闫梁
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部／卫生部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 错配PCR技术在快速检测耐药结核分枝杆菌中的应用被引量：1
- 2007年
- 耐药结核病的早期快速诊断是结核病控制中亟待解决的关键问题之一。利用基因型检测耐药性包括PCR产物直接测序法，错配PCR法等。错配PCR技术最早由Newton等于1989年建立并用于人抗胰岛素基因缺陷的检查，目前已广泛应用于基因点突变的检测。根据PCR引物设计的不同，可将其分为间接错配PCR，即引物与野生型完全互补，以突变株为模板不能扩增得到PCR产物，和直接错配PCR，即引物与特定的点突变完全互补，以野生株为模板不能扩增得到PCR产物。已有用间接错配PCR方法检测结核分枝杆菌利福平耐药的报道。本研究以检测耐利福平的结核分枝杆菌rpoB基因531位点的点突变为对象，建立了直接错配PCR法，并与间接错配PCR法进行了比较。
- 朱良斌孙刚沈鑫沈国妙骆菲菲孙笑闫梁梅建高谦
- 关键词：耐药结核分枝杆菌PCR技术PCR产物基因点突变利福平耐药早期快速诊断
- 鸭乙型肝炎病毒核心抗原DNA疫苗的构建及其诱导的体液免疫应答被引量：2
- 2009年
- 为研究鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg)真核表达质粒的免疫原性,分析DHBcAgDNA疫苗诱导的体液免疫应答,首先借助生物信息学方法对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)Core基因编码的氨基酸序列进行亲疏水性分析,分别构建DHBcAg全基因(E-DHBc263)及去除疏水性序列的DHBcAg片段(E-DHBc180)的真核表达质粒,间接免疫荧光检测结果显示可在COS7细胞内表达。进一步构建原核表达质粒p-DHBc263和p-DHBc180,仅p-DHBc180可表达蛋白,纯化后作为酶联免疫吸附试验(ELISA)包被抗原,用于DHBcAb的检测。分别用E-DHBc263和E-DHBc180免疫小鼠,采用间接ELISA检测DHBcAb。结果显示,E-DHBc180可诱导免疫小鼠产生DHBcAb免疫应答,加强免疫后效价可达1∶100～1∶400。结果提示,E-DHBc180可作为DHBcAgDNA疫苗,在DHBV感染鸭模型中评价其效果。
- 蒋定锋闫梁贲海静赵艳丰秦智强瞿涤
- 关键词：鸭乙型肝炎病毒核心抗原克隆DNA疫苗
- 鸭膜联蛋白2cDNA的克隆表达及抗体制备
- 2012年
- 目的克隆樱桃谷鸭膜联蛋白2（AnnexinA2）并制备抗体，用于鸭AnnexinA2蛋白的表达分析。方法采用RT-PCR方法从鸭肝脏组织中克隆鸭AnnexinA2eDNA序列，将该cDNA序列亚克隆到原核表达载体pET-28a（＋），构建重组原核表达载体pET-28a（＋）．AnnexinA2。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导AnnexinA2重组质粒原核表达，应用镍柱纯化AnnexinA2融合蛋白。腹腔注射AnnexinA2融合蛋白免疫小鼠，采用免疫印迹鉴定小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体并检测鸭原代肝细胞在培养12、24、72h以及120hAnnexinA2蛋白表达情况。结果成功构建了原核表达载体pET-28a（＋）．AnnexinA2，经NcoI和XhoI双酶切，琼脂糖凝胶电泳显示5369bp和1020bp条带，重组质粒测序结果显示重组序列正确。IPTG诱导重组质粒表达产生相对分子质量为36000的可溶性融合蛋白。AnnexinA2融合蛋白免疫小鼠，获得的抗血清1：2000稀释经免疫印迹仍能检测到靶蛋白，获得的小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体可应用于鸭原代肝细胞表达检测，AnnexinA2蛋白在鸭原代肝细胞培养12、24、72h以及120h均有表达。结论制备了小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体，可为探讨AnnexinA2影响鸭乙型肝炎病毒感染分子机制提供实验依据。
- 赵艳丰闫梁许斌贲海静杨金华周双宬瞿涤
- 关键词：多克隆抗体肝炎病毒乙型
