朱彤
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 供职机构：上海交通大学附属第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市松江区科技攻关项目更多>>
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- IRF3基因干扰对LPS刺激原代枯否细胞早期细胞因子分泌动态变化的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨干扰素调节因子3(Interferon regulator factor 3,IRF3)shRNA腺病毒对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)早期细胞因子分泌动态变化的影响。方法:采用在体灌注分离培养大鼠原代KC,以IRF3shRNA腺病毒体外感染KC,48 h后采用LPS刺激细胞,于0、2、4和6 h收集细胞培养上清液,并收集6 h细胞。上清液细胞因子的分泌采用ELISA分析;细胞IRF3基因表达采用RT-PCR和Western blot方法检测。结果:LPS刺激诱导了KC内IRF3 mRNA和蛋白质表达升高,IRF3 shRNA腺病毒的应用抑制了LPS刺激诱导和非刺激组成性IRF3 mRNA和蛋白质的表达;KC受LPS刺激活化后极早期(2 h)IFN-β分泌即上升,4 h达峰值,6 h分泌水平开始下降,但仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激后各时间点IFN-β的分泌,抑制分泌高峰的出现,并使6 h分泌水平趋于正常;KC活化后极早期即分泌大量TNF-α,并于2 h内达到峰值,随后分泌逐渐下降,但6 h仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激各时间点TNF-α的分泌,并抑制了分泌高峰的出现;IL-1β分泌增高出现于LPS刺激4 h后,6 h分泌水平达更高值。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激早期KC对IL-1β的分泌;KC受LPS刺激活化后极早期IL-10分泌即上升,且随着LPS刺激时间延长,其分泌水平逐渐增加。IRF3 shRNA腺病毒的应用促进了LPS刺激后早期各时间点IL-10的分泌。结论:IRF3 shRNA腺病毒可使原代枯否细胞IRF3基因表达沉默;在LPS刺激原代KC,IRF3可促进其下游信号分子IFN-β、前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌,并抑制抑炎细胞因子IL-10分泌。因此,IRF3可能在肝组织免疫炎症性损伤的发生中起中心作用。
- 朱彤涂文娟谈志丽刘亮明
- 关键词：干扰素调节因子3基因干扰固有免疫
- 微小RNA-3620在抗结核药物致肝损伤患者血浆中的表达及临床意义被引量：3
- 2017年
- 目的了解微小RNA（miRNA）-3620在抗结核药物诱导肝毒性（anti—tuberculosis druginduced hepatotoxicity，ATDH）患者血浆中的表达水平。方法ATDH和非ATDH患者各35例，实时荧光定量PCR检测两组患者血浆中miRNA-3620的相对表达量，两组间比较采用t检验；根据miRNA-3620水平绘制受试者工作特征曲线，评估血浆中miRNA-3620在ATDH诊断中的价值。结果ATDH患者和非ATDH患者血浆中miRNA-3620表达量分别为1．65±1．43和0．71±0．45，差异有统计学意义（t=3．703，P〈0．01）。miRNA-3620表达水平的最佳截点为1．15，曲线下面积为0．71（95％CI：0．43～1．45），miRNA-3620诊断ATDH的敏感度为60．0％、特异度为82.9％、阳性预测值为77．8％、阴性预测值为67．4％，正确诊断ATDH21例，非ATDH29例，准确度为71．4％。结论ATDH患者血浆中miRNA-3620表达水平明显升高。
- 谢平朱彤陈彩萍白茹赵晖朱伟星刘亮明
- 关键词：结核
- 糖原合成激酶3β在急性肝衰竭免疫炎症反应中的作用及机制研究进展被引量：5
- 2017年
- 糖原合成激酶3β(GSK3β)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能够调节物质代谢、细胞生长及免疫炎症反应。近期研究发现GSK3β在急性肝衰竭中能够通过激活NF-κB炎症信号通路、增强IRF3固有免疫反应、促进氧化应激及抑制自噬等方式促进炎症反应。
- 谈志丽钟欢朱彤刘亮明
- 关键词：GSK3Β急性肝衰竭免疫炎症反应
