张霆
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院生物治疗国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人GDF-5重组腺病毒载体的构建及其在人间充质干细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 本研究目的在于构建携带GDF-5基因的重组腺病毒表达载体,并用其感染人骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)研究GDF-5的表达。从含有人GDF-5基因核心序列的质粒pCMV-SPORT6上通过PCR扩增GDF-5,将其酶切连接到穿梭质粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183中和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆并酶切鉴定,线性化后磷酸钙法转染入人胚肾293细胞中包装、扩增,得到含有GDF-5基因的重组腺病毒并测定其滴度。用收集的腺病毒感染靶细胞MSCs,在基因水平检测GDF-5的表达情况。结果表明,成功构建了含有GDF-5基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1×109PFU/ml。重组腺病毒能有效感染MSCs并表达目的基因。通过构建该腺病毒并感染人MSCs可得到能持续一定时间表达GDF-5蛋白的MSCs,为这种转基因的MSCs进一步修复组织奠定了基础。
- 程相俊刘浩薛建新张霆
- 关键词：生长分化因子5间充质干细胞重组腺病毒基因治疗
- 腺病毒介导的生长分化因子5基因对hBMSCs成骨分化的影响被引量：3
- 2009年
- 目的利用重组腺病毒载体将生长分化因子5(growth and differentiation factor5,GDF-5)基因导入hBMSCs,研究GDF-5基因的表达和对hBMSCs成骨分化的影响。方法将重组腺病毒GDF-5(adenovirus GDF-5,Ad-GDF-5)[含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记]和空载腺病毒Ad-GFP进行扩增并测定滴度,并以不同滴度两种病毒感染第3代hBMSCs,干预后2d荧光显微镜下观察GFP表达情况,RT-PCR检测GDF-5在hBMSCs中的表达。取第3代贴壁hBMSCs随机分为4组:实验组(GDF-5基因转染组)、成骨诱导组、空载组和对照组。于干预后不同时间行倒置相差显微镜观察、荧光显微镜观察、荧光定量RT-PCR、免疫荧光染色和vonKossa染色检测细胞分化情况。结果Ad-GDF-5滴度为1.0×109pfu/mL,Ad-GFP滴度为1.2×109pfu/mL。Ad-GDF-5及Ad-GFP均能对hBMSCs有效感染,并使其表达目的基因和GFP基因。干预后1～7d实验组和成骨诱导组hBMSCs细胞形态及生长方式向成骨细胞转化,而对照组和空载组hBMSCs仍保持原有形态及生长方式。荧光定量RT-PCR检测示,干预后4d实验组GDF-5基因表达明显高于其余各组(P<0.05);实验组和成骨诱导组ALP、ColⅠ、骨钙素基因表达均高于空载组和对照组(P<0.05),成骨诱导组ColⅠ基因表达高于实验组(P<0.05)。干预后4d,免疫荧光染色示成骨诱导组和实验组细胞表达并分泌ColⅠ,空载组和对照组细胞未见ColⅠ表达。干预后10d,成骨诱导组和实验组细胞vonKossa染色为阳性,对照组和空载组为阴性。结论GDF-5基因可通过腺病毒载体导入hBMSCs稳定表达,并促使其成骨分化,为进一步研究这种转基因hBMSCs修复骨组织奠定了基础。
- 程相俊刘浩张霆黄巧蓉
- 关键词：生长分化因子5HBMSCS重组腺病毒分化基因治疗
