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奶牛β-1,4-半乳糖基转移酶基因在毕赤酵母GS115中的转化表达及发酵优化被引量：1: 2012年; 采用电转化法将已构建好的表达载体pPIC9K-GT转化到毕赤酵母(Pichina pastoris)GS115中。通过对电转化条件进行优化,达到了理想的转化效率,得到了大量转化子,并通过表型筛选及PCR鉴定,筛选到阳性转化子。对重组的P.pastoris GS115-GT进行了诱导表达,用SDS-PAGE法检测到目的蛋白质条带,证明β-1,4-半乳糖基转移酶基因(GT)在P.pastoris GS115中能够表达;用苯酚红法测定了粗酶液的活性,其比酶活为16.40 U/ml。对工程菌的发酵条件进行了初步优化,在最佳工艺下的比酶活达到30.909 U/ml,比优化前提高了88.47%。; 姚晶吴正钧任婧; 关键词：Β-1,4-半乳糖基转移酶电转化发酵条件

唾液酸化路易斯-X合成关键酶基因的克隆表达被引量：1: 2011年; 唾液酸化路易斯-X(sialyl lewis X,Slex)是选择素家族的一个共同糖配体,通过与选择素竞争性地结合炎性细胞,可以抑制炎症反应。通过克隆表达Slex合成过程中的关键酶,在体外进行Slex的生物合成,用于相关乳腺炎防治药物的研发。β-1,4-半乳糖基转移酶(β-1,4-galactosyltransferase,GT)就是参与Slex生物合成过程的关键酶之一。利用相关软件对牛的GT基因进行了生物信息学的分析,了解了GT的相关理化性质。通过人工合成的方法获得了GT基因的CDS,构建了重组质粒pMD18-GT,并亚克隆至表达载体pPIC9K。通过电转化将线性化的表达质粒pPIC9K-GT整合到宿主菌P.pastoris GS115基因组上,构建了重组酵母GS115-GT。经诱导表达后,SDS-PAGE检测到了目的蛋白条带,证明了此基因在P.pastoris GS115中能够可溶性表达;并用苯酚红法测定了粗酶液的活性,其比酶活为16.4 U/ml,这为其进一步研究奠定了基础。; 姚晶任婧吴正钧孙克杰郭本恒; 关键词：乳腺炎生物合成

巴氏毕赤酵母表达系统的研究进展被引量：9: 2012年; 巴氏毕赤酵母表达系统具有优良的特性,是目前广泛应用的微生物表达系统之一,它在理论研究和实践应用上尤其是在大规模发酵中具有重要的意义。本研究综述了巴氏毕赤酵母的生物学和遗传学特性,详细阐述了巴氏毕赤酵母表达系统的组成以及影响外源基因表达的因素,并提出了一些提高表达量的方法。; 姚晶吴正钧任婧; 关键词：巴氏毕赤酵母影响因素

奶牛α-1,3-岩藻糖基转移酶基因的克隆表达: 2014年; 唾液酸化路易斯-X(sialyl lewis x,Slex)是选择素家族的一个共同糖配体,通过与选择素竞争性地结合炎性细胞,可以抑制炎症反应。克隆表达Slex合成过程中的关键酶,就可以在体外进行Slex的生物合成,从而进行相关生物制剂的开发。α-1,3-岩藻糖基转移酶(alpha-(1,3)-fucosyltransferase,FT)就是参与Slex生物合成过程的关键酶之一。利用相关软件对牛的FT基因进行了生物信息学的分析,了解了FT的相关理化性质。通过PCR的方法获得了FT基因,构建了重组质粒pMD19-FT,并亚克隆至表达载体pPIC9K。通过电转化将线性化的表达质粒pPIC9K-FT整合到宿主菌Pichia pastoris GS115基因组上,构建了重组酵母GS115-FT。经诱导表达后,SDS-PAGE检测到了目的蛋白质条带,证明了此基因在P.pastoris GS115中能够可溶性表达。; 姚晶张阳旸吴正钧任婧; 关键词：克隆

胆盐水解酶基因bsh工程菌表达条件的优化被引量：1: 2011年; 对来源于Lactobacillus plantarum ST-Ⅲ菌株的胆盐水解酶基因bsh1在工程菌E.coli BL21/pET28b-bsh1中的表达条件进行了优化。首先通过一系列单因素实验对影响工程菌发酵条件的因素水平进行筛选。然后将诱导培养时间、诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-D-galactoside,IPTG)浓度、胆盐浓度、装液量4个影响因素进行正交试验。在最佳工艺条件下得到的胆盐水解酶BSH比酶活达817.73 U。; 姚晶任婧吴正钧郭本恒; 关键词：胆盐水解酶发酵条件单因素实验正交试验

乳酸菌胞外多糖的生物合成及其遗传调控被引量：4: 2011年; 作为食品级的乳酸菌分泌的胞外多糖,由于其具有很多优良的功能特性,成为了近年来的研究热点。胞外多糖产量偏低限制了其工业化应用,因此从基因水平上探索增加乳酸菌胞外多糖产量的途径是大有裨益的。文中详细阐述了胞外多糖的分类、结构,同型多糖和异性多糖生物合成过程及其差异,以及在合成过程中的遗传调控,并介绍了一些增加产量的有效调控手段,为深入的研究提供理论参考。; 姚晶任婧吴正钧王荫榆郭本恒; 关键词：乳酸菌胞外多糖生物合成

植物乳杆菌ST-Ⅲ胆盐水解酶的表达及其酶活力分析被引量：10: 2012年; 以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ST-Ⅲ4种胆盐水解酶(BSHs)的编码序列(bsh 1～4),将其克隆至表达载体pET-28b(+)上,在原核系统进行表达,并对其酶活力进行测定,结果发现4种BSHs的酶活力分别为29.00、20.49、24.90、21.13U/mL。同时BSH1比其他3种BSHs表现出更高的水解能力。; 任婧姚晶; 关键词：植物乳杆菌胆盐水解酶酶活力

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姚晶