高岭
- 作品数：8 被引量：40H指数：6
- 供职机构：宁夏医学院公共卫生学院中心实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
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- 细粒棘球蚴重组延伸因子-1抗原的免疫原性研究被引量：2
- 2006年
- 目的对细粒棘球蚴重组抗原EF-1的免疫原性进行初步鉴定,为重组疫苗研制的后续工作提供依据。方法用重组目的蛋白及融合表达蛋白作为抗原,分别免疫昆明小鼠获得抗血清,通过蛋白免疫印迹试验 (Western blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中产生的特异性抗体成分及其程度。结果重组目的蛋白EF-1和融合蛋白GST／EF-1免疫小鼠后均诱发产生了特异性抗体,实验组血清与对照组血清抗体含量差异有统计学意义(P<0．05);目的蛋白和融合蛋白免疫两组小鼠所得血清的抗体含量差异没有统计学意义。结论目的蛋白EF-1和融合蛋白GST／EF-1都具有一定的免疫原性。
- 王健王娅娜丁淑琴张焱王洁王淑静高岭赵巍
- 关键词：免疫原性免疫印记酶联免疫吸附试验
- 细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因的克隆和序列分析被引量：7
- 2007年
- 目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)诊断抗原(diagnostic antigen)P-29基因并进行序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据GenBank公共数据库检索出细粒棘球蚴诊断抗原P-29基因的已知序列设计一对引物,通过RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因,将其重组到pGEM-T载体后进行序列测定和分析。结果成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因,测序表明该片段由717bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为100%。结论成功克隆细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因序列,可做为包虫病重组抗原的候选基因。
- 师志云王娅娜马锐于晶晶于辛酉高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴克隆
- 细粒棘球蚴中国大陆株亲肌肉基因分子克隆和序列分析被引量：8
- 2006年
- 目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)亲肌肉基因(myophilin)序列并进行序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据GeneBank公共数据库检索出细粒棘球蚴亲肌肉基因的已知序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆株亲肌肉基因,将其克隆到pGEM-T载体,进行序列测定和分析。结果成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株亲肌肉基因,测序表明该基因为573bp;该基因序列与检索基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为100%。结论测序的亲肌肉基因序列有完整的编码框,可做为包虫病重组抗原的候选基因。
- 张静赵嘉庆王娅娜张焱王淑静王洁高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴克隆
- 细粒棘球蚴中国大陆株亲肌肉抗原重组蛋白的表达、纯化及免疫学鉴定被引量：9
- 2008年
- 目的对细粒棘球蚴中国大陆株亲肌肉基因(myophilin)的重组质粒进行原核表达、纯化,并初步鉴定重组蛋白的免疫学特性,为重组疫苗研制的后续工作提供依据。方法对已构建的基因工程菌株myophilin/pGEM-T/JM109进行酶切,获取目的基因。将目的基因亚克隆于表达载体pET28a构建基因工程菌株,筛选阳性表达菌株并进行诱导表达、经SDS-PAGE鉴定重组myophilin蛋白。以纯化的myophilin做抗原免疫小鼠,用Western blot、ELISA对该蛋白的免疫原性及免疫鼠血清抗体水平进行检测。结果成功构建含原核重组表达载体myophilin/PET28a/BL21,并纯化出浓度较高的重组蛋白;ELISA检测显示,用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠,诱导产生了一定水平的血清抗体;实验组血清与对照组血清抗体含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论纯化后的重组蛋白myophilin具有较强的免疫原性,有望作为包虫病候选疫苗进一步研究。
- 马锐师志云于晶晶王淑静王洁张焱高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴基因克隆纯化
