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一种人血小板代用品及其制备方法: 本发明公开了一种人血小板代用品及其制备方法。本发明所提供的人血小板代用品，是由猪血小板膜糖蛋白和脂类组成的猪血小板糖蛋白脂质体。制备人血小板代用品的方法，包括以下步骤：(1)从猪血中提取血小板溶液；(2)纯化步骤(1)中...; 王字玲张玉华王波苏丽王广义; 文献传递

猪血小板膜糖蛋白的纯化和鉴定: 目的:分离纯化猪血小板膜糖蛋白并对其进行鉴定。方法:差速离心法分离猪血小板,1%TritonX-100溶解膜蛋白,麦胚凝集素亲和层析纯化糖蛋白(0.3MN-乙酰葡萄糖胺洗脱),用鼠抗人GPIb单抗PHN89做点印迹,聚丙...; 张玉华苏丽王波赵敬湘王广义王字玲; 关键词：血小板糖蛋白麦胚凝集素血小板聚集; 文献传递

血小板糖蛋白GPⅠbα vWF结合域在酵母中的表达鉴定被引量：2: 2004年; 目的 :实现重组糖蛋白GPⅠbαvWF结合域在巴氏毕赤酵母中的表达。方法 :PCR从重组质粒pcDNA3.1 GPⅠbα中扩增GPⅠbαvWF结合域基因 ,以pPIC9k为表达载体 ,构建包含该目的基因的酵母重组质粒 ,转染毕赤酵母GS115 ,以G4 18筛选抗性克隆 ,甲醇诱导表达 ,SDS PAGE与点印迹鉴定表达产物。结果 :获得编码正确的重组质粒pPIC9k GP30 2 ,电转化GS115 ,以G4 18筛选到阳性克隆 ,诱导表达培养上清进行点印迹 ,结果表明表达蛋白能够与抗GPⅠbα单克隆抗体结合。结论 :获得了表达重组蛋白质GPⅠbαvWF结合域的巴氏毕赤酵母菌株以及重组蛋白质GP30; 王波苏丽张玉华魏广智王广义王字玲; 关键词：巴氏毕赤酵母 VWF 单克隆

血小板糖蛋白GPIbavWF结合域在酵母中的表达鉴定: 目的:实现重组糖蛋白GPIbαvWF结合域在毕赤酵母中的表达。方法:PCR从重组质粒pcDNA3.1-GPIbα中扩增GPIbαvWF结合域基因,以pPIC9k为表达载体,构建包含该目的基因的酵母重组质粒,转染毕赤酵母G...; 王波苏丽张玉华魏广智王广义王字玲; 关键词：毕赤酵母表达; 文献传递

人源性抗血小板噬菌体抗体库的构建被引量：2: 2002年; 目的　应用噬菌体表面呈现表达系统构建一个经血小板主动免疫的人抗体组合文库 ,并筛选与人血小板结合的噬菌体抗体 (Fab片段 )。方法　从一反复输注血小板并出现血小板输注无效的患者的外周血分离淋巴细胞 ,提取mRNA ,逆转录合成cDNA ,用半巢式PCR扩增重链Fd和κ轻链基因。依次将PCR产物插入载体pComb3相应的位点 ,构建噬菌体抗体Fab组合文库。并以人血小板膜蛋白包被 96孔板 ,对抗体库进行 3轮吸附洗脱扩增的亲和选择 ,获得与人血小板膜抗原结合的噬菌体抗体 (Fab片段 )库。结果　半巢式PCR有效地扩增出重链Fd和κ轻链基因 ,以此构建了噬菌体呈现文库。通过特异性筛选 ,获得可与人血小板特异结合的Fab噬菌体抗体次级库。结论　构建的人抗体组合文库通过筛选得到与人血小板特异结合的噬菌体抗体 (Fab片段 )次级库。其对抗血小板抗体药物研究、与血小板相关抗体有关的疾病研究、血小板血型抗原表位研究、进而进行血小板血型分型研究等。; 王字玲赵敬湘苏丽王波赵莲; 关键词：血小板血小板抗体噬菌体抗体人源性单克隆抗体

