冯百芳
- 作品数：47 被引量：169H指数：8
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：美国中华医学基金国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 原位反转录PCR检测慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV被引量：2
- 1998年
- 目的研究慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒的定位分布及复制。方法直接原位反转录－ＰＣＲ（标记引物）对２０例慢性丙型肝炎患者的ＰＢＭＣ内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的分布、定位及存在形式进行研究。结果１６例患者外周血单个核细胞的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ阳性信号，并有一例患者的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ负链信号。结论ＨＣＶ可感染ＰＢＭＣ并在其中复制。原位ＲＴ－ＰＣＲ为进一步研究ＨＣＶ进入人体内的分布、潜伏、复制状况以及丙型肝炎治疗、药物研究奠定了基础。
- 蔡美顺冯百芳刘玉兰
- 关键词：丙型肝炎病毒PCR外周血
- EBV转化B淋巴细胞中丙型肝炎病毒抗原表达的免疫组化研究被引量：2
- 2001年
- 观察丙型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC)体外转化培养后其中是否仍有丙型肝炎病毒 (HCV)存在。用EB病毒感染患者HCV阳性PBMC并使其转化 ,获得永生化B细胞 (EBVTB)。而后 ,用套式RT -PCR检测培养细胞和上清中的HCVRNA ,用免疫组化SP法观察HCV抗原在细胞中的表达。HCV在传代细胞中持续存在 ,而培养细胞中的HCVRNA负链和培养上清中的HCV间断阳性。免疫组化发现HCVNS3、NS5和C抗原分布于胞浆、细胞膜和核膜周围也可见阳性着色 ,细胞核阴性。HCV可以在体外EB病毒转化B细胞系中较长时间存在和复制。
- 程计林耿直仝文斌范涛高建恩马文彬冯百芳
- 关键词：B淋巴细胞EBV抗原
- 不同区引物检测庚型肝炎病毒RNA被引量：1
- 1999年
- 仝文斌高巍邵杰费然冯百芳陶其敏
- 关键词：庚型肝炎病毒RNAHGV-RNA引物
- EBV体外转化丙型肝炎病人PBMC中HCV持续存在的研究
- 1998年
- 丙型肝炎病毒(hepatitis c virus,HCV)感染的一个主要特征是病程慢性化并迁延发展。近年越来越多的研究显示,HCV感染单个核细胞在疾病发展过程中起着不容忽视的作用,与干扰素治疗后丙型肝炎的复发关系密切。HCV不仅具有亲肝细胞性,也有淋巴细胞嗜性。
- 程计林刘宝玲仝文斌高巍费然冯百芳陶其敏
- 关键词：PBMCHCV
- HCVE＿2／NS＿1基因的PCR检测克隆与序列分析被引量：1
- 1994年
- 本文报道了利用ＰＣＲ技术检测了３４例丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因的ｃＤＮＡ并与５’非编码区基因的ｃＤＮＡ检测技术进行了比较，应用ｐＵＣ１８质粒对此扩增片段进行了克隆与序列分析，结果表明克隆片段ＨＣＶ－Ｓ１为我国主要流行的ＨＣＶ基围亚型－ＩＩ型，其与ＨＣＶ－ＩＩ型的核苷酸与氨基酸的同源性均在９０％以上，序列分析表明该片段富含脯氨酸和胱氨酸，可能具有复杂的空间构型，且与４个糖基化位点一样保持稳定，另外，在ＨＣＶ－Ｓ１片段的３’端有一３６个核苷酸的区域。
- 郭建平陶其敏冯百芳
- 关键词：丙型肝炎病毒丙型肝炎基因克隆
- 抗-HBs基因水平的研究被引量：1
- 1997年
- 本研究应用ＲＴ－ＰＣＲ、ＤＮＡ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等分子生物学技术检测不同人群中针对一株抗－ＨＢｓ优势克隆的基因水平。发现慢性乙肝（ＨＢｓＡｇ阳性）患者中检出率为２０．６９％（６／２９），明显低于乙肝疫苗注射后人群的６２．９６％（１７／２７），Ｐ＜０．０１；而与未接种过乙肝疫苗组的检出率相比则无明显差异（Ｐ＞０．０５），后者阳性率为２１．４２％。这一结果提示：慢性乙肝患者与乙肝疫苗注射后相比，在抗－ＨＢｓ基因水平上存在差异，可能有抗－ＨＢｓ克隆的缺失或转录、ｍＲＮＡ翻译合成抗－ＨＢｓ的异常。本工作中对人群中抗－ＨＢｓ基因研究的尝试，为乙肝免疫耐受的研究提供了新的线索，同时也为乙肝的基因治疗提供了一定依据。
