马世良
- 作品数：18 被引量：58H指数：5
- 供职机构：沈阳农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 核磷蛋白NPM1的RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
- 2014年
- 目的:构建高效抑制核磷蛋白NPM1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰载体。方法:以人NPM1基因为靶序列,设计并合成shRNA序列,将其连入RNA干扰慢病毒载体pll3.7;酶切鉴定插入shRNA序列片段的质粒,经测序正确后转染293T细胞;Western印迹检测得到抑制效果好的载体pll-shRNA,将其与慢病毒载体共转染293T细胞,进行病毒的包装,将得到的病毒感染HT1080细胞,通过RT-PCR、Western印迹等方法验证其抑制效果。结果:酶切证实构建的载体pll-shRNA中已插入外源基因片段,转染293T细胞后都有抑制效果,其中pll-shRNA2的抑制效果最好;用pll-shRNA2病毒感染HT1080细胞,RT-PCR和Western印迹检测分别在RNA和蛋白质水平证实NPM1的表达显著降低。结论:构建的RNA干扰载体pll-shRNA2能有效抑制NPM1的表达,为NPM1功能的研究提供了有力工具。
- 王亚楠金蕊张宪马世良黄君健
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
- 139份小麦品种(系)抗秆锈性测定及其Ug99抗病基因分子检测被引量：5
- 2014年
- 【目的】云南省在中国小麦秆锈病的大区传播与病害流行中起着关键作用,一旦Ug99及其变异体入侵中国,极大可能会首先在本地区定植、增殖、向其他麦区传播,引起全国小麦秆锈病新的流行。因此,论文旨在分析云南省主要生产后备品种及CIMMYT抗Ug99的材料对中国小麦秆锈菌小种的抗性及含有Ug99抗病基因情况,为抗病品种布局提供指导。【方法】于2013年10月至2014年3月在沈阳农业大学植物植保学院玻璃温室中,将119份云南省小麦品种(系)、20份经国外穿梭鉴定抗Ug99的材料及感病对照小密穗分别在直径为10 cm泥盆中播种,小麦一叶一心时,用中国小麦秆锈菌流行小种21C3HTTTM、34MRGQM和1个经有性过程的新小种34C3RTGQM进行喷粉接种、保湿箱保湿并在15—26℃(夜/昼)的温室环境里孵育。约两周后,当感病品种小密穗充分发病时,按照0—4级标准调查记载侵染型:(0-2+级记为抗病、3--4记为感病),对供试小麦品种(系)的抗秆锈性进行评价。同时,分别剪取各个未接种的供试材料幼叶组织进行基因组DNA提取、利用文献报道的4个抗Ug99基因的分子标记(Sr22、Sr25、Sr26和Sr28)进行PCR扩增、2.0%的琼脂糖凝胶电泳及聚丙烯酰胺电泳对目标抗病基因进行分子检测。【结果】在119份云南省小麦材料中,有42份材料对参试小麦秆锈菌小种表现出差异性抗性(占35.3%),其中表现免疫-近免疫的有6份(5%),表现高抗-中抗的有36份(30.3%)。剩余77份材料均表现感病,其中高度感病的有42份(占35.2%),中度感病的有35份(占29.4%),而20份抗Ug99的种质中对全部参试小种表现中度和高度感病的材料也各有2份(均占10%)。对全部139份小麦材料用4个抗病基因进行分子标记检测表明,有2份CIMMYT的材料被检出含Sr25、1份材料含有Sr26、1份材料含有Sr28。有12份云南省小麦品种(系)被检出含有Sr28,但没有检测出含有另3个抗性基因�
- 吴限鑫李天亚陈思王冠钦曹远银马世良李明菊
