王娉
- 作品数：10 被引量：34H指数：3
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金国家自然科学基金创新研究群体项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 三步层析法分离毕赤酵母工程菌中表达的新疆家蚕抗菌肽被引量：1
- 2007年
- 通过离子交换层析、疏水作用层析和分子排阻层析等三步层析的方法,分离纯化了毕赤酵母工程菌所表达的新疆家蚕抗菌肽。结果表明,三步层析后,SDS电泳显示单一条带,分子量约为7.0 kDa;所纯化的新疆家蚕抗菌肽具有较强的抗菌活性。该纯化工艺的建立,为新疆家蚕抗菌肽在饲料添加剂、农用抗生素等方面的广泛应用奠定基础。
- 窦君郑树涛王娉张富春
- 关键词：新疆家蚕抗菌肽离子交换层析纯化
- 鸡PPARγ和C/EBPα的蛋白表达及其对肉鸡腹脂含量的影响被引量：5
- 2006年
- 利用IPTG诱导含有原核表达质粒pGEX-4T-1/PPARγ和pGEX-4T-1/C/EBPα的大肠杆菌BL21(DE3)菌株,表达GST-PPARγ和GST-C/EBPα融合蛋白,表达产物用Glutathione Sepharose 4B纯化,将纯化后的重组蛋白免疫肉仔鸡,检测其产生抗体情况及其对肉鸡腹脂含量的影响。SDS-PAGE结果显示融合蛋白GST-PPARγ在大肠杆菌胞内主要以包涵体的形式表达,分子量大约80ku;融合蛋白GST-C/EBPα在大肠杆菌胞内主要以可溶性蛋白形式表达,分子量大约62ku。主动免疫肉鸡结果表明PPARγ、C/EBPα及混合组鸡只均产生了较高水平的抗体,且PPARγ组肉鸡腹脂含量显著低于对照组。
- 王启贵王娉马纪李辉张富春
- 关键词：肉鸡PPARΓC/EBPΑ重组蛋白腹脂
- 水动力转染鸡PPARγ基因在小鼠肝脏中的表达
- 2007年
- 采用水动力转染技术将含有家鸡PPARγ基因的真核表达质粒、表达该基因siRNA的干扰质粒注射到小鼠体内,并利用RT-PCR方法检测PPARγ基因在小鼠脏器中的表达情况,以建立检测重组质粒瞬时表达和筛选siRNA序列的有效方法。结果表明:注射重组质粒pcDNA3/PPARγ后家鸡PPARγ基因在小鼠的肝脏中高效表达;同时注射重组质粒pcDNA3/PPARγ和表达该基因siRNA序列的干扰质粒pGenesil-1/PPARγshRNA1后,家鸡PPARγ基因在小鼠肝脏中的表达明显地受到抑制。与传统的真核细胞转染技术相比,水动力转染技术具有快速、简单、方便、高效、安全、成本低等优点,可作为外源重组DNA表达的检测和siRNA的筛选等一种有效的方法。
- 王启贵王娉庄淑珍郑耀虎李辉张富春
- 关键词：小鼠PPARΓ基因
- PPARγ基因与高血压病
- PPARγ基因是多个信号通路关键的中间环节，对其结构和功能调控的深入研究，有助于揭示PPARγ基因在高血压疾病中的分布状况以及与其他高血压相关基因之间的相互关系，从而进一步阐明PPARγ基因在高血压病中的地位和作用，为将...
- 王娉
- 关键词：PPARΓ基因肥胖高血压
- 鸡PPAR-γ基因表达载体构建及抗血清制备被引量：2
- 2007年
- 为构建鸡PPAR-γ基因的原核和真核表达载体并制备鸡PPAR-γ的抗血清,根据鸡PPAR-γ基因cDNA序列设计一对引物,采用RT-PCR的方法扩增鸡PPAR-γ基因的cDNA片段并将其分别插入到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3中;进而诱导重组原核表达载体pGEX-4T-1/PPAR-γ在大肠杆菌BL21中表达;同时利用重组真核表达载体pcDNA3/PPAR-γ免疫注射小鼠使其产生免疫应答。SDS-PAGE结果显示pGEX-4T-1/PPAR-γ在大肠杆菌BL21中得到了高效的表达。ELISA和Western blot结果表明,pcDNA3/PPAR-γ免疫小鼠产生了效价较高和特异性较强的抗体。本研究所构建的真核表达载体pcDNA3/PPAR-γ为在细胞水平上研究鸡PPAR-γ基因超表达提供了有力的工具;所获得的重组蛋白和抗血清为在蛋白水平上研究鸡PPAR-γ基因的功能奠定了基础。
- 王娉王启贵李辉张富春
- 关键词：抗血清
- 鸡脂肪分化转录因子PPARγ和C/EBPα抗体制备及功能研究
- 脂肪细胞分化是由分化转录因子调控的复杂过程。过氧化物酶体增殖物激活受体家族(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)和CCAAT增强子结合蛋白家族(CCAAT/...
