章晓鹏
- 作品数：13 被引量：53H指数：5
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用蛋白质组学方法解析磷酸化蛋白质被引量：2
- 2005年
- 蛋白质磷酸化和去磷酸化这一可逆过程参与了高等真核生物细胞信号转导、细胞分化和细胞生长等重要过程,并与许多疾病、肿瘤的发生密切相关。蛋白质组学技术的不断发展和完善,可以更好、更多地识别和鉴定磷酸化蛋白质,为解析磷酸化蛋白质提供了可能。文章综述了用于分离和鉴定磷酸化蛋白质的蛋白质组学方法。
- 章晓鹏肖志强陈主初
- 关键词：磷酸化磷酸化蛋白质质谱技术
- 分析喉癌相关基因(LCRG1)抑瘤作用相关的磷酸化蛋白质
- 喉癌相关基因LCRG1是我室克隆的一个位于喉癌高频率杂合性丢失区域17q12-21.1,具有抑瘤基因生物学特性的新基因。生物信息学分析结果提示,LCRG1可能通过参与细胞信号传导通路的调控而发挥抑瘤作用。为了进一步验证L...
- 章晓鹏肖志强李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞陈主初
- 关键词：双向凝胶电泳MALDI-TOF-MS蛋白质组酪氨酸磷酸化
- 文献传递
- 应用磷酸化蛋白质组学方法初步研究喉癌相关基因LCRG1的功能被引量：8
- 2005年
- mRNA差异显示技术克隆的喉癌相关基因LCRG1,对不表达该基因的喉癌细胞系(Hep-2)的生长具有明显抑制作用.软件分析推测,LCRG1可能在细胞信号传导中发挥作用.为进一步地研究LCRG1的功能,应用RT-PCR和平板克隆形成实验证实,经多次传代的Hep-2/LCRG1细胞,仍表达LCRG1,且LCRG1具有显著的抑制细胞增殖的能力.抽提Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系总蛋白质,应用固相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2DGE),结合抗酪氨酸磷酸化抗体的免疫印迹和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),鉴定酪氨酸磷酸化的蛋白质.得到了分辨率较高、重复性较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的总蛋白质双向凝胶电泳图谱;结合免疫印迹反应、软件分析和质谱技术识别并鉴定了13个差异反应的酪氨酸磷酸化的蛋白质.这些蛋白质参与了细胞信号传导和细胞代谢等过程.推测LCRG1可能是通过调节这些蛋白质的酪氨酸磷酸化、去磷酸化状态,参与细胞增殖、代谢和凋亡等过程的调控,而发挥抑瘤作用.这为全面、真实地揭示LCRG1抑瘤作用的分子机理提供了新思路.
- 章晓鹏肖志强李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞陈主初
- 关键词：双向凝胶电泳MALDI-TOF-MS免疫印迹蛋白质印迹
- 人肺鳞癌组织的比较蛋白质组学研究被引量：17
- 2006年
- 目的利用蛋白质组学方法建立人肺鳞癌组织及其癌旁正常支气管上皮组织的差异蛋白质表达谱。方法对20例人肺鳞癌组织和配对的癌旁正常支气管上皮组织进行比较蛋白质组学研究,即利用双向凝胶电泳(2-DE)分离二者总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质。结果(1)比较分析20例肺鳞癌及正常配对组织的2-DE图谱,找到差异蛋白质点76个;(2)对68个差异蛋白质点进行了肽质量指纹图分析,鉴定出一些与瘤基因、细胞周期调控、信号转导等有关的肺鳞癌相关蛋白;(3)肺鳞癌相关蛋白mdm2、c-Jun和表皮生长因子受体(EGFR)在人肺鳞癌组织中高表达,而在正常对照中均表达下调,与蛋白质组的分析鉴定结果是一致的。结论成功鉴定了68个肺鳞癌相关蛋白,为进一步筛选用于肺鳞癌诊断、治疗和预后评估的肺鳞癌分子标志物奠定了坚实的基础。
- 汤参娥李萃肖志强章晓鹏陈主初易红李建玲段朝军梁宋平
- 关键词：肺鳞癌组织蛋白质组学
- 人肺鳞癌组织的血清蛋白质组学的比较分析被引量：13
- 2005年
- 采用以肿瘤免疫学与蛋白质组学(proteomics)研究技术有机地结合为基础的血清蛋白质组学研究体系(serologicproteomeanalysis ,SERPA)筛选肺癌分子标志物.对10例人肺鳞癌组织,应用双向凝胶电泳(two dimensionalelectrophoresis ,2 DE)技术对同一肺鳞癌组织的细胞总蛋白同时进行电泳后获得3张相同的凝胶,其中一块2 DE凝胶经银染显色作为平行胶,其余两块2 DE凝胶经电转膜将凝胶中的蛋白质转至硝酸纤维素(NC)膜上,然后分别与肺癌患者的自身血清以及正常对照血清进行Western印迹分析,获取Western印迹反应图谱.经计算机图像分析识别差异反应的蛋白质,然后与平行胶比较找出相应的差异反应蛋白质点.获得了分辨率较高的人肺鳞癌组织与患者的自身血清以及正常对照血清的Western印迹反应图谱;图像分析共识别36±8个差异反应的蛋白质;在平行胶上找到了匹配的差异反应蛋白质点.对2 0个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出14个与细胞生长增殖、细胞代谢、细胞周期调控、信号转导等有关的肺鳞癌相关抗原.通过血清蛋白质组技术对肺鳞癌组织进行的研究,建立了分辨率较高的人肺鳞癌组织与患者的自身血清以及正常血清的Western印迹反应图谱,成功鉴定14个肺鳞癌相关抗原,为进一步筛选用于肺鳞癌诊断。
- 李萃肖志强章晓鹏陈主初吴晓英冯雪萍张鹏飞李建玲易红梁宋平
- 关键词：人肺鳞癌血清蛋白质组双向凝胶电泳MALDI-TOF-MS
- 喉癌相关基因LCRG1抑瘤机理的蛋白质组学研究
- 研究背景及目的:喉癌是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤。寻找与喉癌发生、发展密切相关的基因并进一步研究其功能是阐明喉癌发病的分子机制、制定其防治战略的关键。本室采用mRNA差异显示分析喉癌的基因表达情况克隆了一个位于染色体...
