王爱妍
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：广西医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鸟分枝杆菌PhoR基因的克隆及诱导表达
- 2015年
- 目的:克隆鸟分枝杆菌的PhoR基因,构建高表达重组质粒pGEX-PhoR,确定目的蛋白表达形式,为后续对鸟分枝杆菌PhoR的功能研究打下基础。方法:以一株鸟分枝杆菌临床分离株作为DNA模板,PCR扩增PhoR基因,pGEX-4T-3为载体构建表达质粒,转化到E.coliBL21(DE3)中诱导表达。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式及表达量。结果:扩增出鸟分枝杆菌PhoR基因,构建了重组表达质粒pGEX-PhoR,在BL21(DE3)中以可溶性方式高效表达,经诱导产生与预期值相符的一个约81KDa的融合蛋白。结论:成功构建了pGEX-PhoR重组表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,为后续深入研究鸟分枝杆菌PhoR的生物活性和免疫活性奠定了基础。
- 王爱妍姚奇丁峰山凌敏
- 鸟分枝杆菌PhoP功能分析及其基因突变株的构建
- 2016年
- 【目的】对鸟分枝杆菌PhoP的功能进行分析及构建PhoP基因突变株,为深入研究PhoP的调控机制打下基础。【方法】利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP DNA结合区(PhoPC)编码序列,与表达载体p GEX-4T-3连接后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-PhoPC融合蛋白。用凝血酶去除GST标签,制备PhoPC蛋白;利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP基因及其下游基因MAV0127、PhoU和Amt的启动子片段,采用凝胶迁移率移动试验(EMSA)分别检测PhoPC与PhoP、MAV0127、PhoU和Amt的启动子结合的情况。通过PCR扩增PhoP基因上、下游片段,构建PhoP基因缺失性同源核苷酸片段,与自杀质粒p GMB151连接后,通过电转化导入鸟分枝杆菌进行同源交换,利用PCR筛选出PhoP基因缺失突变株。【结果】EMSA结果显示,鸟分枝杆菌PhoP能与PhoP、MAV0127及Amt基因启动子结合,不能与PhoU结合。通过PCR和序列分析证实基因突变株的PhoP基因缺失了309个碱基。【结论】PhoP不仅可调控其下游基因MAV0127和Amt的转录水平,还可调控其自身基因的转录,但不参与调节PhoU二元调控系统。构建了PhoP基因缺失突变株,为进一步研究其在鸟分枝杆菌的调控功能奠定了基础。
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- 关键词：PHOP
- 鸟分枝杆菌的分离鉴定及其基因组文库构建被引量：2
- 2014年
- 目的:构建鸟分枝杆菌基因组文库。方法:利用16S rRNA基因测序法对15例HIV/AIDS患者痰分枝杆菌培养阳性标本进行菌种鉴定,分离出鸟分枝杆菌。鸟分枝杆菌基因组DNA和pUC19载体经同尾酶Sau3AⅠ和Bam HⅠ分别酶切后连接,连接产物转化大肠杆菌JM109而获得文库。通过计算文库滴度、酶切分析克隆子来评价文库质量。结果:15株分枝杆菌经鉴定,有9株结核分枝杆菌、4株鸟分枝杆菌和2株脓肿分枝杆菌。所构建鸟分枝杆菌基因组文库滴度为2.58×105cfu/ml。随机挑选9个克隆进行Bam HⅠ酶切分析,可见到插入片段大小约在0.5kb^1kb之间。结论:从HIV/AIDS患者中分离出鸟分枝杆菌,并成功构建了鸟分枝杆菌基因组文库,为研究鸟分枝杆菌致病基因的结构和功能提供了基础。
- 姚奇王爱妍凌敏
- 关键词：基因组文库
- 结核分枝杆菌耐受活性氧和活性氮基因的研究进展被引量：1
- 2015年
- 活性氧和活性氮是生物体新陈代谢过程的中间产物,性质活泼,具有强氧化性。激活的巨噬细胞内存在大量的活性氧和活性氮,能够破坏病原菌的生物膜,改变蛋白质的功能,损害DNA的遗传信息,最终抑制或杀死入侵的病原微生物。结核分枝杆菌侵入机体,主要在巨噬细胞内存活并大量繁殖。在氧化和氮化胁迫下,结核分枝杆菌基因在转录水平会发生明显改变,帮助结核分枝杆菌逃逸巨噬细胞的杀伤作用。本文综述了结核分枝杆菌耐受活性氧和活性氮基因的研究进展,并总结了各基因之间的调控通路。
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- 关键词：活性氧活性氮巨噬细胞结核分枝杆菌
- 鸟分枝杆菌耐受活性氮和活性氧基因的筛选及功能研究
- 目的:鸟分枝杆菌是细胞内寄生菌，在艾滋病晚期常可发生鸟分枝杆菌的扩散性感染。巨噬细胞作为分枝杆菌的宿主细胞，其内微环境包含有多种杀（抑）菌机制，比如酸、活性氧(ROS，如O2、H2O2)和活性氮(RNS，如NO、NO2)...
- 王爱妍
- 关键词：基因筛选巨噬细胞
- 文献传递
