张德安
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗癫痫肽/GST融合表达载体的构建及蛋白表达
- 2007年
- 目的构建抗癫痫肽(anti-epilepsy peptide,AEP)/GST融合表达载体,原核表达GST-AEP融合蛋白。方法从克隆载体质粒pGEM-T/AEP中双酶切,得到AEP片段;通过中间载体puc18,转换酶位点;最后将AEP基因克隆入表达载体pGEX-4T-1质粒中,构建融合表达载体pGEX-4T-1/AEP;转化感受态大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-AEP融合蛋白;SDS-PAGE分析表达产物,确定蛋白质高表达条件;超声裂解法鉴定蛋白质可容性;凝胶薄层扫描确定蛋白质相对表达量。结果经酶切鉴定、测序证明,AEP基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量约为36 000的融合蛋白,该融合蛋白以包涵体形式存在,约占总蛋白质的70%左右。结论pGEX-4T-1/AEP载体构建成功,融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达。
- 张德安王宗仁高碧峰邵中军李晶华马静
- 关键词：GST融合蛋白原核表达
- 抗癫痫肽/GST融合表达及包涵体蛋白复性纯化被引量：1
- 2007年
- [目的]获得高纯度的谷胱甘肽硫转移酶/抗癫痫肽(GST-AEP)融合蛋白。[方法]异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组大肠杆菌DH5α表达GST-AEP融合蛋白,融合蛋白包涵体经过洗涤、变性、复性后,通过12%SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,凝胶薄层扫描检测其纯度,透析管进一步纯化蛋白,BCA法定量。[结果]从融合蛋白包涵体中获得了纯度达90%以上的目的蛋白,定量约0.163μg/μl。[结论]建立了有效纯化融合蛋白包涵体GST-AEP的方法,为对AEP进一步的相关研究奠定了基础。
- 张德安王宗仁邵中军高碧峰李晶华马静
- 关键词：融合蛋白包涵体复性蛋白纯化
- 重组抗癫痫肽二串体的表达、纯化与鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:利用基因工程方法表达抗癫痫肽(AEP)串联体蛋白,并进行纯化、鉴定。方法:PCR扩增AEP及AEP-His基因片段,并分别克隆至测序载体中;测序正确后,利用基因重组技术获得二串体基因,构建毕赤酵母表达载体pPIC9K-AEP2-His,甲醇诱导AEP2-His在毕赤酵母中表达,用Ni-chelating Sepharose FF柱纯化表达的融合蛋白,并用抗His单克隆抗体进行Western blot鉴定。结果:构建了AEP二串体酵母表达载体,获得了纯化的AEP2-His蛋白,其相对分子质量约20 000。结论:用基因串联思路表达小分子多肽是一种可行的方法;AEP2-His蛋白的成功表达为其功能研究奠定了基础。
- 王宗仁高碧峰袁有才李晶华张德安马静
- 关键词：串联体融合蛋白
- GST-AEP融合蛋白的表达、纯化和鉴定
- 2007年
- 目的利用GST融合基因表达系统表达GST-AEP融合蛋白,并进行纯化及鉴定。方法IPTG诱导重组质粒pGEX-4T-1/AEP在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,溶菌酶裂解后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,所得产物进行12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果大肠杆菌经诱导,高效表达出相对分子质量约34000的蛋白,与GST-AEP融合蛋白相符。Western blot结果显示该蛋白能够被兔抗GST多克隆抗体识别。结论已成功表达并纯化了融合蛋白,为更深入研究AEP的结构和功能奠定了基础。
- 高碧峰王宗仁卓鹏展张德安肖茜
- 关键词：谷胱甘肽融合蛋白纯化
- GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建、表达及鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的:为进一步研究抗癫痫肽(Anti-epilepsy peptide,AEP)的抗痫机制及筛选其相关作用蛋白,进行GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建及融合蛋白的表达。方法:通过PCR基因扩增对AEP基因进行扩增,并将其克隆于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导获得表达,并采用Western Blot进行检测。结果:成功构建了AEP原核表达载体,并在大肠杆菌Bl21中获得表达。结论:成功构建了GST/AEP原核表达载体,并表达了GST/AEP融合蛋白。
- 高碧峰王宗仁张德安
- 关键词：原核表达基因扩增
- 蜂毒肽抗风湿作用及对大鼠脊髓后角Fos表达的影响被引量：2
- 2007年
- 运用蜂毒进行抗风湿治疗在传统的中医学上已有近千年的历史,然而对它的主要抗风湿活性成分及其机制还不十分清楚。蜂毒肽占蜂毒干重的50%,是蜂毒的主要活性成分。本研究以SD大鼠为研究对象,以完全弗氏佐剂注入右侧后足垫皮内诱导建立跖关节类风湿关节炎模型,然后分别用蜂毒、蜂毒肽和生理盐水对模型动物进行治疗研究。通过测量跖关节肿胀度、缩足逃避反射时间以及脊髓后角内Fos的表达变化来评价疗效。结果显示:模型动物接受蜂毒肽与蜂毒治疗后,关节肿胀缓解,缩足逃避反射时间显著延长,脊髓后角内Fos的表达明显下降。本结果提示蜂毒肽可能是蜂毒治疗类风湿性关节炎的主要成分。
- 李晶华王宗仁邵中军行利马静赵燕玲龙铟张德安
- 关键词：蜂毒蜂毒肽类风湿关节炎
