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表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的优化被引量：10: 2013年; 在自主研发无蛋白培养基的基础上,考察了氨基酸、维生素和葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响。结果表明,对培养过程中消耗较多的氨基酸进行补充,虽然不能促进细胞生长,但有利于培养后期细胞活性维持与抗体合成;B族维生素的添加能促进细胞生长并延长培养时间;作为重要的碳源和能源,葡萄糖浓度较高时会抑制细胞生长,而浓度较低时不能有效支持细胞生长与抗体合成,维持其在适当浓度有利于细胞生长并能延长培养时间,从而有利于提高抗体产量。通过合理调整各营养物的浓度配比形成了优化的无蛋白培养基,CHO细胞在该培养基中的最高密度达到52.6×105cells mL 1,抗体产量达到274 mg L 1,与初始培养基相比分别提高了33%和63%。总之,在细胞培养过程中应维持充足且平衡的营养物成分,以有效供应细胞生长与抗体合成的需求。; 刘国庆陈飞赵亮范里谭文松; 关键词：CHO细胞单克隆抗体

抗体高产中国仓鼠卵巢细胞细胞株生理生化特征、糖代谢及单克隆抗体基因表达量的分析: 2013年; 产物比生成速率是衡量细胞株表现的重要指标,研究产物比生成速率有差异的细胞株有助于深入理解此参数,进而为获得具有高产物比生成速率的细胞株提供借鉴。以表达单克隆抗体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为研究对象,通过有限稀释法筛选获得了抗体比生产速率比对照提高57.8%的亚克隆。以此为基础,对其生理生化特征、葡萄糖代谢以及抗体轻重链基因表达量进行了详细的分析。此亚克隆在Hyclone SFM4CHO培养基批次培养中,最高活细胞密度比对照降低了68.6%,其在指数生长期细胞干重、细胞直径、胞内总蛋白含量及胞内总蛋白和细胞直径比与对照相比均有不同程度的增加,且其表达产物的轻重链基因和信使RNA相对含量均有所提高。代谢方面,此亚克隆的葡萄糖比消耗速率比对照增加了77.9%,指数生长期线粒体相对合成活性比对照增加了172.5%,有助于增加产物的翻译速率。通过研究对表达单克隆抗体的高产亚克隆生理生化特征、葡萄糖代谢以及抗体轻重链基因表达量的分析,可为深入理解细胞培养过程中产物比生成速率的提高提供借鉴,同时为高产细胞株的构建和筛选提供指导。; 张存超赵亮陈飞范里王泽宋谭文松; 关键词：有限稀释法中国仓鼠卵巢细胞葡萄糖代谢

基于单纯型设计和部件搜索方法的CHO细胞无血清培养基的高通量优化被引量：5: 2014年; 氨基酸的浓度与配比对细胞生长和产物表达有重要作用。在自主研发无血清培养基的基础上,通过单纯型格子实验设计优化氨基酸浓度及配比后发现,优化的无血清培养基明显促进了细胞生长。生物反应器批式培养中,最高活细胞密度达52.6×105 cells·mL-1,抗体融合蛋白产量52.2 mg·L-1,相对于商业培养基Ex-cell 302,分别提高了26.7%和11.5%。在此基础上,通过部件搜索的方法确认具有显著正影响的氨基酸为谷氨酰胺、脯氨酸和甲硫氨酸。基于上述研究工作,在2 L反应器采用自主研发的优化无血清培养基,以葡萄糖为关键控制参数,进行两阶段动态流加培养过程,CHO细胞最大活细胞密度达94.6×105 cells·mL-1,抗体融合蛋白终产量600 mg·L-1,相对于商业培养基Ex-cell 302批式培养,分别提高了2.75倍和11.8倍。本研究工作为抗体融合蛋白的高效工业化生产奠定了基础。; 李晓璐范里赵亮陈飞谭文松; 关键词：CHO细胞无血清培养基

利用大孔微载体体外制备工程化组织被引量：3: 2008年; 组织工程从诞生至今已有二十年的历史,微载体在组织工程领域的应用研究近年来才日趋升温。利用大孔微载体Cytopore体外构建工程化微构组织,并基于其聚团特性,进行灌注再装配大组织的尝试。结果20 d内微构组织达最高细胞密度16.4×10~7cells/cm^3;32 d后,所形成的微构组织整体均质性好、活性高、基质生成丰富;培养后期微构组织发生明显聚团,经灌注再装配得到细胞和基质分布均匀的厘米级(12mm×6mm)大组织。说明利用大孔微载体构建工程化组织是一种行之有效、富有潜力的体外组织构建方案,有望构建尺寸≥5 mm、细胞和基质分布均匀的大组织。为体外组织构建提供新的思路。; 汤强周燕陈飞谭文松

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陈飞

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