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ERK5和JNK参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化被引量：4: 2014年; 目的研究细胞外信号调节激酶5(ERK5)和c-Jun N端激酶(JNK)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法利用重组腺病毒将BMP9基因导入C3H10T1/2细胞,Western blot法检测加入BMP9及不同浓度ERK5特异性抑制剂BIX02189或JNK特异性抑制剂SP600125后ERK5和JNK的激活情况;实时定量PCR(qRT-PCR)检测BMP9诱导1周后心肌特异性基因肌细胞增强因子2C(MEF2C)、GATA结合蛋白4(GATA4)表达;Western blot法检测经BMP9诱导3周后心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白43(CX43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达和免疫荧光技术检测CX43、cTnT在细胞内的表达。结果在转染效率达50%左右的情况下,BMP9可过度激活ERK5和JNK,使其磷酸化水平显著增高(P<0.05);BIX02189抑制ERK5激活后,BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的心肌分化标志物MEF2C、GATA4、CX43、cTnT均受到显著抑制(P<0.05),JNK特异性抑制剂SP600125也可抑制MEF2C、GATA4、CX43、cTnT表达,但对MEF2C及GATA4的抑制不如BIX02189显著(P<0.05)。结论 ERK5和JNK的过度激活参与了BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化。; 耿雪静刘书霞陈沅; 关键词：C-JUN 心肌样细胞

ERK5和JNK激酶参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化: 目的:研究细胞外信号调节激酶5(ERK5)和c-Jun N端激酶(JNK)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法:利用BMP9重组腺病毒转染C3H10T1/2细胞,用GF...; 耿雪静陈沅刘书霞

结肠癌细胞球高耐药性及其相关蛋白RAD51和BRCA1的表达被引量：1: 2013年; 目的:探讨结肠癌HCT116和SW480细胞球的高耐药性与同源重组中心分子RAD51和人乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene1,BRCA1)表达的关系。方法:通过无血清悬浮培养获得结肠癌HCT116和SW480细胞球,应用FCM法检测HCT116和SW480细胞球及单层细胞中肿瘤干细胞标志物CD133+细胞的含量。不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-luorouracil,5-Fu)和奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)单独或联合干预HCT116和SW480细胞球和单层细胞后,采用CCK-8法检测细胞的增殖并计算各药物的半数抑制浓度(halfinhibitory concentration,IC50),FCM法检测细胞的凋亡率,免疫荧光及蛋白质印迹法检测细胞中RAD51和BRCA1的表达。结果:HCT116和SW480细胞在含生长因子的无血清培养液中形成可稳定传代的肿瘤细胞球,并且细胞球中CD133+细胞含量显著高于单层细胞(P<0.01)。相同浓度药物干预后,肿瘤细胞球与单层细胞相比细胞生存率更高而凋亡率更低,各药物作用HCT116和SW480细胞球的IC50值显著高于单层细胞(P均<0.01)。不同化疗药物干预后,HCT116和SW480细胞球及单层细胞中RAD51和BRCA1的表达水平均上调;相同药物干预后,HCT116和SW480细胞球中RAD51和BRCA1的表达水平均高于单层细胞(P<0.05)。结论:结肠癌HCT116和SW480细胞球耐药性明显高于普通单层细胞,RAD51和BRCA1可能参与了结肠癌细胞球的高耐药性。; 曹先圣程勇杨小丁耿雪静庞云; 关键词：结肠肿瘤肿瘤干细胞 DNA修复

ERK5信号通路参与BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化: 2014年; 目的:研究细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)信号通路在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法:用AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞,流式细胞术检测转染效率,Western blot检测磷酸化ERK5(phosphorylation ERK5,p-ERK5)和ERK5的表达水平,免疫荧光检测p-ERK5在细胞内的表达位置;ERK5特异性抑制剂BIX02189预处理细胞再经AdBMP9诱导,Western blot检测pERK5和ERK5表达水平,RT-qPCR检测心肌特异性基因肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor,MEF)2C、GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)表达,Western blot检测心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白43(connexin 43,CX43)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)表达。结果:AdGFP与AdBMP9的转染效率达50%左右,经AdBMP9诱导后的细胞p-ERK5表达明显增高(P<0.01),免疫荧光结果显示BMP9组p-ERK5表达明显增强且主要集中于胞核;15μmol/L BIX02189可完全抑制pERK5的表达(P<0.01),且明显降低了由AdBMP9诱导的C3H10T1/2细胞GATA4、MEF2C基因与CX43、cTnT蛋白表达(P=0.000)。结论:BMP9可以通过激活ERK5信号通路调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。; 耿雪静陈沅陈露孙文静刘书霞; 关键词：心肌样细胞

