目的:探讨microRNA-377(miR-377)与组蛋白甲基转移酶SMYD3在肝癌中的表达规律及与肝癌的相关性.方法:利用实时定量PCR分别检测不同肝组织及肝细胞系中miR-377表达水平,应用实时定量PCR和Western blot分别检测不同肝组织及肝细胞系中SMYD3 mRNA和蛋白水平的表达情况.通过转染miR-377模拟物上调其在肝癌细胞株HepG2中表达后,应用实时定量PCR、Western blot分别检测转染前后HepG2中SMYD3 mRNA和蛋白表达的变化.结果:MiR-377 mRNA在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显降低(0.331±0.059,0.139±0.064 vs 0.874±0.178,均P<0.05);在HepG2中的表达较L-02明显降低(0.145±0.021vs0.868±0.194,P<0.05).SMYD3 mRNA和蛋白质在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显升高(mRNA:3.836±0.137,5.836±0.965vs1.235±0.332;蛋白:0.381±0.020,0.484±0.030vs0.252±0.015;均P<0.05).SMYD3 mRNA和蛋白质在肝癌细胞系HepG2中的表达较正常肝细胞系L-02明显升高(mRNA:0.845±0.047vs0.348±0.134;蛋白:0.575±0.008vs0.259±0.007,均P<0.05).转染miRNA-377模拟物上调HepG2中miR-377表达后转染组SMYD3 mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显下降(mRNA:0.125±0.010 vs 0.857±0.163,0.779±0.167;蛋白:0.092±0.026 vs 0.347±0.040,0.383±0.054,均P<0.05).结论:miRNA-377在肝癌中表达明显下调,其靶基因SMYD3表达上调;表达下调的miRNA-377丧失对SMYD3表达的抑制可能是肝癌发生的重要机制.
目的:探讨microRNA(miR)-145是否通过调控c-Myc参与肝癌行为的调控.方法:实时定量PCR检测肝组织及细胞系miR-145表达水平;检测不同肝组织c-Myc的mRNA和蛋白表达量;通过转染上调miR-145在HepG2细胞表达后,检测转染前后空白组、实验组、阴性对照组HepG2中c-Myc的mRNA和蛋白表达量;应用流式细胞仪检测转染前后各组HepG2的凋亡情况.结果:miR-145mRNA在正常肝组织中表达明显高于癌旁和肝癌组织(0.878±0.146vs0.265±0.084,0.271±0.096,均P<0.05);癌旁和肝癌组织中miR-145mRNA的表达量差别无统计学意义.miR-145mRNA在LO-2中的表达明显高于HepG2(0.755±0.185vs0.471±0.074,P<0.05).c-Myc mRNA和蛋白在癌旁和肝癌中表达均高于正常肝组织(mRNA:0.136±0.071,0.451±0.026vs0.029±0.023;蛋白:0.301±0.022,0.445±0.018vs0.137±0.011,均P<0.05),且在肝癌组织中表达量较癌旁组织中明显升高(P<0.05).转染miR-145mim-i c s后空白组、实验组、阴性对照组c-M y cmRNA表达差异无统计学意义;而相对于空白组和阴性对照组,实验组c-Myc蛋白表达量表达明显下降(0.146±0.011vs0.366±0.014,0.350±0.013,均P<0.05),空白组和阴性对照组之间差异无统计学意义.流式细胞术检测发现,在HepG2中上调miR-145的表达后,细胞的凋亡明显增多,实验组与空白组和阴性对照组之间有明显差异(3.000±0.100vs1.167±0.153,0.933±0.208,均P<0.05).结论:miR-145反向调节c-Myc的表达;表达下调的miR-145丧失对c-Myc的抑制可能是肝癌发生的重要机制;miR-145能够作为抑癌基因促进细胞凋亡.
