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湘西蛇足石杉中石杉碱甲、乙和丙含量的测定被引量：8: 2013年; 采用超声萃取法提取湘西蛇足石杉总生物碱,用高效液相色谱法同时测定其石杉碱甲、乙和丙含量,并分析其在植株不同部位的分布。结果表明:湘西4个样地蛇足石杉中石杉碱甲、乙和丙含量基本一致,分别达到0.5‰、0.3‰和0.04‰;但植株不同部位三种石杉碱含量差异显著,其中石杉碱甲和乙的分布均为叶>茎>根,石杉碱丙则是根大于叶和茎。由此可知,湘西蛇足石杉具有资源优势,石杉碱在植株的分布具有明显的部位选择性;采用HPLC可同时检测石杉碱甲、乙和丙,方法简单快速、准确可靠。; 杜次彭清忠田向荣朱越李菁; 关键词：蛇足石杉石杉碱甲石杉碱乙高效液相色谱法

蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因LDC及其编码的蛋白与应用: 本发明公开了一种蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因LDC及其编码的蛋白与应用，该基因为首次从蛇足石杉的cDNA中获得，填补了我国传统中药材蛇足石杉中分子克隆出赖氨酸脱羧酶基因的空白。本发明所提供的赖氨酸脱羧酶基因具有SEQ ID ...; 彭清忠杜次朱越李菁; 文献传递

华南美丽葡萄花青素还原酶基因及其编码的蛋白与应用: 本发明公开了一种华南美丽葡萄花青素还原酶基因及其编码的蛋白与用途，该基因为首次从华南美丽葡萄的cDNA中获得，填补了我国葡萄资源中分子克隆出花青素还原酶基因的空白。本发明所提供的花青素还原酶基因具有SEQ ID NO.1...; 彭清忠杜次朱越李菁; 文献传递

1株蛇足石杉根际铁载体细菌的分离、筛选与鉴定被引量：5: 2013年; 对蛇足石杉根际铁载体细菌进行了分离、筛选与鉴定,以期筛选到潜在高效促生细菌。采用梯度稀释涂平板法从蛇足石杉根际土中分离细菌,再通过CAS检测平板分析,从中筛选出1株产生铁载体能力较强的菌,并结合16S rDNA基因系统发育分析对可产铁载体的蛇足石杉根际细菌初步鉴定。从蛇足石杉根际中筛选到1株产铁载体细菌JSX 389,经鉴定为Lysinibacillus属菌株。; 肖艳红李菁刘祝祥杜次李贵; 关键词：蛇足石杉细菌铁载体 RDNA

湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲分布及与LDC表达的关系被引量：6: 2013年; 目的:测定湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量,分析石杉碱甲分布与赖氨酸脱羧酶基因(LDC)表达的关系。方法:采用HPLC测定蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量,HPLC条件:Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.08 mol/L醋酸铵(32∶68,V/V),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测波长为308nm。以肌动蛋白基因为内参物,通过半定量RT-PCR比较LDC在根、茎、叶中的表达量。结果:石杉碱甲在0.5～10.0μg/mL线性关系良好,平均加样回收率为102%,RSD为0.32%;湘西蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量分别为(118.35±0.77)μg/g、(411.09±2.47)μg/g、(562.15±2.86)μg/g;半定量RT-PCR分析表明LDC在根、茎、叶中表达量无明显差异。结论:湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量差异显著;推测赖氨酸脱羧酶不是石杉碱甲生物合成中的关键酶。; 杜次李菁田向荣朱越彭清忠; 关键词：蛇足石杉石杉碱甲高效液相色谱法半定量RT-PCR

杜仲法尼烯基焦磷酸合酶基因cDNA全长的克隆与序列分析被引量：5: 2015年; 采用RT-PCR法,从杜仲幼嫩叶片中分离法尼烯基焦磷酸基因c DNA全长序列,克隆并对该基因全长序列进行生物信息学分析。从杜仲嫩叶中共获得两个基因分别命名为Eu FPPs1和Eu FPPs2,测序结果表明两基因开放阅读框分别为1 047 bp和1 029 bp,推测分别可以编码348个和342个氨基酸残基,在线预测表明两个蛋白序列均存在两个聚丙烯合酶位点。系统进化分析结果表明,Eu FPPs1和Eu FPPs2分别聚集于不同的分支,它们之间的进化距离为0.352,但是在亲缘关系上均与楤木和人参最近,进化距离分别为0.281、0.287,0.175、0.184。; 杜次李菁彭清忠汤鹏田向荣; 关键词：生物信息学

常温土壤中耐冷菌的分离、鉴定及产酶分析被引量：5: 2012年; 目的:从常温土壤中筛选冷适应微生物,并进行初步鉴定和产低温酶分析。方法:采集吉首大学校园内土壤样品,通过低温富集培养筛选冷适应微生物;通过形态观察、生理生化特性检测和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析,对分离的菌株进行初步鉴定;利用平板筛选法检测其产低温酶特性。结果:分离获得6株耐冷细菌JSBP-1～JSBP-6,初步鉴定其分属假单胞菌属(Pseudomonas)、紫色杆菌属(Janthinobacterium)和节杆菌属(Arthrobacter);在5℃和15℃培养条件下,菌株JSBP-1产蛋白酶能力较强,JSBP-2和JSBP-6产淀粉酶能力较强,JSBP-5仅在5℃条件下有较强的产脂肪酶特性。结论:常温土壤中存在一定数量的冷适应微生物,其中假单胞菌是其优势菌群之一。这类适冷微生物菌群具有潜在的生产低温酶能力。; 易浪波舒琅唐云涛朱越杜次彭清忠; 关键词：耐冷菌低温酶

湘西蛇足石杉石杉碱含量及石杉碱甲生物合成LDC基因的克隆与功能表征: 蛇足石杉[Huperziaserrata(Thunb)Trev.]属于石杉科(Huperiaceae),石杉属(HuperziaBernh)植物,是我国传统中草药,也是目前石杉碱甲的主要药源植物。湘西蛇足石杉资源优质丰富...; 杜次; 关键词：蛇足石杉石杉碱甲基因克隆生物合成; 文献传递

蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的克隆、原核表达及其功能分析被引量：9: 2014年; 赖氨酸脱羧酶(Lysine decarboxylase,LDC)是抗老年痴呆药——石杉碱甲生物合成的第一个酶。为了研究蛇足石杉中LDC的特性和功能,以其总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到2个赖氨酸脱羧酶基因LDC1和LDC2,克隆至pMD?19-T中测序发现,两基因同源性为95.3%,分别编码212和202个氨基酸。将两基因引入pET-32a(+)构建重组表达质粒pET-32a(+)/LDC1和pET-32a(+)/LDC2,分别转入BL21(ED3)中进行诱导表达,在30℃条件下获得可溶性表达产物Trx-LDC1和Trx-LDC2;采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,建立酶促反应体系分析其脱羧酶活性,薄层层析(TLC)检测表明重组融合蛋白Trx-LDC1和Trx-LDC2均能催化赖氨酸脱羧生成尸胺。利用生物信息学软件分析发现LDC1和LDC2理化性质存在差异,但预测的二级结构和三维结构基本一致。; 杜次李菁唐云涛彭清忠; 关键词：蛇足石杉基因克隆原核表达酶活性

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杜次