查芹芹
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：北京大学第六医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- β-淀粉样前体蛋白第二、三外显子删除突变抑制β-淀粉样蛋白分泌被引量：2
- 2003年
- 目的 :观察 β 淀粉样前体蛋白第二、三外显子编码结构域对培养的人神经纤维母细胞瘤细胞系 (SH SY5Y)生长代谢和 β淀粉样蛋白 (Aβ)分泌的影响。 方法 :利用重组DNA技术 ,构建 pcDNA3.1APP695和删除第二、三外显子的pcDNA3.1ΔAPP695质粒 ,用脂质体转染法将其转入SH SY5Y细胞系 ,用 0 .6 g·L-1G4 18筛选获得稳定表达外源基因的细胞系 ,采用MTT法分析对细胞增殖的影响 ,用免疫沉淀Westernblot分析细胞培养液中Aβ的含量。结果 :成功构建了APP695cDNA和删除第二、三外显子的ΔAPP695cDNA的真核表达载体 ,转染SH SY5Y细胞系后 ,Westernblot证实外源基因得到表达 ,MTT分析结果显示删除第二、三外显子的ΔAPP695cDNA未对细胞产生明显的抑制增殖作用 ,免疫沉淀Westernblot分析表明 ,与转染全长APP695cDNA细胞相比 ,转染ΔAPP695cDNA细胞Aβ分泌显著减少。 结论 :APP695第二、三外显子编码结构域删除后抑制了Aβ的生成 。
- 查芹芹阮燕刘中华曹连元张岱
- 关键词：阿尔茨海默病Β-淀粉样前体蛋白Β-淀粉样蛋白外显子
- 利用Gal4/VP16-UAS和双荧光素酶报告基因系统检测γ-分泌酶活性被引量：3
- 2006年
- 目的:确立基于Gal4/vp16-UAS和双荧光素酶报告基因系统检测γ-分泌酶切割淀粉样前体蛋白活性的方法。方法:将插入上游激活序列(UAS)和萤火虫荧光素酶报告基因的质粒MH100,嵌合酵母活性转录因子(Gal4)、单纯疱疹病毒蛋白(VP16)和γ-分泌酶切割位点的质粒C99-GVP,以及海肾荧光素酶质粒pRL-CMV,用脂质体转染法转入稳定表达淀粉样前体蛋白C末端的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),用免疫沉淀Westernblot分析法检测β-淀粉样蛋白(Aβ)的生成,利用Gal4/vp16-UAS和双荧光素酶报告基因系统测定荧光素酶报告基因的表达。结果:免疫沉淀Westernblot分析表明A(的生成在γ-分泌酶激活剂神经节苷脂GM1作用下升高并呈剂量依赖性,同时双荧光素酶法检测γ-分泌酶活性也同步升高。在γ-分泌酶抑制剂作用下Aβ的产生呈剂量依赖性的减少,同时γ-分泌酶活性也同步降低。结论:基于Gal4/vp16-UAS和双荧光素酶报告基因系统检测γ-分泌酶活性的方法有效可靠,是一种敏感、定量的检测方法。
- 刘忠华阮燕查芹芹张岱
- 关键词：Γ-分泌酶阿尔茨海默症
- 阿尔茨海默病β-淀粉样蛋白前体水解代谢的调节
- 第一部分:神经节苷脂GM1干扰β-淀粉样蛋白前体(APP)加工水解过程及其机制探讨 目的: 研究神经节苷脂GM1对APP加工水解过程的影响及其机制.方法:不同浓度的GM1作用于APP695cDNA全长转染的SH-SY5Y...
- 查芹芹
- 关键词：阿尔茨海默病Β-淀粉样蛋白前体神经节苷脂GM1Β-淀粉样蛋白阿尔茨海默病Β-淀粉样蛋白前体Β-淀粉样蛋白
