曾杨
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：广州医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省名医工程研究项目更多>>
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- 研究电压门控性钠离子通道的3种细胞处理方法比较
- 2011年
- 目的 建立适用于膜片钳技术记录电压门控性钠离子通道的3种细胞处理方法并进行比较.方法 采用急性分离技术、分离脑片技术、pCMV_SCN1A质粒钙转染HEK293细胞3种方式处理细胞,镜下观察细胞形态,膜片钳记录钠通道激活情况.结果 急性分离的神经元形态正常,有较长突起；膜片钳记录封接成功率达50％以上,记录到电流的细胞膜电容为（7.56±3.47）pF（n=20）,串联电阻为（10.18±4.82）MΩ（n=20）.分离脑片的神经元形态正常饱满；膜片钳记录封接成功率达30％以上,记录到电流的细胞膜电容为（9.45±4.26）pF（n=10）,串联电阻为（12.53±3.87）MΩ（n=10）.钙转染处理的细胞完整,有立体感；膜片钳记录封接成功率约20％,记录到电流的细胞膜电容为（8.79±4.54）pF（n=10）,串联电阻为（14.12±4.26）MΩ（n=10）.3种细胞处理方法均能提供研究所需的钠通道电流.结论 3种细胞处理方法均可以简单、快速记录电压门控性钠离子通道,各有优缺点,适用于不同的研究需求.
- 曾杨廖卫平
- 关键词：钠通道膜片钳术全细胞记录癫痫
- 伊莱西胺对小鼠海马神经元钠离子通道作用机制研究
- 曾杨
- In-Fusion技术构建Ⅰ型钠通道与红色荧光蛋白共表达载体及其突变载体被引量：7
- 2011年
- 目的:构建Ⅰ型钠通道(NaV1.1)与红色荧光蛋白(DsRed)共表达载体及其突变载体。方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到DsRed真核细胞表达载体(pCMV-IRES-DsRed)。限制性内切酶对载体进行酶切并回收线性载体片段,PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到pCMV-SCN1A-IRES-DsRed。将其转染HEK293T细胞,Western blot检测NaV1.1的表达。定点诱变试剂盒对其进行定点诱变。结果:成功构建NaV1.1与DsRed共表达载体,SCN1A基因所编码的第1623位密码子由谷氨酸(Glu)突变为丙氨酸(Ala)。结论:NaV1.1与DsRed共表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致NaV1.1功能的改变奠定了基础。
- 刘超汤斌曾杨于美娟石奕武廖卫平
- 关键词：钠通道红色荧光蛋白诱变SCN1A癫痫
- 人及小鼠钠通道SCN3A基因的启动子及其上游调控区的分析被引量：1
- 2009年
- 为了比较研究人与小鼠SCN3A基因的启动子及其上游调控区的特征,采用5′-FullRACE方法对人及小鼠SCN3A基因的转录起始点进行了准确定位,通过序列测定及对比分析证明:确定人和小鼠SCN3A基因的转录起始点均为"A",人SCN3A基因转录起始点位于翻译起始点上游约27kb处,而小鼠位于翻译起始点上游约31kb处.人SCN3A基因5′非翻译区存在两个5′非翻译外显子,而小鼠只有一个5′非翻译外显子.人和小鼠SCN3A基因核心启动子区(-80～+70)的同源率高达96.0%,存在相同的启动子核心元件,BRE/和TATA;在-400至+200区段内预测到人存在而小鼠不存在的转录因子有PHR1、GATA-1、FOXN2、NF-1及AP-4,小鼠存在而人不存在的转录因子Sp、Sp3及GBF.人和小鼠SCN3A启动子区特征的异同将为进一步研究该基因在人和小鼠的表达调控机制提供重要线索.
- 龙跃生赵绮华曾涛曾杨孙卫文廖卫平
- 关键词：启动子
