丁志鑫
- 作品数：10 被引量：32H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌差异区基因功能研究及其应用进展
- 2011年
- 结核病（tuberculosis，TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的一种慢性传染性疾病。目前，全世界大约有1／3的人感染结核分枝杆菌，每年约有900万的新增病例和约200万的死亡病例。通过基因组比对发现，结核分枝杆菌基因组中的一些片段在牛分枝杆菌或卡介苗（Bacillus Calmette Guerin，BCG）基因组中缺失，
- 丁志鑫车南颖张旭霞崔喜艳李传友
- 关键词：结核分枝杆菌基因功能TUBERCULOSIS慢性传染性疾病死亡病例牛分枝杆菌
- 结核分枝杆菌特异基因MPT64-Rv1985c融合蛋白的免疫诊断价值研究被引量：2
- 2012年
- 目的表达和纯化结核分枝杆菌特异蛋白MPT64，Rv1985c及其融合蛋白MPT64-Rv1985c，并探讨三种抗原在结核病免疫诊断中的价值。方法通过PCR获得基因MPT64，Rv1985c及其融合基因，并克隆到pET32a（＋）表达载体，转化E．coli．BL21（DE3），经IPTG诱导表达后用镍柱进行纯化，再用SDS-PAGE及Western blot方法检测并鉴定目的产物。采用ELISA方法检测在血清（肺结核患者31例、肺外结核患者45例、健康人135例）及胸腔积液样本（结核性胸膜炎患者91例、肺癌性胸膜炎患者91例）中三种抗原的结核病诊断效率。结果三种目的蛋白均以包涵体形式表达。经过纯化及复性获得纯度较高的可溶性蛋白。血清及胸腔积液样品中特异性IgG抗体检测结果显示，融合蛋白MPT64-Rv1985c在诊断肺结核、肺外结核敏感性为87．1％和88．9％，诊断结核病的特异性为75．6％；诊断结核性胸膜炎敏感性为91．2％，特异性为84．6％，敏感性较单一抗原MPT64及Rv1985c有显著提高。结论融合蛋白MPT64-Rv1985c诊断效果显著高于单一抗原，在结核病诊断研究中具有重要的研究价值。
- 车南颖丁志鑫王伟张旭霞李传友
- 关键词：融合蛋白特异抗原
- 中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性与结核病易感性的相关性研究
- 2011年
- 目的筛选中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性位点，并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点，再用连接酶特异检测技术在大样本中进行SNP分型，并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性。结果共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点。G394A位点在结核病人中的突变频率高于健康人，该位点等位基因频率在两组人群中差异具有统计学意义（P〉0．05）。G164A位点跟结核病病情有关，复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义（P〈0．05），同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低。结论TIRAP基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素。
- 李松丁志鑫车南颖张旭霞程君张林波时广利张杰王雪玉李传友
- 关键词：结核病易感性单核苷酸多态性
- 结核分枝杆菌特异基因MPT64-Rv1985c融合蛋白的免疫诊断价值研究被引量：3
- 2012年
- 目的表达和纯化结核分枝杆菌特异蛋白MPT64、Rv1985c及其融合蛋白MPT64-Rv1985c,探讨3种抗原在结核病免疫诊断中的价值。方法通过PCR获得基因MPT64、Rv1985c及其融合基因,并克隆到pET32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍柱进行纯化,再用SDS-PAGE及Western blot方法检测并鉴定目的产物。采用ELISA方法检测3种抗原在血清及胸腔积液样本中的结核病诊断效率。结果 3种目的蛋白均以包涵体形式表达。经过纯化及复性获得纯度较高的可溶性蛋白。血清及胸腔积液样本中特异性IgG抗体检测结果显示,融合蛋白MPT64-Rv1985c在诊断肺结核、肺外结核的敏感性为87.1%和88.9%,特异性为75.6%;诊断结核性胸膜炎的敏感性为91.2%,特异性为84.6%,敏感性较单一抗原MPT64及Rv1985c有显著提高(P﹤0.05)。结论融合蛋白MPT64-Rv1985c诊断效果显著高于单一抗原,在结核病诊断中具有重要的研究价值。
- 车南颖丁志鑫王伟张旭霞李传友
- 关键词：结核分枝杆菌融合蛋白特异抗原
- 大豆rbcL基因克隆、序列分析及原核表达被引量：11
- 2011年