- 张春英仝文斌冯百芳王琰陶其敏
- 关键词：免疫耐受聚合酶链反应
- EB病毒转化人外周血单个核细胞作为HCV复制模型的初步研究
- 1999年
- 目的 复制丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 感染的细胞模型。方法 用ＥＢ病毒感染其ＨＣＶ 阳性患者的外周血单个核细胞并使其转化，获得ＨＣＶ的外周永生化Ｂ细胞株。以后，每隔１ 个月应用套式逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 检测１ 次培养细胞和上清中的ＨＣＶＲＮＡ。结果 ＨＣＶ可以在传代细胞中持续存在１ 年，培养细胞中的ＨＣＶ负链和培养上清中的ＨＣＶ 则呈间断阳性。结论 ＨＣＶ 可以在该细胞株中较长时间存在。
- 程计林仝文斌高巍冯百芳程巨才
- 关键词：丙型肝炎病毒单个核细胞EB病毒
- 急性病毒性肝炎患者中庚型肝炎病毒RNA检测研究被引量：3
- 1998年
- 为观察庚型肝炎病毒在急性病毒性肝炎中感染情况,对239例急性肝炎患者的血清,采用两步法筛选进行HGV RNA的检测,并经HGV RNA确证试验,结果显示:HGV RNA阳性者9例,其中合并乙肝1例,合并丙肝3例,合并戊肝1例,非甲-戊型肝炎中占4例。提示:①HGV与其它型肝炎病毒重叠感染较多。②6例患者无输血史,而HGV RNA仍为阳性,提示HGV的输血外传播。③NA-E急性肝炎患者中,HGV的阳性率为23.5％,证实HGV为其病原之一,同时提示还可能存在其它的致病因子。
- 孙焱杜绍财常锦红王豪冯百芳陶其敏
- 关键词：庚型肝炎病毒非甲-戊型肝炎
- 全文增补中
- 酶免疫法检测丙型肝炎病毒RNA的聚合酶链反应产物被引量：17
- 1998年
- 目的建立一灵敏、快速的检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ逆转录－套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物的酶免疫法。方法对第２次ＰＣＲ所用的引物进行双标记，使扩增产物同时被修饰有生物素和荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）成分，再经过固相的链亲合素进行捕获、辣根过氧化物酶标记的抗－ｆｌｕｏｒｅｓ－ｃｅｉｎ反应后显色测定。结果所建立的方法与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比灵敏、快速、准确，结果判断客观，重复性也较好；所测结果可反映ＰＣＲ产物量的多少，但不能准确表示模板量的大小。结论建立的方法可取代电泳法而成为ＨＣＶＲＮＡ常规ＰＣＲ反应产物的检测技术。
- 仝文斌张春英费然季颖冯百芳陶其敏
- 关键词：丙型肝炎病毒RNA酶免疫法聚合酶链反应
- 丙型肝炎病毒Ⅱ型阳性PBMC永生化细胞株的生物学特性
- 2001年
- 目的 观察丙型肝炎病人外周血B细胞长期存活状态下其中是否仍有丙型肝炎病毒(HCV)存在 ,探讨建立HCV体外复制细胞模型的可能性。方法 利用EB病毒转化B淋巴细胞技术 ,建立丙型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC )HCV阳性传代细胞株 (LCL) ,并应用细胞培养、染色体显示、流式细胞荧光染色、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫组化、原位RT PCR及电镜等技术研究其分子生物学和免疫学特性。结果 (1)LCL细胞核型 47,XX ,+mar,细胞表面CD19、CD2 0抗原阳性 ,CD2 1分子消失。 (2 )传代培养细胞中HCVRNA正链持续 12个月阳性 ,而培养上清中则呈间断性阳性 ,无明显规律。HCVRNA负链在LCL细胞中也呈间断阳性。HCV基因分型为Ⅱ型株。 (3)免疫组化、原位PCR和电镜发现HCV抗原蛋白、HCVRNA和病毒颗粒均存在于LCL细胞浆中 ;电镜发现HCV病毒颗粒呈圆球型 ,双层膜结构 ,定位于细胞胞质空泡内。直径多为 45～ 70nm ,个别为 110nm。结论 HCV可以在EB病毒转化病人B细胞株中长期存活、复制和分泌。
- 程计林仝文斌冯百芳陶其敏朱伟刘宝玲陈良标陈佩兰
- 关键词：丙型肝炎病毒丙型肝炎外周血单个核细胞B细胞生物学特性