P38MAPK信号通路参与BMP-13诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化: 2013年; 目的探讨P38 MAPK对BMP-13诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化的影响。方法实验共4个部分,分组如下:1)BMP-13腺病毒(Ad-BMP-13)对P38 MAPK的作用:Ad-BMP-13转染组、Ad-GFP转染组和C3H10空白组。Western blot检测磷酸化P38 MAPK(p-P38 MAPK)和总P38 MAPK(t-P38 MAPK)的表达变化,免疫荧光技术定位p-P38 MAPK;2)P38 MAPK干扰腺病毒(Ad-si-P38)对P38 MAPK的作用:si-P38干扰组、si-NC干扰对照组和C3H10空白组。Western blot检测t-P38 MAPK的表达;3)Ad-si-P38阻断P38 MAPK后对BMP-13诱导分化的影响:si-P38+Ad-BMP-13转染组、si-NC+Ad-BMP-13转染组、si-NC+Ad-GFP转染组和C3H10空白组。Western blot检测cTnT和Cx43的表达,荧光定量PCR检测GATA-4和MEF-2C的mRNA表达;4)SB203580阻断P38 MAPK后对BMP-13诱导分化的影响:DMSO+Ad-BMP-13转染组、SB203580(2、5和10μmol/L)+Ad-BMP-13转染组。荧光定量PCR检测GATA-4和MEF-2C的mRNA表达。结果 BMP-13促进P38 MAPK的磷酸化。Ad-si-P38可以有效降低P38 MAPK表达水平。Ad-si-P38阻断P38 MAPK后BMP-13诱导组cTnT、Cx43表达有明显降低(P<0.05),GATA-4和MEF-2C的表达也有显著降低(P<0.05)。随P38 MAPK特异性抑制剂SB203580浓度增加,BMP-13诱导组GATA-4和MEF-2C的表达降低(P<0.05)。结论 Ad-BMP-13可以通过激活P38 MAPK信号通路来调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。; 孙文静陈沅张芬陈露陈妙月耿雪静朱高慧; 关键词：P38 SB203580

Wnt3a联合BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化被引量：2: 2015年; 目的探讨Wnt3a单独以及联合骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化的作用。方法利用HEK293细胞扩增重组腺病毒AdGFP、AdBMP9、AdWnt3a;分别转染C3H10T1/2细胞3周后,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态及绿色荧光蛋白表达;流式细胞术检测细胞转染效率;Westernblot法、免疫荧光技术及实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测缝隙连接蛋白43(Cx43)、肌钙蛋白T(cTnT)、GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌细胞增强因子2C(MEF2C)的表达。结果经HEK293细胞扩增可得到高滴度的重组腺病毒;转染C3H10T1/2细胞3周后,Wnt3a组Cx43、cTnT、GATA4、MEF2C的表达量与空白组比较无明显差异;Wnt3a联合BMP9组的Cx43、cTnT、GATA4、MEF2C基因的表达量显著高于空白组、GFP组和Wnt3a组,与单独BMP9组相比无显著性差异。结论Wnt3a不能单独诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化;Wnt3a联合BMP9可诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化。; 刘书霞耿雪静房松华陈沅; 关键词：WNT3A C3H10T1/2细胞

ERK5和JNK参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化: 目的研究细胞外信号调节激酶5(ERK5)和c-Jun N端激酶(JNK)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法利用重组腺病毒将BMP9基因导入C3H10T1/2细胞,用携...; 耿雪静陈沅陈露刘书霞

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