通过单因素试验和Box-Behnken实验设计考察在蛋白去除过程中b型流感嗜血杆菌荚膜多糖浓度、Tween 80及(NH_4)_2SO_4含量对多糖回收率及蛋白残留含量的影响,建立回归模型.预测荚膜多糖质量浓度8.54mg/mL、Tween 80质量分数12.9%、(NH_4)_2SO_4质量分数28.12%为该方法的最佳参数组合,并通过实验进行验证其符合度分别达到93.9%和90.3%,符合度较高.研究通过实验设计(design of experiments,DOE)试验建立并优化了Hib荚膜多糖中杂蛋白的新方法,能够应用于实际的生产工艺中.
目的 建立核磁共振波谱（nuclear magnetic resonance,NMR）法测定b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）荚膜多糖中核糖含量的方法。方法 利用NMR技术中的氢核磁共振波谱（1H-NMR）的定量功能,对不同浓度的D-核糖进行定量分析,验证该方法的精密度及准确度,并与传统化学方法进行比较。结果NMR法定量结果相对标准偏差（RSD）均小于1.0%,相对误差除最低浓度20 mmol/L为7.4%外,其余浓度均在1%-3%之间,不同浓度的样品回收率在97.2%-107%之间;化学法定量结果RSD在0.6%-7.9%之间,相对误差在3%-6.5%之间,不同浓度样品回收率在93.5%-105.3%之间;两种方法检测的3批Hib荚膜多糖中核糖含量无明显差别,均在《中国药典》三部（2010版）规定的320～410 mg/g之间。结论1H-NMR定量方法取样少,可直接定量,该方法精密度高、准确度高、重现性好,且不破坏多糖结构,可应用于细菌荚膜多糖质量控制的核糖定量。
目的在前期开发的b型流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖提取新工艺及利用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化的疫苗制备新方法的基础上,评价利用新方法生产的Hib结合疫苗原液的稳定性。方法将疫苗原液在2~8℃条件下放置36个月,根据实验设计,不同时间取样并按照《中国药典》中相应的检测指标、检测方法进行评价。结果新工艺制备的Hib结合疫苗原液在2~8℃储存条件下,大部分指标保持相对稳定,只有分子量大小、高分子结合物含量及效力结果下降,但保存30个月仍符合2010年《中国药典》的相关要求。结论新方法与传统方法生产的Hib结合疫苗原液稳定性基本相同,证明了利用新方法制备Hib结合疫苗的新工艺可以用于扩大生产规模。
B型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)是小儿细菌性感染的主要元凶之一。据世界卫生组织(WHO)2012年4月统计报道,2008年全世界因Hib感染死亡的5岁以下儿童人数为20.3万,而目前预防Hib最有效的措施是接种Hib疫苗。本文回顾了Hib疫苗的发展,对现有Hib结合疫苗的免疫原性、结合方式、结合策略进行综述。
目的通过试验设计(design of experiments,DOE)方法和统计学分析快速优化Vero细胞无血清培养基。方法以DMEM/F12为基础培养基,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验考察7种添加物胰岛素、人转铁蛋白、透明质酸、牛血清白蛋白、亚硒酸钠、表皮生长因子和高密度脂蛋白对Vero细胞生长的影响,以CCK-8测定的吸光度值(A490)为响应值,优化Vero细胞无血清培养基。用最优化的因子浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞,对优化结果进行验证。结果通过Plackett-Burman试验筛选出胰岛素、牛血清白蛋白和人转铁蛋白对Vero细胞生长影响较大;采用最陡爬坡试验和Box-Behnken试验进一步优化,Design-Expert 8.06软件进行回归分析,得到胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白的最佳浓度分别为5.625μg/ml、14.034μg/ml和3.92 mg/ml,在此优化条件下的A490值为2.3,较基础培养基提高了3.41倍。用最优的胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞的A490值为2.148,为预测值的93.4%,符合度较高。结论应用DOE方法快速高效地优化了Vero细胞无血清培养基,为无血清培养基的研制奠定了基础。
