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Mipu1对大鼠促凋亡蛋白Bax表达与心肌细胞凋亡的影响: 目的:探讨Mipu1对促凋亡蛋白Bax表达及心肌细胞凋亡的影响。方法:分离纯化Mipu1蛋白,体外观察其与bax启动子的结合;采用ChIP在体检测Mipu1与bax启动子在细胞内的结合;采用报告基因观察Mipu1对bax...; 蒋磊王浩时春丽王桂良冯衍生屈顺林刘小柳肖献忠

Mipul对氧化应激所致H9C2细胞凋亡的影响及其机制的研究: Mipul是我室发现的心脏缺血预适应时表达上调的新基因。近年研究发现Mipul蛋白是一C2H2型锌指蛋白核转录因子。观察Mipul过表达对H9C2大鼠心肌细胞凋亡的影响,为进一步探讨其功能提供线索和思路。方法:将Mipu...; 王桂良; 关键词：细胞凋亡; 文献传递

FXR2酵母双杂交饵载体的构建及酵母菌转化被引量：1: 2005年; 目的构建FXR2酵母双杂交系统的“饵”质粒,并转化酵母菌,为筛选FXR2P互作蛋白作基础。方法提取pMD18-T-FXR2,酶切后将FXR2基因连接到MATCHMAKERLexATwo-HybridSystem中的plexA质粒上,得到“诱饵”(Bait)-plexA-FXR2,导入大肠杆菌扩增,筛选阳性克隆并提取重组Bait质粒,再转入酵母菌EGY48(p8op-lacZ)。结果通过遗传学方法筛选得到构建成功的plexA-FXR2;通过营养缺陷筛选,证明Bait重组质粒转入酵母菌中。结论成功构建Bait质粒并使酵母菌转化。; 李斌元何淑雅王桂良马云孙春莉肖卫纯李洁闵凌峰彭丹妮Nanbert Zhong; 关键词：脆性X综合征酵母双杂交

脆性X智力低下蛋白的研究进展: 2003年; 脆性X综合征是一种X连锁的不完全显性遗传病，它是正常脆性X智力低下基因1(fragile X retardation gene1，FMR1)5’非翻译区中一段不稳定的(CGG)n扩增及其上游的CpG岛的甲基化，引起FMRl基因失活，导致其编码的蛋白质脆性X智力低下蛋白FMR1蛋白(fjagile X mental retardation protein，FMRP)缺失，进一步引起智力低下。FMRP是联系细胞核和细胞质之间的RNA结合蛋白，这种蛋白与蛋白质转运，及多聚核糖体和内质网的功能有关。本文综述FMRP组织分布、结构、功能及其相互作用蛋白。; 王桂良何淑雅; 关键词：智力低下 FMR1 相互作用蛋白脆性X综合征 CPG岛

Battenin相互作用蛋白的筛选与初步鉴定被引量：3: 2005年; 目的寻找Battenin相互作用蛋白的筛选方法,并对筛选出的Battenin相互作用蛋白进行初步鉴定。方法将编码Battenin相互作用蛋白肽段的cDNA序列与plexA质粒的DNA结合结构域基因重组作为诱饵,应用MATCHMAKERLexA酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与Battenin相互作用蛋白再发生相互作用的蛋白质的cDNA,并进行生物信息学分析。结果从胎脑cDNA文库中筛选得到7个阳性克隆,其中一个基因与人TEGT基因有99%的同源性,TEGT编码蛋白为Bax抑制子1。结论Battenin相互作用蛋白与Bax抑制子1或类似物相互作用,Bax抑制子1具有反式调控因子特性,二者都可能参与基因表达调控。; 李斌元王桂良马云肖卫纯李洁孙春莉闵凌峰虞佳Nanbert Zhong何淑雅; 关键词：分子生物学蛋白质相互作用酵母双杂交