- 关键词：小麦秆锈病品种抗性UG99基因分子检测
- MDM2与端粒保护蛋白1的相互作用及其功能
- 2014年
- 目的:探究鼠双微体2同源体(MDM2)与端粒保护蛋白1(POT1)在细胞水平是否有相互作用,及其是否发挥E3泛素化连接酶的功能。方法:首先,用蛋白酶体抑制剂MG132处理稳定表达Flag-POT1的HeLa细胞,Western印迹检测Flag-POT1的表达情况;其次,在HeLa细胞中转入外源的Myc-MDM2和Flag-POT1质粒,48 h后收集细胞,通过免疫共沉淀方法验证Myc-MDM2和Flag-POT1是否具有相互作用;再次,在稳定表达Flag-POT1的HeLa细胞中转入Myc-MDM2或MDM2 siRNA,48 h后收集细胞,Western印迹检测Flag-POT1的表达水平。结果:MG132处理后,Flag-POT1的表达量明显升高且有拖尾现象,免疫共沉淀显示Myc-MDM2和Flag-POT1具有相互作用,但无论转入Myc-MDM2还是MDM2 siRNA,Flag-POT1的表达水平没有明显变化。结论:POT1通过泛素化途径降解,MDM2与POT1具有相互作用,但MDM2不是POT1主要的E3泛素化连接酶。
- 王亚楠金蕊马世良黄君健
- 关键词：HELA细胞免疫共沉淀
- DNA甲基化敏感位点(CCGG)文库克隆载体的构建
- 2014年
- 目的:旨在建立一种简便易行的DNA甲基化文库构建载体,用于筛选细胞中具有甲基化敏感性CCGG位点的DNA片段。方法:根据HpaⅡ/MspⅠ酶切体系对甲基化酶敏感性不同的特点,通过在PCR引物中添加CCGG酶切位点的方法,将扩增得到的目的片段连接到无CpG甲基化的质粒载体上。结果:成功构建了含双CCGG位点的pCpGfree-HpaⅡ/MspⅠ-1质粒载体。结论:所构建的pCpGfree-HpaⅡ/MspⅠ-1质粒载体CCGG位点未发生甲基化,故可以用于构建含有甲基化CCGG序列的DNA甲基化文库。
- 满红涛郑可欣徐艳张梅马世良
- 关键词：DNA甲基化
- 米曲霉外源表达系统研究进展被引量：1
- 2016年
- 丝状真菌米曲霉是发酵工业的重要菌种,具有强大的蛋白分泌能力和较高的食品安全性,可作为表达外源蛋白的细胞工厂。近年来,米曲霉全基因组序列的测序完成和基于表达序列标签的基因组学研究,为深入研究米曲霉外源表达系统提供了条件。从基因组学进展、遗传转化体系等方面综述了米曲霉作为外源蛋白表达宿主的研究进展。针对米曲霉在外源蛋白表达中存在的瓶颈,提出构建蛋白酶缺陷株、使用强启动子、融合表达等策略,以提高外源蛋白的表达和产量。最后介绍了米曲霉表达系统的应用,利用米曲霉代谢工程菌生产工业用酶和次级代谢产品具有良好的前景。
- 于潇淳马世良
- 关键词：米曲霉基因组代谢工程
- D-半乳糖促小鼠衰老模型的衰老程度与自然生长鼠龄的比较被引量：16
- 2013年
- 为探讨不同剂量D-半乳糖对小鼠的促衰程度及其与自然生长鼠年龄的对应关系,应用改进的邻苯三酚自氧化法对自然生长鼠和D-半乳糖促衰小鼠肝脏中SOD活力进行了测定、比较和分析。结果表明,自然生长鼠约从11月龄开始进入明显的衰老期,至17月龄衰老程度较高,至21月龄时小鼠的衰老程度极高。还总结了不同剂量D-gal促衰鼠与自然生长鼠年龄的对应关系。
- 关萍郭搏王惠张梅马世良张立军
- 关键词：D-半乳糖自然衰老
- 银杏多糖对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖及GLUT家族基因表达的影响被引量：9
- 2018年
