王丽哲
- 作品数：11 被引量：23H指数：4
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 胸膜肺炎放线杆菌血清型特异的疫苗候选基因筛选与短小棒状杆菌异源免疫
- 猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)是猪传染性胸膜肺炎的病原,引起猪的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。已发现APP有15个血清型,各血清型之间缺少有效的交叉免疫保护,给本病的疫苗研究带来了困难。本研究提取血清1型与5型A...
- 雷连成李耿王丽哲孙长江吕爽蔡林君冯新韩文瑜
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌短小棒状杆菌
- 文献传递
- 胸膜肺炎放线杆菌血清型特异的疫苗候选基因筛选与短小棒状杆菌异源免疫
- 猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)是猪传染性胸膜肺炎的病原，引起猪的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。已发现APP有15个血清型，各血清型之间缺少有效的交叉免疫保护，给本病的疫苗研究带来了困难。本研究提取血清1型与5型A...
- 雷连成李耿王丽哲孙长江吕爽蔡林君冯新韩文瑜
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌短小棒状杆菌猪传染性胸膜肺炎
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌血清1和5型交叉免疫保护研究被引量：4
- 2007年
- 目的探讨猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间交叉免疫保护的关系。方法以1型和5型APP参考菌株为实验对象,分别测定半数致死量(LD50),制备灭活细菌抗原和活菌抗原,免疫昆明小鼠,检测ELISA抗体水平及交叉免疫反应,并分别以10LD501型和5型APP菌进行攻击,观察小鼠保护力。结果1型和5型APP菌对小鼠的半数致死量分别为8.0×105.3和5.1×103.83CFU/LD50,死菌抗原和活菌抗原免疫小鼠均可产生高滴度抗体,且1型与5型间存在较强的交叉免疫反应。死菌抗原和活菌抗原免疫小鼠均能对本型APP菌攻击产生保护,保护率在80%以上。1型活菌免疫小鼠对5型菌攻击保护率为70%,5型活菌免疫小鼠对1型菌攻击保护率为90%,1型、5型死菌免疫小鼠对5型、1型菌交叉攻击均无保护作用。结论1型、5型APP活菌和死菌免疫小鼠均可对本型菌攻击产生保护,两型间存在较强的交叉免疫反应,但只有活菌免疫可以产生较好的交叉免疫保护,死菌免疫不能产生交叉免疫保护。
- 雷连成韩文瑜王丽哲吕爽李树清孙长江
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌血清型
- 大肠杆菌细菌膜影的载体构建
- 通过克隆PhiX174裂解基因E,将其连入pMD18T,构建产生大肠杆菌细菌膜影克隆载体,并将测序正确的片断插入温控表达载体pBV 220和融合表达载体pGEX-3X,为大肠杆菌细菌膜影的研究奠定基础.
- 王丽哲雷连成韩文瑜
- 关键词：大肠杆菌
- 文献传递
- 裂解基因E和核酸酶基因串联表达载体的构建及大肠杆菌菌影的制备被引量：10
- 2007年
- 目的构建噬菌体裂解基因E和核酸酶基因串联表达载体,制备高质量的大肠杆菌菌影。方法自行设计一对引物,PCR扩增PhiX174噬菌体裂解基因E,将该基因亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建大肠杆菌菌影的表达载体pGEX-E。在E基因基础上与辅助基因葡萄球菌核酸酶A(SN)基因串联,并插入pGEX-6P-1载体,构建双基因串联高效表达载体pGEX-E-5aaLinker-SN和pGEX-E-15aaLinker-SN,采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,制备大肠杆菌菌影。结果裂解基因E单基因及串联基因已成功插入融合表达载体pGEX-6P-1,所构建的大肠杆菌菌影表达载体pGEX-E、pGEX-E-5aaLinker-SN和pGEX-E-15aaLinker-SN,诱导后经透射电镜及活菌计数显示大肠杆菌已发生不同程度裂解,制成了大肠杆菌菌影。电镜下菌影形态完整,内容物已释放到胞外。结论已成功构建了噬菌体裂解基因E单基因及裂解基因和核酸酶基因串联基因表达载体,并制成了大肠杆菌菌影,为进一步研究菌影这一新型的疫苗及佐剂形式奠定了基础。
- 王丽哲雷连成韩文瑜
- 噬菌体裂解基因E原核表达载体构建及大肠杆菌菌影的制备被引量：4
- 2008年
- 根据Genbank已知序列,设计1对引物,采用PCR方法扩增PhiX174噬菌体裂解基因E,经克隆、鉴定及序列测定分析,将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,构建了能够在大肠杆菌中表达裂解基因E的载体pGEX-E,并采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后成功获得了大肠杆菌菌影,为进一步研究菌影这一新型的疫苗制备方法和新的疫苗佐剂奠定了基础。
- 王丽哲雷连成韩文瑜
- 关键词：原核表达
- 裂解基因E和SN基因原核表达载体构建及大肠杆菌O138菌影的研制
- 根据GenBank上已发表的序列,设计引物,利用PCR技术扩增出了PhiX174噬菌体裂解基因E(Lysis gene E),构建了温控原核表达载体pBV-E和融合原核表达载体pGEX-E。为提高菌体裂解效率,又设计引物...
- 王丽哲
- 文献传递
- 裂解基因E和核酸酶基因串连表达载体的构建及大肠杆菌菌影的制备
- 通过扩增PhiX174噬菌体裂解基因E，并对该基因进行克隆、鉴定及序列测定，将该基因亚克隆到原核表达载体pGEx-6P-1，成功构建了大肠杆菌菌影的表达载体pGEX-E。在E基因基础上与辅助基因葡萄球菌核酸酶A(SN)基...
- 王丽哲雷连成韩文瑜
- 关键词：噬菌体葡萄球菌核酸酶疫苗佐剂大肠杆菌
- 文献传递
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌1型与5型差减文库构建及差异基因分析
- 目的:建立猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)1型与5型差减文库,克隆差异表达基因并分析筛选不同血清型间免疫保护相关基因.方法:采用cDNA代表性差异分析法(cDNARDA),通过三轮消减杂交后获得特异性差异表达基因,克隆...
- 雷连成韩文瑜华芳王丽哲李耿冯新
- 关键词：放线杆菌差减文库差异基因
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定与毒力测定被引量：5
- 2008年
- 从长春地区疑似猪传染性胸膜肺炎发病猪采集病料,经形态学检查、生化实验、卫星生长现象、溶血试验、PCR鉴定等,分离到7株猪胸膜肺炎放线杆菌;血清定型试验表明,其中血清7型3株,血清5型2株,血清3型1株,血清1型1株。将分离菌株在37℃BHI液体培养基中培养6～8h,无菌条件下离心收集菌体,用灭菌生理盐水洗涤菌体3次,腹腔接种健康昆明小鼠,每只小鼠1.0×10^8CFU/0.2mL,结果5型和7型对小鼠的平均致死率最高,分别为100%和66.5%。
- 雷连成华芳王丽哲李耿冯新韩文瑜
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌毒力测定