- 细粒棘球蚴谷胱甘肽s-转移酶重组抗原的高效融合表达、纯化及免疫特性的研究被引量：8
- 2007年
- 目的构建细粒棘球蚴重组蛋白谷胱甘肽s-转移酶(EgGST)的表达载体,获得纯化的重组蛋白,并对其免疫学特性进行初步鉴定,为重组疫苗研制的后续工作提供依据。方法从本室已构建的重组质粒GST/pGEM-T中酶切下GST目的片段,亚克隆入表达载体pET28a,转化入大肠杆菌BL21plys进行融合表达,经His-bind树脂纯化系统小量纯化,得到纯化的重组融合蛋白作为抗原。免疫ICR小鼠,获得抗血清。通过蛋白免疫印迹试验(Western blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建具有高效表达能力的基因工程菌株,并纯化了重组蛋白,纯化的重组抗原免疫小鼠的抗血清可识别天然与重组抗原,实验组血清与对照组血清抗体含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组蛋白具有良好的抗原性和免疫原性。
- 李宗吉黄瑾张静张焱王洁王淑静高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴谷胱甘肽S-转移酶免疫印记酶联免疫吸附试验
- 细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及免疫特性分析被引量：10
- 2006年
- 目的对细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(Eg mMDH)重组质粒进行原核表达、纯化,并初步鉴定重组蛋白的免疫学特性。方法对已构建的基因工程菌株mMDH/pGEM-T/JM109进行酶切,获取目的基因。将目的基因重组到pET28a表达载体上,筛选阳性表达菌株并进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定重组mMDH蛋白质为包涵体后,超声破碎细胞,尿素溶解包涵体,镍柱亲和层析法纯化,获取重组蛋白。以纯化的mMDH作抗原免疫小鼠,用Western blot和ELISA方法检测重组蛋白的免疫原性及免疫鼠血清抗体水平。结果成功构建原核重组表达载体mMDH/pET28a/BL21,并纯化出浓度较高的重组蛋白。ELISA结果显示,重组抗原免疫小鼠诱导产生了一定水平的血清抗体;Western blot显示,原头蚴、囊液等天然抗原能被重组抗原免疫的小鼠血清识别。结论纯化后的重组蛋白mMDH具有较强的免疫原性,有望作为包虫病候选疫苗,值得进一步深入研究。
- 张静王洁王淑静张焱高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴蛋白纯化
- 细粒棘球蚴重组14-3-3基因的表达、纯化及免疫学鉴定被引量：10
- 2006年
- 目的构建细粒棘球蚴14-3-3基因的重组质粒并原核表达、纯化该重组蛋白,对其免疫学特性进行初步鉴定。方法从重组质粒pGEM-T/Eg14-3-3中获取14-3-3基因,亚克隆于表达载体pET28a构建基因工程菌株,并表达、纯化重组蛋白,经Western blot、ELISA对该蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果成功构建含目的片段14-3-3的基因工程菌株;ELISA检测显示,用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠,诱导产生了特异性抗体,Western blot鉴定该抗体能识别重组抗原及原头蚴、囊液、囊壁抗原。结论构建的pET28a/Eg 14-3-3菌株能高效表达14-3-3蛋白,初步鉴定该重组蛋白具有较好的抗原性和免疫原性。
- 黄瑾李宗吉张静王淑静王洁张焱高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴基因克隆纯化
- 重组质粒Eg.EF-1/pGEX-6P-1的构建及原核诱导表达被引量：3
- 2006年
- 将细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg.)延伸因子(Elongation factor 1,EF-1)与pGEX-6P-1构建成重组质粒并进行表达、纯化及对其特性进行鉴定。将构建好的EF-1/pGEM-T经双酶切后获取目的基因片段,定向重组于表达载体pGEX-6P-1并转化大肠杆菌(Escherichia coli)E.coliBL21,IPTG诱导表达,用蛋白亲和层析柱GSTrap FF对表达产物进行纯化,特异性蛋白解离酶PreScissionTMProtease酶切融合蛋白从中获取重组Eg.EF-1;SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物。获得的Eg.EF-1/pGEX-6P-1/E.coliBL21菌株,诱导表达融合蛋白和纯化分离得到的31 ku Eg.EF-1均能被细粒棘球蚴天然抗原免疫的兔多克隆抗血清识别。证明成功构建出具有有效表达的Eg.EF-1/pGEX-6P-1菌株,初步证实重组蛋白具有较好的抗原性。
- 王健赵嘉庆王娅娜丁淑琴张焱王洁王淑静高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴重组抗原
