石燕红
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 癌钙调蛋白／鱼精蛋白截短体融合基因在原核表达载体中的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的在原核表达载体中构建癌钙调蛋白(OM)/鱼精蛋白截短体(tp)融合基因,进行基因测序鉴定。方法提取SD大鼠腹腔巨噬细胞,并进行细胞计数,经巨噬细胞特异性抗体CD68鉴定。设计引物扩增OM基因,并在其3’端引入tp的编码基因,经PCR扩增获得OM/tp融合基因,通过中间载体PUC57进行目的基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体PET32a连接,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,小量提取质粒,送样经公司测序鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳获得OM/tp目的基因,与预期的目的基因大小一致,回收目的基因与中间载体PUC57连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致。抽提质粒PUC57-OM/tp,经测序鉴定后与预期的序列一致。质粒PUC57-OM/tp酶切后与载体PET32a连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致。抽提质粒PET32a-OM/tp经测序后与预期的序列一致。结论 OM/tp融合基因的成功构建,为该融合蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础。
- 石燕红薛铮朱彤马丽娜胡丹崔志利
- 关键词：鱼精蛋白融合基因原核表达
- 大鼠癌钙调蛋白基因原核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 目的 在原核表达载体中构建癌钙调蛋白（OM）基因,并对构建的原核表达质粒进行表达和鉴定.方法 取SD大鼠6只,提取腹腔巨噬细胞并活化,提取总RNA,设计引物对OM基因进行RT-PCR扩增.通过中间载体pUC57进行目的 基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体pET-22b（＋）连接,转化入大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR筛选阳性克隆后小量提取质粒,送样行核苷酸序列分析鉴定.成功构建的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组体的表达,并用Western blot鉴定表达产物.结果 琼脂糖凝胶电泳获得目的 基因OM,大小为350 bp左右,与预期的目的 基因大小一致.构建的重组质粒pET-22b（＋）/OM菌检PCR获得长度为500 bp左右的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒经核苷酸序列分析后表明,克隆的片段与OM基因序列一致.在IPTG的诱导下,重组体表达出分子量约11.7 kD的表达产物,Western blot结果证实其为目的 蛋白.结论 实验成功构建了OM基因原核表达载体及其表达,为该蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础.
- 薛峥石燕红朱彤马丽娜胡丹崔志利
- 关键词：克隆基因表达
- 癌钙调蛋白在神经系统及视神经再生方面的研究进展被引量：1
- 2011年
- 癌钙调蛋白（OM）是钙结合蛋白家族中的一员，属于肌钙蛋白c超家族，它具有不同于其他钙结合蛋白的特异性钙结合（CD）区域。通过研究其结构和分布特征，发现OM在调节细胞的电活动、调控细胞内信号传导通路及细胞周期等方面发挥着重要的作用。近年来，OM在促进神经轴突再生方面的研究是目前研究的热点之一，尤其是在视神经再生的研究方面取得了一定的成绩，并有待运用于临床。OM促进视神经再生的作用为解决脊髓和脑神经的再生性难题打下了基础。对OM的概念、组织的分布、主要的作用及机制、与视神经再生的关系方面进行综述。
- 石燕红李书明（综述）崔志利
- 关键词：神经轴突视神经
