目的观察敲降长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1(lncRNA-MALAT1)调控微小RNA-194-5p(miR-194-5p)/叉头框蛋白A1(FOXA1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)凋亡的影响.方法采用1 mg/L LPS处理HPAEpiC复制脓毒症急性肺损伤(ALI)体外模型.采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测HPAEpiC细胞中MALAT1、miR-194-5p的表达水平,构建MALAT1敲降载体、miR-194-5p抑制剂及FOXA1抑制剂转染HPAEpiC,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、LPS+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂组、LPS+MALAT1抑制剂+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂+miR-194-5p抑制剂组和LPS+FOXA1抑制剂组.采用CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒、流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测MALAT1或其敲降后对LPS诱导的HPAEpiC增殖及凋亡和FOXA1表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测lncRNA-MALAT1、miR-194-5p及FOXA1的靶向调控关系.结果与空白对照组比较,LPS可上调HPAEpiC-MALAT1的表达,促进HPAEpiC凋亡并抑制其增殖〔MALAT1(2^(-ΔΔCt)):0.83±0.09比0.15±0.02,HPAEpiC凋亡率:(21.31±2.31)%比(5.41±0.42)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.42±0.03比0.54±0.02,均P<0.05〕;与LPS+生理盐水组比较,敲降MALAT1可抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔细胞凋亡率:(6.40±0.40)%比(21.38±2.31)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.53±0.03比0.40±0.02,均P<0.05〕,降低MALAT1的表达(2-ΔΔCt:0.20±0.03比1.02±0.09,P<0.05).双荧光素酶报告基因及Western Blot证实,敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p从而抑制FOXA1在LPS诱导的HPAEpiC中的表达〔miR-194-5p(2^(-ΔΔCt)):5.27±0.15比1.21±0.09,FOXA1蛋白表达(灰度值):0.36±0.05比1.00±0.07,均P<0.05〕,miR-194-5p抑制剂能逆转MALAT1敲降在LPS诱导的HPAEpiC中对FOXA1的作用〔FOXA1蛋白表达(灰度值):2.76±0.20比1.00±0.07,P<0.05〕,抑制FOXA1表达能减轻LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔FOXA1蛋白表达(灰度值):0.28±0.03比1.00±0.03,HPA
目的研究血红素氧化酶-1 (heme oxygenase-1,HO-1)对脓毒症大鼠肾脏的保护作用机制,观察肾脏内皮细胞蛋白C受体(endothelial cell protein C receptor,EPCR)表达的变化以及血红素氧合酶-1对其影响。方法盲肠结扎-穿孔(cecal ligation and perforation,CLP)法制作脓毒症大鼠模型,72只脓毒症大鼠随机分为对照组、CLP组、HO-1促进剂(CLP+hemin)组、HO-1抑制剂(CLP+ZnPP)组,每组18只,后3组大鼠分别于腹腔内注射磷酸盐缓冲液、hemin和ZnPP,12 h后在大鼠腹白线做正中切口约1.5cm,分离盲肠,在盲肠的近端和末端各穿一个孔,挤出少许粪便于腹腔内,回纳盲肠,分层缝合腹腔,造成腹腔感染脓毒症模型。分时相处死大鼠,留取血浆、肾脏组织,分析各组之间肌酐(Cr)、胱抑素C(Cys-C)、血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)的差别,ELISA法检测血浆EPCR、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平变化,肾脏组织经马休黄/猩红/天青石蓝染色法(MSB)对比各组之间病理变化,并应用Western Blot分析肾脏组织EPCR表达水平。结果与对照组相比在脓毒症组中大鼠肾脏微血栓形成明显,凝血功能障碍,炎症反应明显,肾脏功能受损;在HO-1促进剂组中大鼠肾脏微血栓及炎症反应较脓毒症组显著减轻(P<0. 05),肾脏功能得到改善,EPCR表达较脓毒症组上调,差异具有统计学意义(P<0.05);而HO-1抑制剂起到了相反的作用。结论血红素氧合酶-1能够增加脓毒症大鼠肾脏内皮细胞蛋白C受体的表达,发挥抗凝血及抗炎作用,从而改善脓毒症大鼠的肾脏功能。
目的研究不同强度的血液滤过处方对不同严重程度脓毒症猪的影响。方法动物随机分成2组,低剂量组(A组,n=12)为内毒素E.colio111:B4按照18.5μg/kg静脉注射,高剂量组(B组,n=12)为在第1次给药后的第6小时按照同样的剂量和速度重复静脉注射1次内毒素。A组和B组各随机等分成3个亚组,其中A1、B1组为对照组,A2、B2组为低强度CVVH组(24 h Kt/V=1.12),A3、B3组为HVHF组(24 h Kt/V=2.25),各组超滤平衡为0。监测动物生命体征,测定不同时点血浆细胞因子水平如IL-6、TNF-α和IL-10以及评价其各组动物的生存率。结果各治疗组动物存活时间明显长于对照组,但治疗组间动物存活时间差异无统计学意义。不同强度的血液滤过治疗后,脓毒症猪血浆细胞因子水平并未在各个观察时间点得到抑制,脓毒症较重的动物细胞因子水平更高,这种趋势没有被血液滤过治疗改变。结论 CVVH能够有效延长脓毒症动物的生存时间,HVHF没有比CVVH更为优越。