氯化钴对H9c2心肌细胞新基因Mipu1表达的影响: 2011年; 目的:研究氯化钴(CoCl2)对大鼠胚胎心脏来源的H9c2心肌细胞中新基因Mipu1表达的影响。方法:利用不同浓度的CoCl2(0、100、200、300、400、500μmol/L)处理H9c2细胞9h,及200μmol/L CoCl2处理H9c2细胞不同的时间(0、6、9、12、24h)后,用RT-PCR和Western Blot分别观察H9c2细胞Mipu1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:CoCl2可以诱导H9c2细胞中Mipu1 mRNA和蛋白表达升高,200μM CoCl2处理组的Mipu1的表达水平高于100μM CoCl2处理组,但是更高浓度的CoCl2(>200μM)不能使Mipu1的表达进一步升高。随着CoCl2作用时间的延长,Mipu1的表达逐步升高,在12h达到高峰,但是在24h后下降。结论:CoCl2能够促进H9c2细胞新基因Mipu1的表达,并且具有一定的剂量和时间依赖性。; 雷坚王慷慨刘小柳王桂良刘瑛刘梅冬肖献忠; 关键词：氯化钴 H9C2 心肌保护

壮族人群脆性X综合征中不稳定遗传序列的研究被引量：1: 2005年; 目的研究湖南省壮族人群FraX中不稳定DNA序列的多态性,建立一种快速筛查FraX中FMR-1动态突变的方法,为提高遗传咨询和诊断水平奠定基础。方法采用经典的PCR-Southernblot法对156例X染色体FRAXA位点(CGG)n重复序列拷贝数进行测定并与PCR-序列分析胶银染法进行比较。结果(CGG)n重复序列范围为6～57,高峰为29;发现一男性携带者,CGG重复数为57;PCR-序列分析银染法结果与PCR-Southernblot法结果完全一致,从PCR扩增到产物检测只需4,5h即可完成。结论壮族人群(CGG)n频率分布高峰为29,其次为27,30;PCR-序列分析胶银染法快速、直接、简便、实用,适合脆性X综合征的大规模群体筛查。; 马云何淑雅李斌元刘四春王桂良闵凌峰; 关键词：脆性X综合征三核苷酸重复基因诊断

HIF-1对H9c2心肌细胞新基因Mipu1表达的影响及其机制研究: 目的:研究缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)对大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞新基因Mipul表达的影响及其机制。方法:分别以氯化钴(CoCl_2)处理、人HIF-1α全长...; 雷坚王慷慨刘小柳刘瑛王桂良蒋磊刘梅冬肖献忠

新基因MIP2的克隆和特性分析: 2008年; 目的克隆1个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因MIP2,并分析其相关特性。方法采用生物信息学方法,克隆了1个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因MIP2,分析了新基因的若干特性;采用PCR从cDNA文库中克隆MIP2的开放阅读框。结果MIP2定位于大鼠染色体1q42.12,含14个外显子和13个内含子,开放阅读框(ORF)为1497bp,编码498个氨基酸。在其编码蛋白的N-端含1个CTLH结构域,C-端有5个WD重复序列;MIP2的开放阅读框经测序证实与预测的完全一样;多组织膜RNA印迹证实了MIP2转录本的存在,且显示该基因在心与骨骼肌表达最高,其次是脾和睾丸,在其他组织表达较低或无表达。结论成功克隆了1个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因MIP2。; 蒋磊王慷慨袁灿陈广文刘可王桂良肖献忠; 关键词：新基因生物信息学克隆

新的锌指蛋白Mip1的DNA结合序列的筛选: 2008年; 目的筛选一个新的锌指蛋白Mip1的DNA结合位点。方法将Mip1cDNA全长克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1构建了Mip1的原核表达质粒pGEX-Mip1。用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-Mip1融合蛋白。通过固定化的GST-Mip1,从寡核苷酸文库中俘获Mip1的结合的寡核苷酸片段;将所得寡核苷酸片段插入T-载体,通过测序、序列比对得到DNA结合位点。结果锌指蛋白Mip1的融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达,能与固定化还原性谷胱甘肽很好地亲和而得到纯化;用固定化的Mip1融合蛋白俘获到了其结合的寡核苷酸序列,通过测序、序列比对,得到了Mip1的DNA结合位点。结论Mip1的DNA结合位点的核心序列为G/TCCTA,Mip1的DNA结合位点的成功确定为Mip1功能的深入研究打下了基础。; 蒋磊王慷慨陈广文刘可邓恭华涂自智刘梅冬王桂良肖献忠; 关键词：新基因锌指蛋白

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王桂良