刘志玲 作品数:47 被引量:69 H指数:4 供职机构: 广东出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 广东出入境检验检疫局科技计划项目 广东省农业攻关项目 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 自动化与计算机技术 更多>>
病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备 被引量:4 2018年 利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约10~8 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异<5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×10~8 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。 段燕喻 陈茹 吴晓薇 朱道中 林志雄 田纯见 刘志玲关键词:病毒性神经坏死病 实时定量RT-PCR 标准物质 进口猪产品中莱克多巴胺残留的快速检测 被引量:3 2011年 应用经验证可靠的ELISA方法,对进口猪产品进行莱克多巴胺残留快速筛选检测,对ELISA检测阳性的样品采用色谱质谱联用分析方法进行确证检测。1 330份猪产品的检测结果显示,采用ELISA方法检出阳性率达11.4%(152/1 330);对ELISA阳性样品采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)或气相色谱-质谱方法(GC-MS)确证,阳性率达90.8%(138/152)。检测工作表明,综合运用快速筛选检验技术与确证检测技术可实现快速准确检测动物产品中莱克多巴胺残留,提高进出境检验工作效率。 陈茹 洪振涛 吴晓薇 王志元 曾碧健 刘志玲 林志雄关键词:莱克多巴胺 猪产品 ELISA 高效液相色谱-串联质谱 气相色谱-质谱 非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光LAMP检测方法的建立 被引量:14 2017年 为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)通用型高通量检测技术,利用高度保守的非结构DNA聚合酶G1211R基因,制备质粒标准品,建立实时荧光LAMP方法,出现典型的S形核酸扩增曲线,扩增产物具有特异的熔解曲线。G1211R基因质粒标准品在1.81×10~5拷贝数/μL^1.81×10~9拷贝数/μL对数值与Ct值之间的线性关系良好。以ASFV E70株病毒核酸为模板,LAMP检测灵敏度达到21pg,优于荧光定量PCR方法。重复性试验LAMP检测批内和批间变异系数均小于5%。LAMP方法检测ASFV特异性良好,与猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及昆虫核酸无交叉反应。以ASFV Arm 07株制备各种临床模拟样品,检出阳性率达到17.31%。检测方法的建立,可为非洲猪瘟防控提供新的技术手段,有利于不同基因型毒株检测和出入境快速筛查。 田纯见 杨舒展 段喻燕 刘志玲 林志雄 罗琼 陈茹关键词:非洲猪瘟病毒 DNA聚合酶 同步检测三种猪病毒的共有引物核酸扩增方法与试剂盒 本发明提供一种通过锁核酸(LNA)修饰碱基共有引物引导的同步快速检测猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒三种重要猪病原的新型核酸扩增检测方法及其检测试剂盒,设计筛选了一对含有LNA修饰碱基的共有引物和三对5'端带有... 陈茹 高小博 宋长绪 薛春宜 于晓璐 段燕喻 李艳 刘志玲 陈芳文献传递 高致病性蓝耳病病毒广东分离株ORF5基因的序列分析 从广东各发病猪场病料中分离到7株高致病性PRRSV,分别命名为GDB1~GDB7。设计一对ORF5基因的特异性引物,应用RT-PCR方法从各PRRSV病毒株中扩增出ORF5基因片段,将其分别克隆到pMD19-T载体上,通... 刘志玲 马静云 谢青梅 张冠群 陈峰 曹永长 毕英佐关键词:PRRSV ORF5 克隆 文献传递 广东省供港澳注册养殖猪场猪流感流行病学调查 2013年 为了解广东省辖区内84个活猪供港澳注册猪场中猪流感的感染情况,从2009年5月至2012年8月,收集各注册猪场的猪鼻拭子12 927份样品,采用荧光定量RT-PCR的方法进行A型流感病毒筛查,同时对A型流感样品采用H1和H3亚型流感病毒荧光定量RT-PCR的方法进行分型。结果 A型流感病毒核酸阳性样品396份,阳性率3.06%。其中H1亚型流感病毒核酸阳性样品142份,阳性率1.1%;H3亚型流感病毒核酸阳性样品12份,阳性率0.17%;H1N1亚型流感病毒核酸阳性样品有23份,阳性率0.32%。 吴晓薇 陈茹 刘志玲 朱道中 朱事康 段燕喻 林志雄关键词:猪流感 H3亚型 引起CVM相关的SNP的检测引物组、检测试剂盒和检测方法 本发明公开了引起CVM相关的SNP的检测引物组、检测试剂盒和检测方法。本发明的检测引物组包括包括检测引物和探针:所述的检测引物:CVM SLC35A3-FWD:AGCTGG CTCACAATTTGTAGGT;CVM SL... 吴晓薇 朱道中 马保华 刘中勇 刘志玲 佟铁铸文献传递 高致病性蓝耳病病毒广东分离株ORF5基因的序列分析 从广东各发病猪场病料中分离到7株高致病性PRRSV,分别命名为GDB1~GDB7。设计一对ORF5基因的特异性引物,应用RT-PCR方法从各PRRSV病毒株中扩增出ORF5基因片段,将其分别克隆到pMD19-T载体上,通... 刘志玲 马静云 谢青梅 张冠群 陈峰 曹永长 毕英佐关键词:蓝耳病病毒 ORF5基因 氨基酸序列 猪疾病 五种主要牛隐性遗传缺陷病及布氏杆菌病检疫技术和标准研究 吴晓薇 刘中勇 贾广乐 朱道中 郭霄峰 马保华 韩雪清 鱼海琼 刘志玲 王慧煜 林志雄 林祥梅 代元元 王振男 周莉 牛隐性遗传缺陷病可降低产犊率,出现死胎、弱胎,影响生活力和外观,降低牛的经济价值,给畜牧业带来巨大损失。布鲁氏菌病被世界卫生组织列为B类传染病,中国将其列为乙类传染病,是《中国进出境动物检疫规范》中规定的必检疾病。该项目...关键词:关键词:布氏杆菌病 重大动物疫病快速检测方法的建立与应用 朱道中 薛春宜 马保华 陈红英 吴晓薇 刘志玲 刘中勇 陈茹 罗满林 曹永长 冀君 曾小娜 李强 罗鸿斌 该研究所属科学技术领域:230家畜禽、兽医科学技术。环介导核酸等温扩增方法(LAMP)具有操作简单、扩增快速、检测灵敏度高、特异强、检测费用低廉、不需要特殊仪器设备等优点。该项目在中国建立检测重大动物疫病如NDV、IBD...关键词:关键词:重大动物疫病 病毒检测