王延华
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：昆明医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省社会发展攻关项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TGFβ和GDNF在脊髓全横断损伤后大鼠的表达(摘要)
- 2007年
- 目的探讨成年大鼠脊髓全横断损伤（SCT）后不同时相损伤部位两端脊髓内TGFβ1和GDNF的表达变化．方法成年SD大鼠50只，随机分5组：正常对照组、脊髓全断损伤（于T9-T10）完全横断脊髓）3d组、7d组、14d组和21d组，每组各10只动物．术后1d，3d，7d，14d及21d组，每组各10只动物．采用BBB评分及SEP检测方法．采用免疫组化SP法染色和Western blotting分析TGFβ1和GDNF．采用单因素的方差分析及lsd-q检验进行显著性检验．结果双下肢运动功能的BBB评分在术后为0，21d仅为1．17±0．11．SEPd在损伤各组均末检测到．TGFβ1表达于正常脊髓前角运动神经元的胞浆及白质内的神经胶质细胞．损伤脊髓头端，前角神经元内TGFβ1免疫反应损伤7d开始增强，21d达最高；
- 李咏梅王延华
- 关键词：脊髓全横断转化生长因子Β1
- 人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体的表达和生物学活性检测
- 2006年
- 目的探讨人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体(Adeno-TrkC)在神经干细胞内的表达及其对神经干细胞的生物活性作用。方法用RT-PCR检测Adeno_TrkC感染的293细胞的TrkCmRNA含量。用免疫细胞化学和Westernblotting检测Adeno-TrkC感染的神经干细胞表达TrkC受体蛋白。在体外培养条件下,观察人神经营养素-3(NT-3)对感染了Adeno-TrkC的神经干细胞分化为神经元样细胞和星形胶质样细胞的影响。结果在Adeno-TrkC感染的293细胞和神经干细胞中检测到TrkCmRNA和TrkC受体蛋白,且表达产物和其配体NT-3结合后能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞,分化率达到55.2%,均高于其他对照组。结论Adeno_TrkC能在神经干细胞内表达TrkC受体蛋白,这种TrkC受体蛋白具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞活性的作用,这为进一步应用NT-3和TrkC联合进行基因治疗中枢神经损伤研究奠定了基础。
- 王俊梅曾园山黄文林熊轶王延华
- 关键词：TRKC重组腺病毒WESTERNBLOTTING
- 活体小鼠坐骨神经的形态学观察被引量：2
- 2009年
- 目的使用表达绿色荧光蛋白的转基因小鼠，建立用激光共聚焦显微镜活体、实时观察周围神经形态的方法。方法将转基因小鼠麻醉后，分离显露坐骨神经，并将小鼠固定于激光共聚焦显微镜操作台，使显露的坐骨神经与载玻片贴合，从而观察活体小鼠坐骨神经的形态学特点。测量神经干、神经束及神经纤维的直径，并计算神经束及神经纤维的数量；将小鼠坐骨神经切断或钳夹，造成神经损伤模型，在损伤即刻及损伤后2h，观察损伤神经近端、损伤处及损伤远端形态的改变。结果正常小鼠坐骨神经神经干直径为800．0μm，神经束直径为70．0-100．0舯，神经束数量为2个，神经纤维直径为7．5μm，神经纤维数量为70～200个。神经损伤即刻及损伤后2h，损伤近端处可见神经纤维逐渐出现空泡样变性，神经纤维走向逐渐紊乱，部分纤维中断。损伤段神经纤维完全扭曲，空泡样变性明显，并出现神经纤维崩解，神经连续性完全中断。损伤远端250．0μm及500．0μm处，神经纤维荧光强度逐渐增强，结构恢复，排列逐渐整齐。结论绿色荧光蛋白转基因小鼠结合激光共聚焦显微镜在体成像技术为实现活体实时观测周围神经提供了良好的技术平台，可用于观察小鼠正常及损伤后周围神经结构的形态和变化。
- 王天兵张丞寇玉辉王瑾王静王延华姜保国
- 关键词：小鼠坐骨神经绿色荧光蛋白
- 人神经营养素-3基因重组腺病毒载体的构建、表达和生物活性检测被引量：5
- 2005年
- 目的构建具有生物活性的人神经营养素_3(NT_3)基因重组腺病毒表达载体。方法从人脑组织mRNA中扩增NT_3基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的质粒。再与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd_NT_3)。用pAd_NT_3转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno_NT_3)。结果NT_3基因RT-PCR扩增产物约801 bp。Adeno_NT_3 PCR鉴定为正确重组子。RT_PCR、免疫细胞化学、ELISA及Western blot检测显示,Adeno_NT_3能在其转染的293细胞表达和分泌NT_3。这种NT_3能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞。结论应用体外连接法成功构建了人NT_3基因重组腺病毒表达载体,其表达产物具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞的活性作用。
- 王俊梅曾园山刘然义吴立志薛刚黄文林熊轶王延华
- 关键词：神经营养素-3重组腺病毒神经干细胞免疫细胞化学
- NT-3及其受体TrKC在人胚胎脊髓发育中的表达及变化
- 采用免疫组织化学、原位杂交、Western Blot 和 RT-PCR 技术探讨神经营养因子-3(Neurotrophic factor-3,NT-3)和其受体 TrKC 在3周～8月人胚胎脊髓中的表达变化及与人胚胎脊髓...
- 李力燕杨金伟高燕杨霄彦杨慧娟张丽郭建辉王延华冯忠堂
- 文献传递
