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烟草叶绿体转化载体的构建及转基因植株的获得被引量：14: 1998年; 选择烟草叶绿体基因组同源片段rp12-trnH-psbA和trnK-ORF509A,及aadA抗壮观霉素基因,构建烟草叶绿体转化载体pTRZ。制备pTRZ DNA金粉子弹,通过基因枪轰击烟草幼苗叶片,经壮观霉素筛选获得了愈伤组织和转化再生植株。对烟草叶绿体转化植株进行PCR和Southern分析,结果证明其中No.13、16、23为整入了外源aadA的叶绿体转基因植株,同时其子代呈现壮观霉素抗性,aadA基因得到稳定遗传。; 邹竹荣张中林山松倪丕冲沈桂芳; 关键词：烟草叶绿体转化转基因植株

叶绿体基因工程研究的理想材料——衣藻被引量：4: 1998年; 狭义的叶绿体基因工程主要是将目的基因经克隆、修饰后，与合适的表达元件（启动子、终止子、筛选标记基因等）及转化载体进行体外重组，并进而导入植物叶绿体中，通过同源重组，使之定点整合、稳定表达、稳定遗传并表现出目的性状的过程。广义的叶绿体基因工程则还包括叶...; 范国昌山松钱凯先钱凯先; 关键词：叶绿体基因工程衣藻

丙肝病毒融合抗原基因NS_3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究被引量：26: 1999年; 用ＰＣＲ方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ｃＤＮＡ文库中克隆了两段ＤＮＡ片段，即ＨＣＶ基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ｋｂ）的ｃＤＮＡ片段。在两段ｃＤＮＡ间加入连接肽Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ的密码子序列，构建成融合抗原基因ＮＳ３－Ｃ。将该融合基因与衣藻叶绿体基因ａｔｐＡ的启动子和ｒｂｃＬ基因的３′末端连接，得到丙肝病毒融合抗原基因ＮＳ３－Ｃ表达盒，再将该表达盒与选择标记基因ａａｄＡ表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接，构建成衣藻叶绿体转化载体ｐＳＳ６。基因枪法转化衣藻叶绿体，经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落，对转基因衣藻的ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明，融合抗原基因ＮＳ３－Ｃ已整合到衣藻叶绿体基因组中。; 张中林山松陈曦苏宁吴祥甫钱凯先沈桂芳; 关键词：基因融合叶绿体转化衣藻

苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达被引量：47: 2000年; 将全长３．５ｋｂ的Ｂｔ基因３'端缺失，得到长为２．１ｋｂ、１．８ｋｂ的基因。分别将这３个长度（１．８ｋｂ２．１ｋｂ、３．５ｋｂ）的基因置于水稻叶绿体ｐｓｂＡ基因的启动于和终止子调控之下，并与选择标记基因ａａｄＡ（编码氨基糖苷－３'－腺苷酸转移酶，具壮观霉素抗性）表达盒相连５以烟草叶绿体基因ｔｒｎＨ－ｐｓｂＡ－ｔｒｎＫ为同源片段，构建成叶绿体转化载体ｐＢＴ３、ｐＢＴ８和ｐＢＴ２２。用基因枪把Ｂｔ基因导入烟草叶绿体中，以壮观霉素筛选，获得转化再生植株。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ检测分析证明Ｂｔ基因已整合进入烟草叶绿体基因组中并得到表达。且子代呈现壮观霉素抗性，即外源基因得到稳定的遗传。利用转基因植株叶片对棉铃虫进行杀虫实验，有些转化植株表现出较强的抗虫性。总体上来说，转Ｂｔ全长基因的烟草植株，其杀虫效果最好，其余两种差异不大。首次报道将Ｂｔ基因成功转入高等植物叶绿体并获得表达。; 张中林任延国沈燕新山松范国昌吴祥甫钱凯先沈桂芳; 关键词：BT基因叶绿体烟草苏云金芽孢杆菌

烟草叶绿体16S启动子的克隆改造及转基因植株的获得被引量：10: 1999年; 设计引物并克隆了烟草叶绿体16SrDNA基因的启动子,并在其下游加入了rbcL基因的SD序列,以使该启动子能有效翻译外源基因;进一步以aadA基因作为外源基因,以psbA基因的3’序列为终止子,构建成aadA基因表达盒;将此表达盒插入烟草叶绿体同源片段trnK-psbA-trnH中,构建成烟草叶绿体转化及表达载体P16T.用基因枪微弹轰击转化法,将该载体导人野生型大烟草叶绿体中,建立了烟草叶绿体遗传转化体系,转化频率为0.5株/枪.对转化植株进行PCR及遗传杂交实验分析,证明外源基因已在烟草叶绿体中稳定整合并遵循母系遗传规律.; 山松张中林陈曦刘春英沈桂芳; 关键词：烟草基因枪转化法叶绿体克隆

丙肝病毒融合抗原基因导入烟草叶绿体及转化株同质化的研究被引量：13: 2000年; 植物生物反应器的研究已成为当前基因工程领域的一个新生长点。本实验用 PCR方法 ,从丙型肝炎病毒 c DNA文库中克隆了非结构 NS3区基因片段及核心抗原 C区基因片段 ,并在两段基因间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 NS3- C。将该融合基因转入烟草叶绿体转化及表达载体中 ,通过基因枪转化法得到转基因植株。对 NS3- C融合基因转化植株进行 PCR及 Southern杂交试验分析 ,证明外源基因已整合到烟草叶绿体基因组中 ;对转化植株的 Southern杂交试验还表明 ,通过不断地分化筛选培养。; 山松张中林吴祥甫沈桂芳; 关键词：烟草同质化

除草剂抗性基因bar导入烟草叶绿体被引量：29: 1999年; 将编码Phosphinothricin acetyltransferase的bar基因与水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子构建成表达盒,连同烟草叶绿体基因组同源片段rpl2-trnH-psbA和trnK-ORF509A以及选择标记基因aadA一起构建成烟草叶绿体转化载体pTZBA.基因枪法转化烟草叶片,经壮观霉素筛选获得转化再生植株.分别以1.0kb的叶绿体同源片段trnK-ORF509A和0.6kb的bar基因为探针,对转基因烟草叶绿体DNA进行Southern杂交检测,证明外源基因已整合入烟草叶绿体基因组中.抗性试验表明,转基因植株具备除草剂(PPT)抗性.; 张中林山松陈曦刘春英钱凯先沈桂芳; 关键词：BAR基因烟草除草剂叶绿体

转基因植物生产动物疫苗的研究及应用被引量：8: 1998年; 转基因植物生产动物疫苗的研究及应用范国昌１，２山松１钱凯先２沈桂芳１（１．中国农业科学院生物技术研究中心，北京１０００８１）（２．浙江大学生物科学与技术系，杭州３１００２７）ＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＰｌａｎ...; 范国昌山松钱凯先沈桂芳; 关键词：转基因植物动物疫苗

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山松