许则丰
- 作品数：20 被引量：111H指数：7
- 供职机构：浙江大学医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金镇江市科技计划项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNAi沉默STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的调控被引量：2
- 2007年
- 目的:观察RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法:应用STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3 mRNA表达,软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭性,琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡。结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,STAT3 siRNA转染可诱导结肠癌细胞失巢凋亡,且与浓度相关。结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的恶性侵袭,其机制与诱导失巢凋亡有关。
- 范钰张尤历张字川吴莺许则丰万毅刚
- 关键词：小干扰RNA失巢凋亡
- 肺癌患者外周血CK19mRNA、CEA、NSE、TPA联合检测的意义被引量：25
- 2002年
- 背景及目的:细胞角蛋白作为检测循环癌细胞的指标,越来越得到人们的重视。CK19mRNA作为微转移检测的基因标记有较高的应用价值,但其特异性及敏感度都不够理想。本实验旨在评价外周血CK19mRNA与肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇酶(NSE)和组织多肽抗原(TPA)水平的联合测定对肺癌临床诊断的价值。方法:用逆转录多聚酶链反应法(RT-PCR)检测外周血有核细胞CK19mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和时间分辨荧光法(TRF)测定91例肺癌、33例良性肺病患者和50例健康人的血清CEA、NSE和TPA水平,数据统计用t检验和χ2检验分析。结果:肺癌组外周血CK19mRNA和血清CEA、NSE、TPA的阳性检出率(分别为49.5%、65.9%、67.0%、83.5%)明显高于良性肺病组(分别为24.2%、9.0%、15.2%、9.0%)和健康对照组(分别为10.0%、4.0%、8.0%、6.0%)(P<0.01)。在不同的组织类型中CK19mRNA阳性检出率无统计学差异。随着临床分期逐步升高,Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期CK19mRNA的阳性检出率分别为44.4%、48.4%、54.2%呈上升趋势,但无显著性差异(P>0.05)。在Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期血清CEA水平犤(μg/L)/阳性率(%)犦分别为3.5/27.8、5.1/35.5、8.5/58.3,血清NSE水平犤(μg/L)/阳性率(%)犦分别为12.5/33.3、15.3/41.9、24.7/58.3,血清TPA?
- 潘锵荣张行许则丰郑树
- 关键词：CK19MRNA肿瘤标记物外周血CEANSETPA
- 多种小分子干扰RNA联合抑制乙型肝炎病毒的体外研究被引量：2
- 2005年
- 小分子干扰RNA(siRNA)能够在哺乳动物细胞中引起包括病毒基因在内的基因沉默。为了研究多种siRNA联合应用在体外抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制中的效果,本研究设计了12种针对不同HBV靶点的siRNA,转染可稳定分泌HBV颗粒的HepG22.2.15细胞,并采用了酶联免疫法检测上清液中HBsAg和HBeAg的含量,实时定量PCR法检测细胞中HBV的DNA含量。结果发现这12种分子均能在不同程度上抑制病毒复制。进一步研究表明它们对HBV的抑制作用在一定程度上存在剂量效应和协同作用,单分子siRNA在80nmol/L处对HBsAg和HBeAg的抑制率分别可达到约80%和60%,而多分子siRNA组合在20nmol/L处对HBsAg就能达到90%的抑制率,但对HBeAg表达的抑制率提高不明显。单分子siRNA在80nmol/L处对HBVDNA复制的抑制率可达到90%以上,而多分子siRNA组合在20nmol/L处对DNA含量就能达到约90%的抑制率。本研究的结果为进一步开发新的联合应用多种siRNA治疗HBV的途径打下了基础。
- 叶景佳许则丰陈喆曹江郑树丁佳逸
- 关键词：乙型肝炎病毒小分子体外研究DNA含量DNA复制病毒基因
- 口腔鳞癌患者唾液中端粒酶活性的表达被引量：1
- 2005年
- 钟来平陈关福许则丰张行赵士芳
- 关键词：口腔鳞癌唾液端粒酶活性核糖核蛋白
- 内皮型、诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中的表达被引量：1
- 2002年
- 目的 :研究内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在乳癌中表达及与淋巴结转移的关系。方法 :采用免疫组化S P法检测 60例乳癌中eNOS和iNOS的表达。结果 :eNOS和iNOS阳性在乳癌中表达率分别为 75 0 %和71 7%。在淋巴结转移组和无淋巴结转移组中eNOS阳性表达率分别为 66 7%和 83 3 % ,两组间差异无统计学意义 (χ2 =2 2 2 ,P >0 0 5) ,而iNOS在淋巴结转移和无转移组中阳性表达率分别为 53 3 %和 90 0 % ,两组间差异有统计学意义 (χ2 =9 93 ,P <0 0 1 )。结论 :内皮型、诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中高表达 ;
