吴龙涛
- 作品数：14 被引量：85H指数：6
- 供职机构：中国科学院海洋研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 花鲈肿瘤坏死因子基因及其在LPS和病毒刺激下表达的研究被引量：4
- 2004年
- 采用同源克隆和锚定PCR技术，从花鲈(Lateolabrax Japonicus)中克隆到肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα，TNFα)cDNA的全序列。花鲈TNFα的cDNA全长990bp，3′非编码区域(UTR)为192bp，5′UTR为72bp，开放阅读框(ORF)为723bp，可编码241个氨基酸，分子量大约为26kDa。同源性分析表明该序列与其他鱼类甚至哺乳动物的TNFα基因具有很高的相似性，并含有TNF家族的签名序列(signature)。同时，利用RT—PCR技术，对不同刺激下该基因在鱼体内的表达情况进行了初步研究，发现TNFα基因在未受刺激鱼体的头肾和脾脏中有明显的表达。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)和虹彩病毒(Iridovirus)都可以诱导TNFα基因高水平的表达，但是在不同组织内的表达存在差异。LPS刺激后表达较强的组织是头肾和睥脏，而病毒感染后TNFα在盱脏中的表达较强。研究结果表明花鲈TNFα基因存在组成型和诱导型两种表达调控机制，在抵御病原感染过程中发挥重要作用。
- 邱丽华宋林生蔡中华吴龙涛胥炜江世贵
- 关键词：TNFΑ基因LPS肿瘤坏死因子鱼体虹彩病毒
- 扇贝免疫相关因子基因的克隆与表达分析
- 贝类养殖是我国传统的海水养殖产业，在海水养殖中占有重要地位，是我国海水养殖和沿海地区经济发展的支柱性产业。但从1994年以来，养殖贝类陆续开始出现大规模死亡现象，死亡率高达80.0%，部分地区甚至绝产，经济损失十分惨重。...
- 吴龙涛
- 关键词：基因克隆基因表达栉孔扇贝海湾扇贝虾夷扇贝
- 文献传递
- 海湾扇贝(Argopecten irradians)金属硫蛋白基因的克隆与分析被引量：19
- 2006年
- 金属硫蛋白是一种普遍存在于生物体内的低分子量、半胱氨酸含量丰富、易于被外界刺激诱导的金属结合蛋白。采用表达序列标签法,结合cDNA末端快速扩增技术,首次获得了海湾扇贝金属硫蛋白(AiMT)的全长cDNA序列。该序列全长787bp,5′UTR(UntranslatedRegion)为79bp,3′UTR为270bp,开放阅读框(OpenReadingFrame,ORF)长度为438bp,可编码145个氨基酸。在其编码的氨基酸序列中半胱氨酸含量丰富,甘氨酸含量也较高,芳香族氨基酸含量低,不含组氨酸,存在有无脊椎动物和软体动物金属硫蛋白的特征序列CKCXXX-CXCX,C-末端的氨基酸序列也符合软体动物金属硫蛋白标签序列C-x-C-x(3)-C-T-G-x(3)-C-x-C-x(3)-C-x-C-K。序列特征分析表明,该序列具备金属硫蛋白的典型特征,是金属硫蛋白家族的成员。
- 刘维青倪多娇宋林生吴龙涛胥炜孔晓瑜
- 关键词：海湾扇贝金属硫蛋白基因ESTCDNA文库
- 海湾扇贝大防御素基因的克隆、表达及其重组产物的抑菌活性分析(摘要)
- 肽是自然界中广泛存在的具有抗菌效应的分子,是机体非特异性免疫的关键因子之一.通过EST分析和锚定PCR技术,从海湾扇贝中克隆得到一种大防御素基因的全长cDNA序列,该基因的cDNA全长563bp,编码123个氨基酸.BL...
- 赵建民宋林生李成华吴龙涛
- 关键词：海湾扇贝抗菌活性抗菌肽
- 栉孔扇贝热休克蛋白70基因cDNA的克隆与分析
- 克蛋白70Heat shock protein 70，HSP70是热休克蛋白超家族中最重要的成员之一，它在机体抗逆，细胞保护以及新生肽链折叠中起着十分重要的作用。本研究应用表达序列标签法，获得了栉孔扇贝HSP70基因cD...
