耿梅
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 丙戊酸钠对人外周血T淋巴细胞细胞因子表达的影响(英文)被引量：1
- 2011年
- 目的:研究丙戊酸钠(VPA)对人外周血T淋巴细胞的活化、凋亡及细胞因子表达的影响。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术分析VPA对多克隆刺激剂二丁酸佛波酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激下的人外周血T细胞CD69表达的影响,DiOC6(3)染色检测VPA对T细胞凋亡的影响。利用胞内细胞因子染色检测T细胞IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α的表达,以探讨VPA的保护机制。结果:VPA(1和5 mmol/L)对PDB和Ion诱导的人外周血T细胞CD69的表达具有明显的促进作用(P<0.01)。DiOC6(3)染色结果表明VPA(1和5 mmol/L)可以增强线粒体膜电势,抑制T细胞活化诱导的凋亡,高浓度则作用相反。胞内细胞因子染色分析显示,VPA在低浓度时能明显促进IL-2表达而高浓度时则抑制。同时,VPA能显著促进IFN-γ和TNF-α的表达(P<0.05),并呈剂量依赖性,而对IL-4表达的影响较小。结论:VPA对多克隆刺激剂诱导的人外周血T细胞的活化和凋亡具有双向调节作用,诱导IL-2、IFN-γ和TNF-α的表达。
- 耿梅王飞鹏欧阳东云徐丽慧陈清张延亭何贤辉
- 关键词：丙戊酸CD69细胞因子类淋巴细胞
- 人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定被引量：4
- 2010年
- 目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7。rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4h。结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体。
- 耿梅陈清徐丽慧张延亭何贤辉
- 关键词：白细胞介素7原核表达载体免疫印迹
- ASCT2胞外域ECL2原核可溶性表达条件的优化及其纯化
- 2010年
- 目的构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体，优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件，并获得纯化的ECL2蛋白。方法以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段，插入至pET-41b载体中，构建ECL2的原核表达载体，转化至大肠埃希菌，优化可溶性表达条件，GSH—Agarose亲和层析纯化并鉴定，与MCF-7细胞结合活性的测定。结果免疫印迹显示，ECL2融合蛋白既表达于包涵体中，也能以可溶性形式表达。随IPTG浓度的增高，可溶性表达水平提高；培养温度为28℃和33℃时可溶性产物高于37℃；而随诱导时间的延长至12h以上，可溶性表达量下降。可溶性表达优化条件为：温度33℃、IPTG浓度0．4mmol／L、诱导时间4h。经亲和层析获得高纯度ECL2蛋白并具有与MCF-7细胞结合活性。结论优化了ECL2融合蛋白的可溶性表达条件，通过亲和层析一步法可获得高纯度融合蛋白。
- 陈清欧阳东云徐丽慧耿梅张延亭何贤辉
- 关键词：胞外结构域可溶性表达
- 丙戊酸钠对人外周血淋巴细胞功能的影响及人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定
- 目的：研究丙戊酸(VPA)对人外周血淋巴细胞的活化、凋亡、及细胞因子表达的影响;构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定。方法：1.双色荧光抗体染色结合流式细胞术分析VPA对多克隆刺激...
- 耿梅
- 关键词：丙戊酸组蛋白去乙酰化酶抑制剂IL-7原核表达载体免疫印迹
- 文献传递