- 彭佳萍许则丰叶锋张苏展郑树
- 关键词：内皮型诱导型一氧化氮合酶乳腺癌肿瘤转移
- 唾液腺良性肿瘤患者唾液中CA125的表达及临床意义被引量：7
- 2005年
- 目的:探讨唾液腺良性肿瘤患者唾液中CA125的表达及其临床意义。方法:采集30例唾液腺良性肿瘤患者和30例健康对照者的唾液,采用酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测唾液中CA125的含量,通过统计学软件进行比较分析。结果:唾液腺良性肿瘤患者唾液中CA125的含量为506.4±75.0U/L;显著高于健康对照者唾液中CA125的含量306.0±50.1U/L(P<0.05)。结论:唾液中CA125的检测对于判断唾液腺良性肿瘤具有一定的临床应用价值。
- 陈关福钟来平赵士芳许则丰刘炜吴秉
- 关键词：唾液腺肿瘤唾液CA125口腔颌面部
- RNAi沉默Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的抑制被引量：13
- 2008年
- 目的:研究Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的影响。方法:设计合成针对Cripto基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染结肠癌LS-174T细胞。细胞分4组:空载对照组(对照组)和不同浓度(3.125、6.25和12.5 nmol/L)的siRNA组。分别于转染24、48、72 h后收集细胞,以实时定量PCR检测结肠癌细胞CriptomRNA,分别采用Northern blotting和免疫荧光标记法检测癌细胞VEGF mRNA和蛋白表达。分别收集转染72 h的12.5 nmol/L组和对照组细胞,接种于裸鼠背部。30 d后处死裸鼠,收集裸鼠肿瘤组织,对组织VEGF进行免疫组化染色,计算染色平均强度。结果:实时定量PCR检测显示,转染组CriptomRNA被有效地抑制,且呈浓度和时间依赖性。转染组细胞VEGF蛋白和mRNA明显低于对照组。裸鼠肿瘤免疫组化分析显示,转染组VEGF平均染色强度明显低于对照组。结论:Cripto基因参与了结肠癌组织血管生成的调控。采用siRNA下调Cripto基因表达,可抑制结肠癌组织血管生成。
- 范钰张尤历李华许则丰郑树
- 关键词：结肠肿瘤CRIPTOSIRNA血管内皮生长因子
- 内皮型与诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中的表达
- 一氧化氮(NO)是人体中重要的信号传递分子,参与多种生理和病理过程.研究表明,NO对肿瘤的生长、转移以及人体抗肿瘤反应均有重要影响[1].NO在体内由L-精氨酸和分子氧在一氧化氮合酶(nitric oxide synth...
- 彭佳萍许则丰叶锋张苏展郑树
- 关键词：乳腺癌一氧化氮合酶蛋白表达淋巴结转移
- 文献传递
- 含LTR序列的psiTPTE22基因mRNA在肿瘤中的表达
- 2007年
- 目的:通过检测psiTPTE22基因编码的AK097082及BC031001的mRNA表达情况,确定其是否是基因芯片检测到的在结肠癌组织中高表达的基因,同时探讨该基因在癌症发生发展中的可能作用。方法:应用RT-PCR以及实时荧光定量-PCR法检测psiTPTE22编码的AK097082及BC031001的mRNA在肾、肝、胃、肺、结肠的癌组织和相应癌旁正常组织以及9个肿瘤细胞系和胎盘组织中的表达情况。结果:RT-PCR显示只有psiTPTE22编码的BC031001 mRNA在结肠组织中表达,但实时荧光定量PCR检测及F检验发现其在结肠癌与相应正常组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05),因此psiTPTE22并不是基因芯片检测到的在结肠癌中特异高表达的基因。实时荧光定量-PCR还发现BC031001 mRNA在肾、肝、胃和肺的正常组织中高表达,而在相应的癌组织中表达较低;该mRNA在多个肿瘤细胞系中不表达或表达量很低;在胎盘组织中表达较高。对各组癌组织与相应癌旁正常组织的表达量进行F检验发现,肾、肝、胃、肺的癌旁正常组织和相应癌组织中的表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论:psiTPTE22基因编码的BC031001 mRNA表达水平与多种癌症呈负相关性,但其原因及其在肿瘤发生发展过程中的作用还有待进一步研究。
- 梁巧仪许则丰丁佳逸郑树
- 关键词：基因表达调控肿瘤基因寡核苷酸序列分析
- 特异小干扰RNA敲除PLK1基因的表达被引量：4
- 2006年
- 为了研究特异小干扰RNA(siRNA)作用于大肠癌细胞株SW 480中PLK1(Polo-like k inase 1)基因表达的mRNA对该细胞分裂生长的影响,设计了对应于PLK1基因表达mRNA不同位点的10种特异siRNA,经化学合成后,用脂质体转染SW 480细胞,实时定量PCR检测PLK1基因的表达,观察不同的siRNA作用强度,并计数细胞了解相应细胞的生长情况,W estern-b lot观察PLK1表达蛋白的变化和流式细胞计数分析细胞周期改变。发现10种siRNA均可敲除PLK1基因表达的20%以上,其中P1、P4和P9 3组敲除mRNA达80%以上,这3种siRNA及其混合物对PLK1基因mRNA的作用具有相应浓度效应,在25 nmol/L时达到最佳作用效果,而且相同浓度的混合物作用效果更好(超过95%),PLK1表达蛋白质明显降低,细胞周期在G2期受到阻碍。72 h后的各种siRNA浓度下细胞生长变化与PLK1基因的mRNA水平变化相一致。结果表明化学合成的特异siRNA对SW 480细胞中PLK1基因表达具有消除作用,混合物作用更强,在细胞水平上抑制了SW 480细胞的分裂生长。
- 陈功星董庆华张佳炜符芳芳许则丰梁巧仪郑树丁佳逸
- 关键词：小干扰RNAPLK1基因表达