- 章晓鹏肖志强李萃陈主初冯雪萍张鹏飞
- 文献传递
- 人肺鳞癌组织及癌旁组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析被引量：5
- 2004年
- 背景与目的:肺鳞癌的发生发展是一个多因素、多步骤的过程,虽然从基因和转录水平已对肺癌进行了许多成功的研究,但其癌变机制仍不十分明确,目前尚缺乏有效的用于肺鳞癌早期诊断和预后监测的特异性分子标志物。本研究的目的是利用蛋白质组学方法,建立分辨率高和重复性好的人肺鳞癌组织及其癌旁正常支气管上皮组织的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达的蛋白质。方法:利用固相pH梯度(immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensionalelectrophoresis,2-DE),分离人肺鳞癌组织及癌旁正常支气管上皮组织的总蛋白质,用图像分析软件比较分析,以识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪(massspectrometry)得到相应的肽质指纹图谱(peptidemassfingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:(1)建立双向凝胶电泳图谱:癌组织和癌旁正常支气管上皮组织3块凝胶的平均蛋白质点数分别为1349±67和1297±73,平均匹配的点数分别为1235±48和1183±56,匹配率达91.5%和91.2%;同一癌组织的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(Isoelectricfocusing,IEF)方向的偏差是(0.873±0.125)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE方向上的偏差为(1.025±0.213)mm。(2)肽质指?
- 李萃陈主初肖志强吴晓英詹显全李茂玉冯雪萍章晓鹏李建玲陈平梁宋平
- 关键词：肺鳞癌双向电泳图谱鳞癌组织
- EB病毒及其癌基因LMP1对上皮细胞的转化作用被引量：9
- 2003年
- EB病毒 (EBV)是一种人群感染率较高的致癌性疱疹病毒 ,与伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌的关系最为明确。近年来EBV在上皮源性肿瘤发生、发展中的作用受到众多学者的关注 ,而其癌基因LMP1在上皮源性肿瘤发病的病因学方面的作用更成为研究的热点。本综述就EBV进入上皮细胞、永生化上皮细胞的机制。
- 章晓鹏贺智敏陈主初
- 关键词：上皮源性肿瘤
- 筛选喉癌相关基因LCRG1的有效沉寂序列
- 2008年
- 目的:拟采用RNA干扰技术筛选有效的针对LCRG1基因的打靶序列。方法:首先采用PCR定点突变技术改造pSuper载体,而后利用该改造后的载体构建针对LCRG1基因的5对打靶序列的真核表达载体。将构建的重组pSuper362,398,432,789,903表达载体和pSuper空白载体分别转染He-la细胞,经抗性药物筛选获得抗性细胞克隆和池克隆;通过RT-PCR及荧光定量PCR鉴定阳性克隆,进行平板克隆集落形成试验,以检测打靶序列沉寂LCRG1基因mRNA表达水平的效果。结果:应用PCR定点突变技术改造的pSuper载体,可被BglⅡ酶切;利用RT-PCR和荧光定量PCR检测各重组载体转染细胞池克隆LCRG1mRNA的表达发现,362组,398组,432组的基因均能封闭内源性LCRG1基因表达,尤以362组为显著;鉴定362组筛选的各个抗性克隆,发现A2和A5克隆的LCRG1mRNA表达水平明显降低。平板克隆实验结果提示362组的A2,A5和池克隆的细胞增殖能力明显强于载体和空白对照组(P<0.05)。结论:成功改建了pSuper真核表达载体;362siRNA相对其他siRNA具有较好的打靶效果,这对于应用RNAi方法研究LCRG1基因的功能和其作用分子机制具有重要的指导意义。
- 段朝军蒋铁斌李萃章晓鹏李茂玉肖志强汤参娥易红陈主初
- 关键词：RNAI
- 转染LCRG1基因的喉癌细胞差异蛋白质分析被引量：1
- 2006年
- 背景与目的:LCRG1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因。先前的研究显示将LCRG1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选LCRG1抑瘤作用相关的蛋白质。方法:抽提稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)的细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术分别分离其总蛋白。考马斯亮蓝染色显色,PDQuest图像分析系统分析获取的2-D胶图像,从胶中选取差异表达的蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析,最后Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质。结果:获得了重复性和分辨率较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,总蛋白质点数分别为1075±43和1027±23,平均匹配率为91%。图像分析差异蛋白质点,质谱鉴定了20个差异表达的蛋白质点,其中MALDI-TOF-MS鉴定了16个,ESI-Q-TOFMS/MS鉴定了4个。对这些初步鉴定的差异蛋白质进行功能分析,发现一些与细胞代谢、转录调控相关的蛋白质。结论:建立了稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,应用质谱技术识别并鉴定出一些与LCRG1抑瘤作用相关的差异表达蛋白质,为进一步研究LCRG1作用的分子机制提供新的线索。
- 章晓鹏肖志强陈主初李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞
- 关键词：喉肿瘤HEP-2细胞比较蛋白质组双向凝胶电泳差异表达蛋白