- IRF3 shRNA腺病毒包装及其对RAW264.7细胞IRF3表达的抑制效应被引量：1
- 2016年
- 目的重组并包装干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)腺病毒,研究该病毒对RAW264.7细胞IRF3基因表达及对细胞增殖活性和吞噬功能的影响。方法采用酶切和连接方法构建p Adeno-U6-CMV-EGFP-IRF3 sh RNA质粒;借助Ad MaxTM病毒包装系统完成IRF3基因干扰腺病毒的重组与包装;IRF3基因表达分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测;RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬功能分别采用CCK8分析和吞墨试验检测。结果 IRF3基因的干扰片段及对照序列被正确插入p Adeno-U6-CMV-EGFP质粒AgeⅠ和Eco RⅠ酶切位点之间,经PCR扩增及DNA测序证实;RAW264.7细胞组成性表达IRF3基因,针对IRF3基因后部序列的干扰腺病毒Y2147明显抑制了IRF3 m RNA和蛋白质的表达,而针对IRF3基因前部及中部序列及对照序的干扰腺病毒对IRF3的表达无明显沉默或封闭效应;腺病毒Y2147对RAW264.7细胞的增殖活性及吞噬功能无明显不良影响。结论成功构建并包装了IRF3 sh RNA腺病毒,该病毒能有效抑制RAW264.7细胞IRF3 m RNA和蛋白表达,且对细胞的增殖活性和吞噬能力无不良影响。
- 涂文娟朱彤谈志丽刘亮明
- 关键词：干扰素调节因子3短发夹RNA腺病毒RAW264.7细胞
- 干扰素调节因子3在感染性疾病固有免疫机制中的研究进展
- 2015年
- 固有免疫系统是机体天然的免疫防御系统，是抵抗病原微生物感染的第一道防线。固有免疫功能发挥的一个重要机制在于固有免疫细胞模式识别受体（pattern recognition receptors,
- 朱彤刘亮明涂文娟谈志丽
- 关键词：干扰素调节因子3感染性疾病免疫机制模式识别受体免疫系统
- 腺病毒对原代枯否细胞转染效率及增殖活性的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:研究腺病毒对原代肝枯否细胞(Kupffer cell,KC)的转染效率和增殖活性影响。方法:分离纯化大鼠肝KC,并以携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的腺病毒以不同的感染复数(multiplicity of infection,MOI)转染KC;24 h后,采用荧光显微镜和流式细胞术评估腺病毒的转染效率,以CCK-8比色法检测腺病毒对KC增殖活性的影响。结果 :经统计学处理,当病毒MOI值分别为0、100、300、500、700、900时,荧光显微镜以及流式细胞术测得不同组间GFP表达阳性细胞率均存在明显的差异(均P<0.05)。经CCK8比色法发现,当MOI为300、500、700、900时各组间细胞增殖活性存在明显差异(均P<0.05),而当MOI为0、100、300时各组间细胞增殖活性无明显差异(均P>0.05)。结论 :腺病毒能够有效转染大鼠肝脏KC细胞并表达绿色荧光蛋白。且随着病毒MOI值的增加,腺病毒转染效率逐渐增加。大剂量的病毒对KC增殖活性存在不良影响。
- 朱彤涂文娟谈志丽刘亮明
- 关键词：腺病毒转染绿色荧光蛋白细胞增殖活性
- UⅡ/UT系统对LPS刺激枯否细胞固有免疫炎症信号通路TLR4-IRF3的影响被引量：5
- 2014年
- 目的:探讨UrotensinⅡ(UⅡ)/UT系统对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)固有免疫炎症信号通路Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法:体外分离培养大鼠肝KCs,KCs培养上清液促炎性细胞因子IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平采用ELISA分析检测,细胞表面TLR4的表达采用流式细胞技术分析,IRF3基因和蛋白表达情况分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测。结果:LPS刺激后,KCs培养上清液IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平、细胞表面TLR4表达阳性细胞率及细胞内IRF3 mRNA表达水平均显著升高,UT拮抗剂urantide预处理抑制了LPS刺激诱导KCs对上述分子的上调表达;LPS的应用也造成了KCs胞核内IRF3蛋白表达水平升高,而使胞浆内IRF3蛋白表达水平降低,urantide预处理后,抑制了LPS诱导KCs核内IRF3蛋白上调和胞浆水平下调。结论:UⅡ/UT系统通过对TLR4-IRF3通路的正性调控作用,介导了或至少部分介导了LPS刺激KCs的免疫性炎症分泌效应。