- 利用叶绿体基因组保守性的特征,根据菜豆、豌豆、烟草的rbcL基因序列设计引物,从大豆叶绿体DNA中克隆rbcL基因,全长序列为1 488bp,包括1 449bp的开放阅读框,编码482个氨基酸。相似性比较显示,此序列与其它10个物种rbcL基因核苷酸的同源性为85.37%～95.31%,氨基酸的同源性为90.87%～96.47%。将该基因与表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,阳性菌液IPTG诱导后经10%SDS-PAGE分析,结果显示,诱导表达出分子量约为60kD的特异融合蛋白。
- 刘晓庆崔喜艳丁志鑫李海燕
- 关键词：大豆RBCL基因基因克隆原核表达
- 2种PCR方法扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列比较被引量：6
- 2011年
- 比较了扩增已知序列5′侧翼序列的2种PCR方法。方法一是反向PCR(IPCR),以大豆基因组酶切后的DNA片段自身环化产物做模板,用2对特异引物反向扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列。方法二是热不对称交错PCR(TAIL-PCR),以大豆基因组DNA为模板,用3个巢式特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环。IPCR和TAIL-PCR 2种试验方法分别扩增获得438 bp和867 bp特异产物。经测序发现:2片段两侧均含有设计的引物,其部分序列均与已知序列相一致,两者也有部分序列完全相同,但TAIL-PCR技术简单,重复性好,能够在短时间内获得目标片段,TAIL-PCR技术在克隆侧翼序列时优于IPCR。
- 刘晓庆丁志鑫刘晶崔喜艳
- 关键词：反向PCR大豆
- 结核分枝杆菌差异区基因功能研究及其应用进展被引量：5
- 2012年
- 结核病（tuberculosis,TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacte-rium tuberculosis,MTB）引起的一种慢性传染性疾病。目前,全世界大约有1/3的人感染,每年约有900万的新增病例和约200万的死亡病例[1]。通过基因组比对发现,结核分枝杆菌基因组中的一些片段在牛分枝杆菌或卡介苗（BacillusCalmette Guerin,BCG）基因组中缺失,
- 丁志鑫车南颖张旭霞崔喜艳李传友
- 关键词：结核分枝杆菌基因功能TUBERCULOSIS慢性传染性疾病死亡病例牛分枝杆菌
- 玉米MAPK5基因片段的克隆及RNA干扰载体的构建被引量：3
- 2012年
- 采用RT-PCR方法从玉米品种B73幼苗中克隆出促分裂原活化蛋白激酶基因5(MAPK5)的cDNA部分片段(691 bp),与GenBank已发表的玉米MAPK5(AB016802)同源性达97%。重新设计带酶切位点的引物,克隆出长度为281 bp的正、反向片段。使用DNA重组技术,用pCAMBIA3300质粒构建了玉米MAPK5的RNAi载体。
- 崔喜艳刘晶丁志鑫郝东云
- 关键词：促分裂原活化蛋白激酶基因克隆
- 中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性与结核病易感性的相关性研究被引量：1
- 2011年
- 目的筛选中国汉族人群Toll／白细胞介素1受体结构域衔接蛋白（TIRAP）基因编码区多态性位点，并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点，再用连接酶特异检测技术在大样本中进行单核苷酸多态性（SNP）分型，并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性。结果共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点。G394A位点在结核病病人中的突变频率高于健康人，但是该位点等位基因频率在两组人群中的差异没有统计学意义（P〉0．05）。G164A位点跟结核病病情有关，复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义（P〈0．05），同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低。结论TIRAP基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素。
- 李松车南颖丁志鑫张旭霞程君张林波时广利张洁王雪玉李传友
- 关键词：结核病易感性单核苷酸多态性
- 结核分枝杆菌MPT64-Rv1985c融合蛋白的诊断作用及其重组卡介苗构建的研究
- 目的：构建pET32a(+)-MPT64-Rv1985c重组蛋白表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达,通过血清和胸腔积液样本研究目的蛋白诊断特性；构建PUV15-MPT64-Rv1985c穿梭载体,并电转入...
- 丁志鑫
- 关键词：结核分枝杆菌重组卡介苗抗原
- 文献传递