- 王娉
- 关键词：PPARΓ基因抗体制备生长发育
- 文献传递
- 革兰阴性杆菌节律性释放调控物质的研究
- 2007年
- 目的研究奇异变形杆菌(Proteus mirabilis,PM)波动生长过程中生物波调控因子(biological wave regulating factor,BRF)的节律性释放及作用。方法应用MTT实验和激光共聚焦显微镜观察BRF对细菌代谢的影响;采用凝集抑制实验检测PM周期性释放BRF;原子力显微镜观察PM在潜-生序变化中BRF生成情况。结果PM在波动生长过程中周期性释放BRF,潜生体可合成大量的BRF。BRF能提高细菌的代谢水平,促进细胞内pH值的变化。结论PM的波动生长过程是细菌生长代谢的消长与环境平衡-远离平衡变化之间互为因果的动态过程,是与细菌自身调控物质BRF协同作用的结果。
- 窦君刘俊康王娉徐启旺张富春
- 关键词：奇异变形杆菌原子力显微镜
- 重组真核表达载体pEGFP-C1/cecropin-XJ的构建及其在胃癌细胞MGC80-3中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的构建新疆家蚕抗菌肽(cecropin-XJ)基因的真核表达载体pEGFP-C1/cecropin-XJ(pEGFP-cec),检测其在肿瘤细胞中的表达情况,探讨抗菌肽对肿瘤细胞的作用机制和抗菌肽抑瘤作用效果.方法应用基因重组技术,将新疆家蚕抗菌肽(cecropin-XJ)基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1,通过酶切和测序的方法鉴定重组质粒pEGFP-cec的正确性.将pEGFP-cec经脂质体法转染到胃癌细胞MGc80-3,48 h后观察EGFP瞬时表达情况;72 h后,应用RT-PCR,检测抗菌肽cecropin-XJ基因的表达;96 h后,消化细胞,经台盼蓝染色,检测重组质粒pEGFP-cec表达产物对肿瘤细胞的影响.结果细胞转染48 h后,荧光显微镜下可观察到EGFP的表达,发出绿色荧光;转染72 h后,RT-PCR检测到胞内有抗菌肽cecropin-XJ基因的表达;表达产物能够抑制肿瘤细胞的生长.结论成功构建了真核表达载体pEGFP-cec,并在肿瘤细胞中可见抗菌肽cecropin-XJ和EGFP基因的有效表达以及表达产物具有显著的抗肿瘤活性.为深入开展抗菌肽抑制肿瘤的研究奠定基础.
- 窦君王娉周勇尼格买提.热西旦张富春
- 关键词：新疆家蚕抗菌肽真核表达抗肿瘤活性
- 多杀性巴氏杆菌毒力因子的研究进展被引量：18
- 2006年
- 王娉张富春
- 关键词：多杀性巴氏杆菌脂多糖荚膜外膜蛋白
- 鸡C/EBP-α基因表达载体的构建及抗血清制备被引量：4
- 2007年
- 目的:构建鸡C/EBP-α基因原核和真核表达载体及制备高效价的抗血清,为在蛋白质水平研究鸡C/EBP-α基因的功能以及与其他脂肪细胞分化调控基因间的时空协同关系奠定基础。方法:采用RT-PCR的方法,根据已知鸡的C/EBP-α基因cDNA序列,获取鸡C/EBP-α基因的cDNA片段,测序正确后分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3中。重组质粒pGEX-4T-1/C/EBP-α转化大肠杆菌BL21(DE3),不同浓度的IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测蛋白表达情况;真核表达载体pcDNA3/C/EBP-α应用水压转染法,经RT-PCR检测外源C/EBP-α基因在小鼠肝脏中的表达情况,然后采用"DNAprime-protein boost"策略免疫小鼠,制备高效价的抗血清,应用Western blot检测抗血清的特异性。结果:构建了鸡C/EBP-α基因的原核和真核表达载体;SDS-PAGE显示C/EBP-α得到了特异性的表达;RT-PCR结果提示C/EBP-α mRNA在小鼠肝脏中表达;ELISA和Western blot结果表明基因免疫小鼠产生了高效价和特异性强的抗血清。结论:成功构建了鸡C/EBP-α基因的原核pGEX-4T-1/C/EBP-α和真核表达载体pcDNA3/C/EBP-α,外源基因C/EBP-α mRNA能在小鼠肝脏中有效表达,同时制备了高效价、特异性强的抗血清。
- 王娉王启贵李辉张富春
- 关键词：家鸡抗体
