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夏鑫

作品数：1 被引量：0H指数：0
供职机构：三峡大学医学院更多>>
发文基金：湖北省卫生厅科研基金国家自然科学基金湖北省卫生厅青年科技人才基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇诱变
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇基因
  • 1篇核表达

机构

  • 1篇三峡大学

作者

  • 1篇万林燕
  • 1篇张艳琼
  • 1篇夏鑫
  • 1篇吴江锋
  • 1篇彭虎
  • 1篇张巧娟
  • 1篇柳长柏

传媒

  • 1篇解剖学杂志

年份

  • 1篇2013
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
gremlin1基因的诱变及其真核表达载体的构建
2013年
目的：分别构建全长、无信号肽、无核定位系统和既无信号肽也无核定位系统的大鼠gremlin1基因的真核表达载体.方法：采用PCR技术获得全长大鼠gremlin1基因（gremlin1）和无信号肽的gremlin1基因（gremlin1-DS）,以全长gremlin1为模板运用重叠延伸PCR获得无核定位系统的gremlin1基因（gremlin1-DN）,继而在gremlin1-DN的基础上去掉信号肽获得既无信号肽也无核定位系统的gremlin1基因（gremlin1-DS-DN）.分别将4组重组质粒转染到非洲绿猴肾细胞株cos7中,免疫荧光和蛋白免疫印迹检测gremlin1基因的表达.结果：构建的真核表达载体pEF1/Myc-HisC-gremlin1、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN和pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS-DN经PCR与酶切鉴定显示目的片段大小与预期结果一致；经DNA测序显示pEF1/Myc-His C-gremlin1中的gremlin1片段与Gene Bank中的gremlin1序列（NM-019282）完全吻合；pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS中的gremlin1基因缺失信号肽序列；pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN中的gremlin1片段实现了4个定点突变：433-435位的AAG（赖氨酸）、487-489位的CCA（脯氨酸）、490-492位的CCC（脯氨酸）、496-498位的AAG（赖氨酸）均突变为TTC（苯丙氨酸）；pEF1/Myc-His Cgremlin1-DS-DN中的gremlin1基因既缺失信号肽序列又实现了4个定点突变.将它们分别转染到cos7细胞后,免疫荧光和蛋白免疫印迹检测显示,4者均能在细胞内成功表达.结论：成功构建了pEF1/Myc-HisC-gremlin1、pEF1/Myc-HisC-gremlin1-DS、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DN、pEF1/Myc-His C-gremlin1-DS-DN的真核表达载体.
万林燕张巧娟彭虎夏鑫柳长柏吴江锋张艳琼
关键词：诱变真核表达
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