- 吴龙涛宋林生胥炜邱丽华李红蕾苏建国相建海
- 关键词：栉孔扇贝CDNA文库热休克蛋白基因克隆
- 栉孔扇贝脂多糖葡聚糖结合蛋白（LGBP）基因的克隆及其特征分析被引量：2
- 2004年
- 作为模式识别蛋白的脂多糖葡聚糖结合蛋白(Lipopolysaccharide and beta-1，3-glucan binding protein，LGBP)在无脊椎动物的免疫系统中发挥着重要作用。本研究以鳗弧菌作为病原感染栉孔扇贝，构建全个体cDNA的质粒文库，用T3引物对文库进行随机测序得到一个667bp的cDNA片段(编号：c1305ct320cn336)，它与普通蚯蚓的体腔裂解因子前体基因、海胆的β-1，3-葡聚糖酶、非洲疟蚊的革兰氏阴性细菌结合蛋白等有同源性。用T7引物对该克隆测序得到其3’末端。通过SMART-RACE技术克隆得到该克隆的全长cDNA序列。栉孔扇贝LGBP基因由1850个核苷酸组成，它有一个poly A尾巴，编码一条440个氨基酸的多肽。该多肽的分子量估计为47159．076Da，等电点为5．095。推导的氨基酸序列与蓝虾、斑节对虾、海胆、非洲疟蚊、淡水螫虾、普通蚯蚓及普通红蚯蚓等无脊椎动物模式识别蛋白具有高度的同源性。经用Garnier法预测，栉孔扇贝LGBL的二级结构包含螺旋构象10％，折叠片构象17％，转角构象21％，无规则卷曲53％，各种构象所占比例与普通红蚯蚓的体腔裂解因子前体相近。
- 苏建国宋林生胥炜李红蕾吴龙涛蔡中华
- 关键词：栉孔扇贝基因克隆养殖业免疫防御
- 海湾扇贝防御素基因和编码蛋白及其克隆方法
- 本发明涉及防御素，特别是海湾扇贝防御素基因和编码蛋白及其克隆方法，海湾扇贝防御素基因，具有SEQ ID NO.1所示的碱基序列，其编码蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明克隆到的海湾扇贝防御素基因有多聚...
- 宋林生赵建民吴龙涛胥炜相建海
- 文献传递
- 真鲷肿瘤坏死因子（TNFα）基因的体外重组与纯化研究被引量：2
- 2004年
- 将真鲷肿瘤坏死因子(TNFα)基因的成熟肽区域克隆到表达载体pQE30中，并转化到大肠杆菌XL-blue中进行表达。转化子经载体和基因特异性引物进行PCR双向筛选，并将筛选到的阳性克隆经质粒纯化后，进行序列测定。序列测定结果显示，该基因结构正确，且准确插入到表达载体启动子的下游，获得了结构和组成正确的重组子。重、组子经IPTG诱导后，以SDS-PAGE电泳鉴定，电泳结果表明，该基因在大肠杆菌XL-blue中实现了表达。通过对诱导条件的调整，在体外获得了高效表达的重组蛋白，高效表达的重组蛋白约占菌体蛋白的25％-30％。不同诱导时间对重组蛋白影响实验显示，随诱导时间的增加，重组蛋白产量逐渐增高，经4h诱导，其表达量可以达到平台期，过长时间的诱导，对表达产量没有影响。重组蛋白经镍金属亲和层析纯化，获得了纯度较高的重组蛋白。采用交换缓冲液的方法，用Sephadex G150，对重组蛋白进行脱盐复性，使重组蛋白得到了进一步纯化。
- 蔡中华宋林生高春萍吴龙涛邱丽华
- 关键词：真鲷肿瘤坏死因子基因重组体外重组纯化
- 栉孔扇贝热休克蛋白70基因cDNA的克隆与分析被引量：19
- 2003年
- 应用表达序列标签法,获得了栉孔扇贝HSP70基因cDNA的部分序列,然后利用锚定PCR技术克隆到了该基因的全长cDNA。克隆到的HSP70 cDNA全长2553bp,编码区全长1902bp,可以编码634个氨基酸。Blast分析表明该序列与其他生物的HSP70基因具有很高的相似性。在该cDNA序列编码的氨基酸序列中含有3个HSP70家族的特征模体,结合Blast分析的结果,可以确认所获得的cDNA序列是栉孔扇贝HSP70的编码序列。该基因的克隆为进一步深入研究栉孔扇贝的抗逆机理以及指导扇贝的遗传选育和遗传改良都具有重要的理论意义。
- 吴龙涛宋林生胥炜邱丽华李红蕾苏建国相建海
- 关键词：热休克蛋白基因克隆技术病害防治
- 花鲈肿瘤坏死因子基因cDNA的克隆、分析与表达被引量：10
- 2003年
- 采用同源克隆法,结合锚定PCR技术,获得了花鲈(Lateolahraxjaponicus)TNFα基因cDNA的部分序列。BLAST分析表明,该序列与其他鱼类的TNFα基因具有很高的相似性与同源性。同时利用RT PCR技术,对该基因在鱼体内不同组织之间的表达差异进行了分析研究,结果表明,该基因在花鲈免疫器官头肾、脾脏、肝脏中的表达较强,而在脑中的表达较弱,在肌肉中几乎不表达。而且在经特异性病原刺激前、后的组织对比分析中,发现鱼体经LPS(lipopolysaccharide)刺激后,目的基因在免疫器官中的表达明显增强。该基因的克隆与表达为进一步深入研究海水鱼类的抗逆机理以及指导鱼类的遗传选育和遗传改良都具有重要的理论意义。
- 邱丽华宋林生蔡中华吴龙涛江世贵
- 关键词：肿瘤坏死因子同源克隆TNFΑCDNA
