张毅
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 重叠延伸PCR法扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因及生物信息学分析
- 2012年
- 利用重叠延伸PCR技术扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因,构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并进行了蛋白的诱导表达。通过序列测定和ORF软件分析,该融合基因含有1个1 005 bp的ORF,编码335个氨基酸。应用生物信息学方法,对该融合基因编码的蛋白ZtaN-p23从氨基酸组成、理化性质、信号肽、疏水性/亲水性、二级结构、亚细胞定位、功能域和高级结构等方面进行了预测和分析。结果表明,该蛋白的预测分子量为46.2 kD,理论等电点约为8.97,是亲水性蛋白,推测它定位于细胞质中。序列分析表明,该蛋白可能具有信号转导、转录调控、免疫应答等功能。预测的二级结构及三级结构都表明该蛋白含有较多的不规则卷曲和α-螺旋,三级结构上呈对称形状。
- 张毅周淑艳陈锐孙业红李体远
- 关键词：PCREB病毒生物信息学
- EB病毒融合蛋白ZtaN-p23在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的:克隆EB病毒立即早期蛋白ZtaN和衣壳蛋白p23,构建原核表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,为后续利用蛋白进行疾病诊断奠定基础。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从B95-8细胞中分别扩增出目的基因BZLF1N和BLRF2,利用融合PCR法将两个基因进行连接,构建重组质粒pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。加入IPTG诱导表达融合蛋白ZtaN-p23,通过SDS-PAGE和Western blot确定蛋白表达量及活性鉴定。结果:重组质粒pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2经双酶切鉴定和序列分析正确,证实已成功构建原核表达载体;SDS-PAGE显示诱导的蛋白Mr约46 000,与预期值一致;对融合蛋白表达条件进行优化后,发现其主要以包涵体的形式存在于细胞中;亲和层析结果显示纯化后的ZtaN-p23纯度>95%;Westernblot显示ZtaN-p23具有良好的生物活性。结论:成功构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并在大肠杆菌中进行了表达纯化,融合蛋白显示出良好的活性。
- 张毅周淑艳孙业红涂惠英涂惠英陈锐秦晓林
- 关键词：EB病毒纯化
- 人脐带间充质干细胞对新生鼠肺纤维化的防治作用被引量：3
- 2012年
- 背景:间充质干细胞因具有自我增殖、多向分化潜能和旁分泌等功能,成为慢性肺部疾病细胞替代治疗的研究热点。目的:探讨人脐带间充质干细胞对新生大鼠肺纤维化的防治作用及对正常肺发育的影响。方法:将32只新生2dSD大鼠随机数字表法均分为PBS对照组、人脐带间充质干细胞组、博来霉素对照组,博来霉素+人脐带间充质干细胞组,后两组腹腔注射博来霉素建立肺纤维化模型,2个细胞组于第7天腹腔注射人脐带间充质干细胞。结果与结论:博来霉素对照组羟脯氨酸水平最高,肺纤维化最严重,与其他3组比较差异均有显著性意义(P<0.05);博来霉素干预的两组辐射状肺泡计数和肺组织匀浆中的转化生长因子β1mRNA表达均低于其他两组(P<0.05),但血管内皮生长因子mRNA表达升高(P<0.05),给予细胞治疗后,上述指标均有好转(P<0.05)。说明人脐带间充质干细胞能过旁分泌增加血管内皮生长因子mRNA表达,下调转化生长因子β1mRNA水平,对肺纤维化起保护作用。另外,正常鼠腹腔注射脐带间充质干细胞后辐射状肺泡计算无明显变化,证实其对新生鼠肺发育无明显影响。
- 涂惠英吴本清陈丽张毅陈子盛
- 关键词：肺纤维化人脐带间充质干细胞慢性肺部疾病干细胞治疗干细胞