GST-GP302融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清的制备被引量：3: 2003年; 目的 :在大肠杆菌中表达血小板糖蛋白GPIbα之vWF结合区(GP30 2 )与谷胱甘肽S 转移酶GST的融合蛋白并制备其抗血清。方法 :将GP30 2片断插入GST融合表达载体 pGEX 4T 1,重组载体酶切鉴定后 ,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST GP30 2融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物。包涵体经变性复性后免疫新西兰白兔 ,制备抗血清 ,ELISA、Westernblot检测重组抗原的免疫活性。结果 :重组质粒酶切鉴定表明 ,GP30 2基因已正确插入到 pGEX 4T 1中 ,经IPTG诱导后 ,表达出相对分子质量 (Mr)约为 5 90 0 0的融合蛋白 ,获得了ELISA效价为 1× 10 -5的多克隆抗体。Westernblot证明所制备的多抗可以与血小板糖蛋白特异性结合。结论 :GP30 2片断在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体。; 苏丽赵敬湘王波张玉华管利东王字玲; 关键词：大肠杆菌

抗人白细胞介素-4单克隆抗体的制备及应用研究被引量：2: 2002年; 李琦欧阳为明贾卫刘雪松韩卫宁刘飞谢鑫苏丽金伯泉; 关键词：IL-4 单克隆抗体特异性鉴定

猪血小板膜糖蛋白的纯化与鉴定被引量：4: 2004年; 目的 :分离纯化猪血小板膜糖蛋白并对其进行鉴定。方法 :差速离心法分离猪血小板 ,1%TritonX 10 0溶解膜糖蛋白 ,麦胚凝集素亲和层析纯化糖蛋白 (0 .3mol/LN 乙酰葡萄糖胺洗脱 ) ,用鼠抗人GPⅠb单抗PHN89作点印迹 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,考马斯亮蓝 (Coomassieblue ,CB)和过碘酸 Schiff(PAS)染色鉴定糖蛋白 ,腺苷二磷酸钠盐(ADP)和瑞斯托菌素 (ristocetin)诱导的人血小板聚集测定其体外活性。结果 :用GPⅠb单抗PHN89为一抗的点印迹表明 0 .3mol/LN 乙酰葡萄糖胺能充分洗脱结合到凝集素上的GPⅠb。PAS法糖定性有 2条显色条带 ,SDS PAGE纯化后有 2条蛋白区带。ADP阳性对照血小板聚集率为 74 % ,纯化前后的样品血小板聚集率分别为 4 2 %和 4 % ,ristocetin阳性对照血小板聚集率为 10 0 % ,纯化前后的样品血小板聚集率分别为 2 5 %和 3% ,表明制备的血小板糖蛋白具有生物学活性。结论 :得到了较纯的血小板膜糖蛋白。; 张玉华苏丽王波赵敬湘王广义王字玲; 关键词：血小板糖蛋白麦胚凝集素血小板聚集

血小板血型抗原HPA-2在CHO细胞中的表达被引量：2: 2003年; 目的　在 CHO细胞中表达血小板血型抗原 HPA- 2 a和 2 b。方法　从人巨核细胞系 MO7e中采用 RT- PCR方法扩增出血小板血型抗原 HPA- 2抗原位点所在的血小板糖蛋白 b氨基端 30 2个氨基酸的 c DNA,并将第 4 34位的 C突变为T,使得相应的氨基酸苏氨酸 (Thr)突变为蛋氨酸 (Met)。将 HPA- 2 a和 2 b基因插入真核表达质粒 pc DNA3.1(+) ,将重组质粒 p HPA2 a和 p HPA2 b以脂质体介导的转染方法导入 CHO细胞中 ,以 G4 18筛选获得抗性克隆 ,表达产物用瑞斯托菌素诱导血小板凝集试验的抑制作用测定活性。结果　获得了人血小板血型抗原 HPA- 2 a和 HPA- 2 b的基因 ,并在 CHO细胞中进行了表达。表达产物具有 v WF结合功能。结论　成功地表达了人血小板血型抗原 HPA- 2 a和 HPA- 2 b,对进一步研究血型抗原特定表位及功能。; 王字玲赵莲苏丽王波; 关键词：CHO细胞基因表达 RT-PCR法基因位点脂质体介导

基于血小板GP Ⅰb的血小板代用品研究: 目的为解决血小板制剂存在的免疫原性强、保存运输困难、病原体污染、以及日益严重的血源短缺问题,研究安全、有效的血小板代用品。方法以重组表达血小板GP Ib vWF结合区和麦胚凝集素亲和层析法纯化血小板膜糖蛋白并制备糖蛋白-...; 张玉华王波苏丽吴正宏周虹王字玲; 文献传递

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