张华群
- 作品数：14 被引量：10H指数：2
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会基础研究重点项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人精液源性病毒感染增强因子研究进展被引量：2
- 2010年
- 人精液前列腺酸性磷酸酶（prostatic acid phosphatase, PAP）多肽片段形成的淀粉样原纤维具有促进人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）感染的作用，这些原纤维被称为精液源性病毒感染增强因子（semen-derived enhancer of viral infection, SEVI），其中PAP第248—286位多肽片段（PAP248-286）促进HIV感染的作用最强。具有阳离子特性的SEVI可通过静电作用捕获HIV颗粒而促进HIV感染。近期研究报道，SEVI对异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒感染也有增强作用，可能与前列腺癌发生有关。某些多聚阴离子化合物和绿茶多酚成分能明显抑制SEVI活性。研究SEVI生物学特性及其功能对于HIV等病毒感染的防治具有重要意义。
- 张华群曹洁潘卫
- 关键词：HIV感染静电作用前列腺酸性磷酸酶
- HIV-1 HXB2株Tat核心碱性区多肽Tat_(38-61)的原核表达及其免疫反应性
- 2011年
- 目的 构建HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化及免疫反应性检测。方法采用PCR法从HIV-1 HXB2株Tat1-101基因中扩增编码Tat38-61的基因序列,克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61。转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析法纯化后,ELISA法鉴定其免疫反应性。结果重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61经双酶切及测序表明构建正确;SDS-PAGE分析显示,在相对分子质量约21 300处可见目的 蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的67.4%,主要以可溶形式表达;纯化后融合蛋白的纯度可达97%以上;ELISA结果显示,该融合蛋白与兔抗PEPTIDE-Tat1-101血清及HIV阳性血清均呈特异性反应。结论已成功构建了HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61的重组原核表达质粒,表达并纯化了PET32a(+)-Tat38-61融合蛋白,该融合蛋白碱性区表位得到较好的保留,为Tat38-61噬菌体突变文库的构建及亲和筛选奠定了基础。
- 庞强曹洁陈秋莉王锦红张华群黄德胜葛宜兵潘卫
- 关键词：重组融合蛋白质类原核细胞免疫反应性
- 基孔肯雅病毒包膜蛋白E2的全基因合成及原核表达被引量：3
- 2012年
- 目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列。结合重叠延伸PCR(OE-PCR)原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况。结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1～404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒pET21b-E2(1～404)和pET21b-E2(1～350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1～350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1～404)有明显提高。结论 E2蛋白跨膜疏水区(351～378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高。
- 章萍萍潘卫曹洁陈秋莉王锦红张华群葛宜兵祁培培刘超邓松华
- 关键词：缺失突变体原核表达
- 人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用
- 本发明涉及生物医药工程技术领域。HIV-1型转录反式激活因子(trans-activator of transcription，Tat)是HIV-1感染早期产生的重要调控蛋白。本发明的目的在于筛选到分子构象相对稳定且能引...
- 曹洁潘卫张华群陈秋莉王锦红廖文婷葛宜兵祁培培刘超章萍萍杨界何婷
- 一种缺失疏水区的人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用
- 本发明涉及生物医药工程技术领域，具体涉及一种缺失疏水区的人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用。本发明提供的一种人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体，是缺失疏水区的Tat△(31-45)突变体，其氨基酸序列如S...
- 曹洁杨界潘卫张华群王锦红廖文婷祁培培陈秋莉丁超何婷丁莹莹
- 文献传递
- 人类免疫缺陷病毒1型Tat蛋白N末端缺失突变体融合蛋白的表达及其免疫原性分析被引量：1
- 2011年
- 本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达及Ni^(2+)-NTA柱亲和层析纯化。纯化后的突变体融合蛋白PET32a-Tat22-101经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,其相对分子质量约为26.9kD。该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测结果表明,pET32a-Tat22-101融合蛋白不仅较好地保留其免疫原性,而且能诱导产生高滴度的针对Tat N末端区之外的Tat其他功能区表位的抗体,为进一步研究Tat生物学功能和研制新型HIV Tat疫苗奠定试验基础。
- 张华群廖文婷陈秋莉葛宜兵杨界章萍萍祁培培刘超何婷王锦红潘卫曹洁
- 关键词：人类免疫缺陷病毒1型TAT蛋白缺失突变免疫原性
- 噬菌体展示HIV-1 Tat38-61碱性区51和55位随机突变体文库的构建被引量：4
- 2011年
- 为了构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选,采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长Tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的Tat38-61突变体片段HIV-1 Tat38-61(51N/55N),克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库。结果显示文库的库容量为5.0×106,滴度为2.65×1012 TU/mL,阳性克隆率为56.50%;序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布,达到了对文库进行分子进化筛选的要求,为获得可用作疫苗候选物的新型Tat突变体奠定基础。
- 葛宜兵杨旭芳杜哲明庞强曹洁陈秋莉王锦红张华群廖文婷祁培培刘超章萍萍邓松华潘卫
- 关键词：HIV-1TAT随机突变噬菌体展示
- 人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用
- 本发明涉及生物医药工程技术领域。HIV-1型转录反式激活因子(trans-activator of transcription，Tat)是HIV-1感染早期产生的重要调控蛋白。本发明的目的在于筛选到分子构象相对稳定且能引...
- 曹洁潘卫张华群陈秋莉王锦红廖文婷葛宜兵祁培培刘超章萍萍杨界何婷
- 文献传递
- 一种缺失疏水区的人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用
- 本发明涉及生物医药工程技术领域，具体涉及一种缺失疏水区的人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用。本发明提供的一种人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体，是缺失疏水区的Tat△(31-45)突变体，其氨基酸序列如S...
- 曹洁杨界潘卫张华群王锦红廖文婷祁培培陈秋莉丁超何婷丁莹莹
- 文献传递
- Prokaryotic Expression and Immunogenic Analysis of the Recombinant Mutants of HIV-1 HXB2 Subtype Tat Protein
- 张华群戚中田潘卫曹洁廖文婷陈秋莉王锦红祁培培刘超葛宜兵章萍萍