- 目的探讨银杏多糖对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法用不同浓度的银杏多糖处理对数生长期的小鼠乳腺癌4T1细胞,分别用MTT法和台盼蓝拒染法检测银杏多糖对4T1细胞增殖的抑制和细胞毒性作用;用DAPI核染色检测银杏多糖对4T1细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测银杏多糖对4T1细胞葡萄糖转运蛋白家族基因表达的影响。结果银杏叶和银杏外种皮多糖呈剂量时间依赖性抑制4T1细胞增殖,并且随着银杏多糖剂量的增加,细胞活力明显下降、毒性明显增强,细胞凋亡增加。qRTPCR结果显示,银杏多糖可以明显降低葡萄糖转运蛋白1的基因表达。结论银杏多糖可抑制4T1细胞的增殖和诱导细胞凋亡,并通过调节葡萄糖转运蛋白家族基因表达,干预癌细胞的能量代谢,提示银杏多糖对4T1细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用可能通过干预葡萄糖转运蛋白基因的表达实现的。
- 常萍徐艳周大宇吴笳迪马世良
- 关键词：葡萄糖转运蛋白1能量代谢
- 2型猪链球菌双组分调控系统SalK/SalR抗吞噬机制的初步研究
- 2013年
- 目的确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用。方法透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株ΔsalKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作用,通过THP-MΦ细胞吞噬模型评价猪链球菌的抗吞噬能力。结果透射电子显微镜观察发现突变株ΔsalKR荚膜消失,革兰氏染色结果和免疫荧光标记实验显示salKR缺失导致更多的猪链球菌被THP-MΦ细胞吞噬,THP-MΦ细胞吞噬模型进一步证实突变株ΔsalKR比野生株更容易被THP-1细胞吞噬。结论双组分调控系统SalK/SalR通过调控荚膜的形成来抵抗THP-MΦ细胞的吞噬。
- 付忠琳骈亚亚李雪琴郑玉玲马世良袁媛霍春月
- 关键词：2型猪链球菌荚膜
- 小鼠新基因克隆及功能预测
- 2017年
- 该研究克隆了一个可能与小鼠核酸结合相关的新基因,并对其表达模式和预期编码蛋白质功能进行了预测分析。该研究采用启动子捕获技术获得了具有启动子活性的基因组片段,结合生物信息学方法预测得到该启动子活性片段下游基因。采用RT-PCR(reverse transcription PCR)技术扩增得到相应基因,其c DNA为1 504 bp,完整开放阅读框(open reading frame,ORF)为540 bp,编码179个氨基酸。同源性分析表明,该基因与褐鼠(Rattus norvegicus)核酸结合蛋白和黑猩猩(Pan troglodytes)RNA结合蛋白的基因序列分别有78%和40%的相似性。利用实时荧光定量PCR技术分析了不同组织和不同生理、病理状态下该基因的表达水平。结果表明,该基因在带瘤小鼠各组织中的表达水平均高于健康小鼠相应组织,提示该基因可能参与了肿瘤的发生、发展。
- 李其龙路瑶刘逸超张然马世良
- 关键词：生物信息学基因克隆
- 银杏提取物细胞调节作用的研究进展被引量：2
- 2014年
- 银杏提取物具有重要的药理学作用,如抗氧化清除活性氧自由基的能力,减少血小板聚集和增强神经保护的活性。其在治疗阿尔茨海默病、学习记忆减退、心脑血管疾病、绝经后综合征等疾病中具有重要意义。同时银杏提取物还具有诱导肿瘤细胞凋亡与分化的抗肿瘤能力。该文就银杏提取物在分子水平上对细胞调节作用的研究进展予以综述,以便进一步明确银杏提取物的作用机制。
- 赵晓丹董妮张美红满红涛马世良
- 关键词：银杏提取物细胞周期细胞凋亡细胞损伤细胞代谢
