娄颜坤
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 化学激活和季节对克隆猪出生率的影响被引量：5
- 2009年
- 为了解化学激活对克隆猪出生效率的影响,研究了体外成熟的猪卵母细胞被激活恢复减数分裂到克隆猪出生的整个过程.首先研究了电激活(Ele),Ele+CHX+CB和Ele+6-DMAP3种激活方法对猪卵母细胞孤雌激活(parthenogenetic,PA)和核移植(nucleartransfer,NT)重构胚体外发育的影响.比较了Ele或Ele+CHX+CB激活方法对克隆猪出生效率的影响.实验中单独列出了PA胚的扩张囊胚率或NT优质囊胚率来代表囊胚的质量.结果表明:化学联合激活提高了PA的囊胚率和扩张囊胚率,但对PA胚的卵裂率和囊胚细胞数没有显著影响(P>0.05).Ele+6-DMAP对PA胚的囊胚率和扩张囊胚率有显著提高(P<0.05),但对NT胚的囊胚率和优质囊胚率没有提高甚至降低了NT胚的发育.Ele+CHX+CB虽然提高了NT胚的囊胚率(P<0.05),但对优质囊胚率没有影响.Ele+CHX+CB激活方法使克隆猪出生率有所提高但不显著.本文还研究了季节对猪孤雌发育和克隆猪出生率的影响.结果表明,春季收集的猪卵母细胞使用3种激活方法卵母细胞的孤雌囊胚率均高于冬季收集的猪卵母细胞的囊胚率.春季和冬季进行移植,克隆猪出生率没有区别.综上,在PA中获得的结果与NT胚中获得的结果不一定完全匹配,说明孤雌激活和重构胚的激活机制还是有区别的.化学联合激活虽然能提高囊胚率,但它的作用相当于降低囊胚形成的门槛,却不是从本质上改变囊胚发育能力,因此不能显著提高克隆猪出生效率.春季收集的卵母细胞在体外培养中的发育能力好于冬季收集的卵母细胞,但季节对克隆猪出生率没有显著影响.
- 马育芳卫恒习李燕李秋艳方锐赵蕊张坤薛恺娄颜坤戴蕴平连林生李宁
- 关键词：孤雌激活化学激活体细胞核移植克隆猪
- 小鼠肌肉生长抑制素基因短发夹RNA促进MyoD在C2C12细胞中的表达(英文)被引量：2
- 2010年
- 肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)属于转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族,主要功能为负向调节骨骼肌的生长.肌肉生长抑制素基因敲除小鼠肌肉出现显著增加,而将干涉该基因的短发夹RNA注射并电击转化入大鼠胫前肌则引起肌肉重量、肌纤维以及MHCⅡ表达的增加.通过与小鼠肌肉生长抑制素基因表达载体共转染HEK293细胞,筛选到两条能够高效抑制小鼠肌肉生长抑制素基因表达的小干涉RNA.构建了这两条小RNA的表达载体Mst-shRNA1和Mst-shRNA2,用其分别转染小鼠C2C12成肌细胞,并通过G418药物筛选和流式细胞仪富集整合了短发夹RNA表达载体的阳性细胞.通过采用Real-time PCR和Western blot分析,检测到在分别整合了Mst-shRNA1和Mst-shRNA2的C2C12细胞中,内源性肌肉生长抑制素基因的mRNA水平分别下降了10.2%和35.5%,蛋白质表达则分别下降了29.3%和64.7%.同时,在这两组中MyoD的表达上升了24.4%和40.4%,证明通过RNA干涉实现的肌肉生长抑制素基因的抑制导致了下游MyoD基因表达的上调.这些结果表明内源性产生的肌肉生长抑制素基因小干涉RNA能够有效抑制该基因的表达.这种以RNA干涉技术为基础促进肌肉生长的方法为遗传育种提供了一种新技术,能够在对家畜经济性状的改良中发挥重要作用.
- 娄颜坤罗娟代蓉李宁
- 关键词：肌肉生长抑制素RNA干涉小干涉RNA短发夹RNAMYOD