- 涂文娟汪小庭刘亮明朱彤梁冬雨杨志文高得勇
- 关键词：枯否细胞炎症URANTIDE干扰素调节因子3
- LPS刺激诱导大鼠原代枯否细胞基因表达谱变化分析被引量：3
- 2016年
- 目的:研究脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激原代大鼠枯否细胞(Kupffer cell,KC)基因表达谱的变化情况。方法:胶原酶灌注消化和不连续密度梯度离心分离培养大鼠原代肝脏KC,采用LPS刺激细胞。One Array基因表达谱芯片检测LPS刺激后,细胞内基因表达谱的变化。采用实时荧光定量PCR法对表达上调最显著的基因进行验证。结果:基因芯片结果显示LPS刺激后,原代KC内基因表达谱发生了明显变化。与正常对照组相比,LPS刺激组基因表达上调27个(包括Ces1f、Slc17a3、Slc21a4、Hsd17b2、Sorbs2、Ccdc116、Mgam、Myo5b、Etl4、Fabp1、Kif4b、Fosl1、Cyp4a1、Penk、Tmem221、Rpl5、Nr2f1、Hoxb1、Gpr165、Fam90a13p、Kpna6、Irak1bp1、Kcnh1和4个尚未命名基因),表达下调4个(包括Oc90、Tagln、Arxes2和Olr830)。其中Ces1f为上调最显著的基因。实时荧光定量PCR验证结果显示,LPS刺激诱导KC对Ces1f基因表达水平上调达23.88倍。结论:LPS刺激可诱导大鼠原代KC基因表达谱发生变化。其中,Ces1f基因的上调表达最为显著。
- 谈志丽朱彤涂文娟刘亮明
- 关键词：脂多糖基因表达谱芯片分析
- 高度保守的RNA结合蛋白-Pumilio在小鼠精子发生中作用的研究
- 精子发生的过程是一个复杂的发育过程,这一过程涉及精原干细胞和精原细胞有丝分裂,然后分化为精母细胞进行减数分裂,最终形成成熟的精子,因此精子发生为研究发育分化过程中的基因表达的调控提供了一个很好的模型,在精子分化的过程中涉...
- 朱彤
- 文献传递
- 在LPS刺激的枯否细胞中敲减干扰素调节因子3（IRF3）表达可影响多条信号转导通路被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨 IRF3 shRNA对脂多糖（ lipopolysaccharide,LPS）刺激枯否细胞（ Kupffer cell,KC） TLR4信号下游 IRF3-IFN-β、NF-κB/p38 MAPK-TNF-α/IL-1β和 IL-10分子的影响。方法采用在体灌注分离培养大鼠原代KC,并以IRF3 shRNA腺病毒体外感染KC。细胞分4组：1组：腺病毒（-）LPS（-）；2组：腺病毒（-）LPS（＋）；3组：腺病毒（＋）LPS（-）；4组：腺病毒（＋）LPS（＋）。 KC培养上清液细胞因子的分泌水平采用ELISA分析；mRNA表达采用real-time PCR检测；KC核蛋白质表达采用 Western blot方法。结果 LPS刺激诱导了原代 KC对 IRF3 mRNA和蛋白质的表达, IRF3 shRNA腺病毒应用后,细胞对IRF3 mRNA的组成性表达及LPS刺激诱导的IRF3 mRNA和蛋白质表达均明显受抑,但对IRF3蛋白质核内组成性表达无明显影响；LPS刺激枯否细胞IFN-β mRNA表达和蛋白质分泌均升高。 IRF3 shRNA应用后,抑制了上述LPS的刺激效应,但对细胞IFN-β的组成性表达和分泌无明显影响；LPS刺激诱导了细胞对前炎细胞因子TNF-α和IL-1β mRNA表达及蛋白质的分泌,IRF3 shRNA腺病毒的应用,抑制了LPS刺激诱导细胞TNF-α和IL-1β蛋白质分泌水平,但对LPS刺激细胞TNF-α和IL-1β mRNA表达以及细胞组成性TNF-α和IL-1β mRNA表达和蛋白质分泌无明显影响；LPS刺激后,细胞IL-10 mRNA表达和培养上清液IL-10蛋白质分泌均显著增加。 IRF3 shRNA腺病毒的应用,促进了LPS刺激诱导KC对IL-10的转录表达和分泌,但对细胞组成性IL-10表达和分泌无明显影响；LPS刺激使核内p-p65和p-p38 MAPK蛋白水平升高,但IRF3 shRNA腺病毒应用对LPS刺激细胞上述分子表达及对细胞组成性表达均无明显影响。结论干扰腺病毒能有效抑制LPS刺激原代枯否细胞IRF3表达及其下游信号转导；IRF3有助于促进LPS刺激KC对TNF-α和IL-1β分泌,但抑制LPS刺激后IL-10的表达；LPS诱导细胞NF-κB和p38 MAPK活化不受IRF3信号影响。
- 朱彤涂文娟谈志丽刘亮明
- 关键词：干扰素调节因子3
