRNAVEGF+CTL组、siR-NAVEGF-组siRNASCRCTL组肿瘤杀伤活性分别为99.37%,51.17%和43.94%,siRNAVEGF+CTL组与对照组比较可明显杀伤肿瘤细胞,瘤细胞几乎完全溶解,Hoechst33258显示细胞核呈明显的细胞凋亡改变。结论体外实验显示靶向VEGF的siRNA联合负载肿瘤抗原DC致敏的CTL能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,二者的联合应用抗瘤效果显著。
- 王海燕李延年董永孙波张树超葛银林
- 关键词：树突状细胞
- 体内应用化学修饰siRNA沉默血管KDR基因抑制乳腺癌生长
- 根据 NCBI 数据库中鼠 KDR mRNA 的序列．确定 KDR siRNA 序列：5′-tgcggcgguggugacasuatt-3′(正义链)．5′ -uacugucaccaccgccgcatt-3′(反义链)．...
- 葛银林张晓静张金玉候琳薛美兰
- 文献传递
- 改变细胞膜脂肪酸组成防治大肠癌的基因治疗研究被引量：1
- 2010年
- 目的:利用脂肪酸去饱和酶基因fat-1改变细胞膜脂肪酸组成,进行大肠癌的基因治疗研究。方法:将fat-1基因插入腺病毒载体中,与骨架载体同源重组,构建腺病毒重组载体(Ad-GFP-fat1),通过包装细胞系(293)产生的腺病毒,感染人大肠癌株HT-29细胞。提取细胞的总RNA,以fat-1基因的反义mRNA作探针,用Northern Blot检测fat-1基因在HT-29细胞内的表达。以流式细胞仪对HT-29细胞G_0/G_1期、S期、G_2/M期所占比例进行检测,分析fat-1基因对HT-29细胞增殖和凋亡的影响。以气相色谱分析仪分析fat-1基因对HT-29细胞细胞膜n-6 PUFAs和n-3 PUFAs含量及n-6/n-3PUFAs比例的影响。将HT-29细胞皮下接种于裸鼠右前肢腋下,建立裸鼠HT-29大肠癌细胞皮下移植瘤模型。成瘤后进行治疗实验,经连续5次治疗,于最后一次治疗后第3天处死小鼠,取肿瘤称重。分析fat-1基因裸鼠体内抗肿瘤效果。结果:通过基因重组技术,得到高滴度的含fat-1基因的重组病毒;腺病毒介导的fat-1基因能够在HT-29细胞中有效表达;fat-1基因的表达可降低HT-29细胞膜n-6/n-3PUFAs的比例,有效抑制HT-29细胞增殖,促进细胞凋亡并能抑制裸鼠移植瘤的发展。结论:fat-1基因的表达,可抑制HT-29细胞的体内外增殖并诱导细胞凋亡,在大肠癌基因治疗中可能具有良好利用价值。
- 李茂刚夏立建葛银林李馨
- 关键词：腺病毒载体细胞膜
- VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响被引量：10
- 2006年
- 目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响．方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA．以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞．采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况．流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化．结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体．siRNA作用于SGC-7901细胞．其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0／G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0／G1期(siRNA1组,siRNA2组G0／G1期VS 对照组G0／G1期:75．04％,76．52％ vs 58．37％, P<0．01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17．82％,16．73％ vs 39．52％,P<0．01),而其他组则无明显变化．VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0．638±0．078,0．656±0．085 vs 0．941±0．046, P<0．01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164．7±22．7,166．3±26．6 vs 414．0±61．5, P<0．01),而其他组siRNA转染后则无上述作用．结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖．
- 徐文华葛银林徐宏伟王秀丽耿芳宋
- 关键词：SGC-7901RNA干扰血管内皮细胞血管内皮生长因子
