张文昌
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省科技厅攻关项目安徽高校省级自然科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- RTCA实时定量动态监测HCMV在MRC-5细胞上的增殖的研究被引量：1
- 2016年
- 目的采用实时细胞分析(RTCA)系统监测人巨细胞病毒(HCMV)在MRC-5细胞株上的复制增殖过程,评价此方法在动态监测病毒增殖中的应用价值。方法应用RTCA动态观察MRC-5细胞在不同阶段的生长指数(CI),选择合适的细胞浓度进行HCMV增殖的研究,同时采用传统的空斑形成试验和间接免疫荧光实验作为该方法学的比较和结果验证。结果选择MRC-5最适细胞浓度为0.5×105个/孔;与空斑试验及免疫荧光结果比较,半数细胞指数CI值对应时间(CIT50)与病毒初始滴度有良好的线性关系;同时CI值与病毒滴度随着时间的持续,显示出明显的负相关性(r=-0.977,P<0.05)。结论 RTCA技术可实时监测记录细胞生长状态,反应细胞贴壁、伸展,同时能实时定量监测HCMV增殖复制状况,数据客观可靠,为今后基础实验研究提供了新的实验技术和方法。
- 张业婷钟峰姚瑶赵俊俞海洋张文昌陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒增殖
- HCMV-HIV 共感染患者 HCMV gN 基因型分析
- 2015年
- 目的：了解HIV感染者中人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus， HCMV）糖蛋白N （ glycoprotein N， gN）的型别分布；探讨HCMV-HIV共感染对患者疾病进程的影响及不同gN基因型感染与获得性免疫缺陷综合征（ acquired immuno-deficiency syndrome，AIDS）发病和相关死亡的关系。方法对359例HIV感染者进行HCMV pp65抗原血症检测，利用HCMV gN（UL73）基因巢式PCR扩增HCMV活动性感染患者全血DNA，限制性核酸内切酶MboⅠ、ScaⅠ和SalⅠ对巢式PCR产物进行限制性片段长度多态性分析（ restricted fragment length polymorphism analysis， RFLP），队列随访研究不同型别HCMV感染与AIDS患者发病和死亡的关系。结果 HCMV pp65抗原血症检测发现，359例HIV感染者中HCMV活动性感染患者28例，对其中20例HCMV活动性感染患者的全血DNA样本进行PCR-RFLP分析，结果表明，HIV感染患者中HCMV gN基因型分布如下：gN-3a，4／20（20％）；gN-1，4／20（20％）；gN-4b，1／20（5％）；gN-4d，1／20（5％）；混合感染，10／20（50％）；在随访期内，HCMV UL73基因阳性的HIV感染者更易转变为AIDS患者（RR＝9．78），且gN-1和gN-4型感染者发病和相关死亡风险是其他基因型的4．6倍（P＜0．05）。结论 HCMV活动性感染可能会加速HIV感染者疾病进程，其中以gN-1和gN-4型HCMV活动性感染相对危险度最高。
- 俞俊岭吴建军胡中旺类延花李国兰张文昌赵俊张俊玲甘霖余莉陈敬贤王明丽
- 关键词：人类免疫缺陷病毒人巨细胞病毒限制性片段长度多态性分析
- HCMV皮层蛋白pUL76非保守C端与染色体损伤的研究
- 目的：本研究通过构建人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）皮层蛋白pUL76的保守N端和非保守C端的真核表达载体，转染至真核细胞，确定pUL76引起染色体损伤的决定序列。 方法：通过PCR...
- 张文昌
- 关键词：真核细胞绿色荧光蛋白
- 文献传递
- TSG-6蛋白对急性炎症抑制作用的研究新进展被引量：3
- 2018年
- 肿瘤坏死因子α刺激基因6（tumor necrosis factor-α stimulated gene 6,TSG-6）是一种多功能基因,其编码的肿瘤坏死因子α诱导蛋白6（简称TSG-6蛋白）在对急性炎症的抑制以及细胞外基质的重塑中发挥重要作用.近年来,人们对于TSG-6蛋白功能和性质的研究日益关注.此文就TSG6蛋白的炎症抑制作用做一综述.
- 徐懿苗张文昌甘霖赵俊施浩强王明丽
- 关键词：细胞黏附分子炎症细胞因子类
- HCMV急性间质性肺炎小鼠模型的建立被引量：4
- 2014年
- 目的建立人巨细胞病毒（HCMV）急性间质性肺炎的小鼠模型。方法用5．5×105PFU的HCMVADl69株尾静脉注射6～8周SPF级BALB／c小鼠作为实验组，同时设立正常细胞作为对照组，分别于接种后第5天和第30天处死小鼠，无菌取小鼠肺组织，通过病毒分离、PCR检测病毒特定保守基因、免疫组化、Westernblot和HE染色的方法，观察检测小鼠肺组织中HCMV及其组织病理变化。结果在感染后第5天和第30天实验组小鼠的肺组织中分离出了HC—MV病毒；PCR检测到HCMV特异性早晚期基因IE和UL55DNA；Westernblot、免疫组化检测到HCMV特异性早晚期蛋白IE和gB；HE染色证实肺组织有明显急性间质性肺炎的病理改变；对照组对应结果全为阴性。结论通过尾静脉注射HCMVADl69株病毒，在感染后第5天成功构建了HCMV急性间质性肺炎小鼠模型，该模型的建立有利于该种疾病的发病机制研究及相关抗病毒疫苗和药物的研发。
- 庄晓亮木朝宇俞俊岭张文昌甘霖陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒小鼠模型间质性肺炎
- 人巨细胞病毒pUL76蛋白非保守C端与蛋白聚集体形成的研究
- 2015年
- 目的通过分别构建人巨细胞病毒(HCMV)UL76基因编码蛋白的全长以及保守N端和非保守C端的真核表达质粒,探讨p UL76引起核内蛋白聚集体形成的决定序列。方法根据Gen Bank中HCMV AD169(FJ527563.1)株基因序列设计分别用于扩增p UL76全长以及保守N端和非保守C端的引物,将3段序列分别构建至增强型绿色荧光蛋白表达载体(p EGFP-N1)中,经双酶切和测序验证重组质粒的正确构建。空载体和3种重组质粒分别瞬时转染人胚肺成纤维细胞(HELF)和人肝癌细胞(Hep G-2),经逆转录(RTPCR)和Western blot法验证各段基因的正确表达,在荧光显微镜下观察转染不同重组质粒后细胞核内蛋白聚集体形成的状态。结果 p EGFP-N1空载体和p UL76保守N端均不能引起核内蛋白聚集体的形成,而p UL76及其非保守C端均能够引起核内蛋白聚集体的形成。结论 p UL76非保守C端是其引起核内蛋白聚集体形成所必须的。
- 张文昌陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒
- TSG-6对HCMV感染引起的TNF-α和IL-6表达水平的抑制作用被引量：2
- 2016年
- 目的研究肿瘤坏死因子α刺激基因-6（tumor necrosis factor α stimulated gene 6, TSG-6）在人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）感染所致的炎症过程中的作用及机制。
方法用HCMV感染人胚肺成纤维细胞（MRC-5）和视网膜上皮细胞（ARPE-19），并设正常细胞对照组和灭活病毒感染组。采用qRT-PCR和Western blot检测各组TSG-6 mRNA和蛋白表达水平。将重组人TSG-6蛋白（recombinant human TSG-6 protein, rhTSG-6） 100 ng/ml作用于HCMV感染的MRC-5细胞作为rhTSG-6干预组，采用ELISA方法检测细胞培养物上清中TNF-α和IL-6表达水平，用IFA及Western blot检测NF-κB核定位及其蛋白表达水平，并设正常细胞对照和病毒对照。
结果HCMV感染MRC-5细胞72 h时，TSG-6 mRNA表达量为细胞对照组的19倍，在感染96 h时TSG-6 mRNA表达达高峰，为细胞对照组的376倍；HCMV感染ARPE-19细胞96 h时，TSG-6 mRNA表达量为细胞对照组的15倍，在120 h时为细胞对照组的354倍。Western blot结果证实，TSG-6蛋白表达水平在相应时间点也随之升高。rhTSG-6作用于HCMV感染的MRC-5细胞后与病毒对照组相比，TNF-α、IL-6水平明显下降（P〈0.05），且TSG-6能抑制核转录因子（nuclear factor-kappaB, NF-κB）的核移位及蛋白的表达。
结论TSG-6参与HCMV引起的炎症反应，抑制HCMV相关炎性因子水平的表达并影响NF-κB的核定位。
- 姚瑶张文昌赵俊张业婷钟峰甘霖俞海洋陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒核转录因子-ΚB
- 参与病毒裂解性复制周期的人巨细胞病毒皮层蛋白
- 2014年
- 人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是疱疹病毒科β亚科的成员,具有典型的疱疹病毒结构和基因表达模式.在核衣壳与包膜之间的皮层区域含有多种蛋白以及病毒或细胞的RNA,这些蛋白统称为皮层蛋白.皮层蛋白不仅占病毒颗粒蛋白的大部分,而且功能多样.此文就HCMV皮层蛋白在病毒入胞、基因表达、免疫逃避、组装和释放几个重要阶段中的功能做一综述.
- 张文昌甘霖陈敬贤王明丽
- 关键词：巨细胞病毒基因表达免疫逃逸
- 鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-猪干扰素α1融合基因在大肠埃希菌中的可溶性表达及其生物学活性研究
- 2019年
- 为可溶性表达重组鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF)与猪干扰素α1(PoIFNα1)融合蛋白,并研究其生物学活性,本研究分别提取鸡、猪肝脏细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增ChGM-CSF和PoIFNα1基因,经linker连接上述两种基因后将其克隆于pET-32a原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE和western blot检测融合蛋白表达产物。在ST细胞/VSV病毒测定系统以细胞病变抑制法滴定该融合蛋白的抗病毒活性;同时用MTT法检测其对鸡淋巴细胞增殖活性的促进作用。结果显示,PCR扩增并融合后的ChGM-CSF和PoIFNα1融合基因约为1000bp,构建重组表达载体后,诱导表达的rChGM-CSF-PoIFNα1融合蛋白分子量约55ku,主要存在于破碎菌体的上清中,表达量较高。Westernblot检测结果显示,该融合蛋白分别能够与ChGM-CSF多抗和PoIFNα单克隆抗体特异性结合,其抗病毒比活性约为1.1×10^6IU/mg,并且具有促进鸡淋巴细胞增殖的活性。本研究为rChGM-CSF-PoIFNα1重组融合蛋白的研制及其相关活性的测定提供实验依据。
- 胡涛何志远张文昌张文昌王明丽
- 关键词：融合基因可溶性表达
