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神经生长因子对神经干细胞向少突胶质细胞分化的诱导作用研究: 2009年; 目的体外分离和培养大鼠海马神经前体细胞,在此基础上探索在体外环境下使神经干细胞定向分化为少突胶质细胞,为后续的神经干细胞移植提供实验基础.方法取孕10 d的Wistar大鼠胚胎脑的海马,分离神经前体细胞,将单克隆的神经干细胞球贴壁,并使用生长因子(NGF),分析不同浓度的NGF对神经干细胞分化的影响.在含NGF的NSC培养基中进行体外培养,以GalC免疫组化标记分化后的少突胶质细胞,对神经干细胞的分化特性进行鉴定.结果NGF可促进神经前体细胞的增殖及神经球的克隆形成,并获得了Nestin阳性的神经前体细胞,其可分化为分别表达GalC的阳性细胞.结论体外分离和培养的大鼠海马神经前体细胞,在NGF生长因子的作用下,神经干细胞可定向分化为少突胶质细胞,并与培养基中NGF的浓度有一定的关系,有望应用于脱髓鞘神经系统疾病的细胞移植治疗.; 李宝园杨德兵丰玲王雁春郭敏芳马存根; 关键词：神经干细胞少突胶质细胞神经生长因子细胞分化

尼克酰胺与exendin-4诱导胰腺干细胞向β细胞定向分化研究被引量：1: 2014年; 目的体外分离胰腺干细胞,选择最佳培养条件探索胰腺干细胞在体外环境下向β细胞的分化情况.方法取SD大鼠胰腺组织,胶原酶消化,密度梯度离心获得纯化的胰腺导管上皮细胞.采用分步诱导法诱导胰腺导管上皮细胞向胰岛β细胞分化;用胰岛素释放实验检测胰岛功能,免疫荧光法检测nestin,PDX-1,CK-19,CK-20胰岛素及胰高血糖素等的表达.结果胰腺消化培养6～12h,可看到胰腺导管上皮细胞贴壁生长,通过4步诱导培养,nestin阳性细胞快速生长,并可分泌胰岛素.结论体外分离的成人胰岛前体细胞,在诱导因子的作用下,胰腺干细胞可定向分化为β细胞,有望应用于糖尿病的治疗.; 解谦刘利萍普鸿丽李宝园; 关键词：胰腺干细胞定向分化 Β细胞

大鼠Hes1基因真核表达载体的构建及瞬时表达在神经前体细胞分化中的作用: 2009年; 目的探讨Hes1基因高表达对神经前体细胞分化的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,用RT-PCR方法获得Hes1基因的全长cDNA,插入pGEM-T-Easy克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pCDNA3.1,用脂质体将重组质粒转染原代培养的神经前体细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR方法鉴定Hes1基因在神经前体细胞基因组中的存在,实时荧光定量PCR检测Hes1基因在转染细胞中的过表达情况。结果经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定,证实目的基因已插入重组质粒,RT-PCR证明,经G418筛选得到的转基因神经前体细胞克隆的基因组DNA中存在Hes1基因;实时荧光定量PCR进一步证明,转基因神经前体细胞Hes1基因的mRNA高表达。结论构建了大鼠Hes1基因的真核表达载体,获得了高表达Hes1基因的神经前体细胞克隆。Hes1基因高表达可抑制神经前体细胞Ngn1的表达,并促进神经前体细胞向神经胶质细胞的分化。; 李宝园马存根赵焕英赵春礼徐群渊高福禄; 关键词：神经前体细胞细胞分化反转录-聚合酶链式反应

大鼠大脑皮质神经前体细胞的分离培养及其增殖分化鉴定被引量：1: 2006年; 目的:体外分离和培养大鼠大脑皮质神经前体细胞并进行增殖和分化鉴定。方法:分离2周龄大鼠皮质神经前体细胞,在含EGF、bFGF和GDNF的NSC培养基中进行体外培养,使用免疫细胞荧光染色技术对细胞的分化特性进行鉴定。结果:EGF、bFGF和GDNF可促进神经前体细胞的增殖及神经球的克隆形成,并获得了Nestin阳性的神经前体细胞,其可分化为分别表达β-Ⅲtubulin、GFAP和GalC的阳性细胞。结论:体外分离和培养的大脑皮质神经前体细胞,在含EGF、bFGF和GDNF的NSC培养基中培养,具有增殖分化的能力,有望应用于神经系统疾病的细胞移植治疗。; 李宝园赵焕英赵春礼徐群渊高福禄; 关键词：大脑皮质神经前体细胞细胞细胞分化

黄芪养生饮中总黄酮与黄芪甲苷含量测定被引量：3: 2012年; 目的测定黄芪养生饮中总黄酮与黄芪甲苷的含量，以确定黄芪养生饮的药用价值。方法总黄酮的含量测定采用紫外分光光度法，以芦丁为对照样品，在波长510nm处进行测定；黄芪甲苷的含量测定采用薄层色谱一分光光度法，测定波长为422nm。结果总黄酮的含量，回归方程为A=0．01360C-0．01837，r=0．9995，芦丁在8．2～47．5mg／L有良好的线性关系，平均加样回收率为98．04％，RSD=0．41％。测得总黄酮的平均含量为5．17mg／g。黄芪甲苷的含量，回归方程A=1．427C＋0．158，r=0．9995，在60～230μg点样范围内，平均加样回收率为98．57％，RSD=0．32％，测得黄芪甲苷的平均含量为4．36mg／g。结论本实验所用的测定总黄酮与黄芪甲瞽含量的方法简单、准确、可靠、实用性好、适用于黄芪养生饮工业化生产中产品质量控制检验。; 刘利萍高健李宝园解谦; 关键词：总黄酮黄芪甲苷

Sertoli细胞对大鼠大脑皮质神经前体细胞的诱导分化作用被引量：1: 2009年; 目的:研究Sertoli细胞对体外培养大鼠皮质神经前体细胞生长发育的促进作用,及向多巴胺能神经元分化的诱导作用。方法:将大鼠Sertoli细胞与14d大鼠皮质神经前体细胞体外共培养,免疫细胞化学检测神经干细胞标记物巢蛋白,神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞标记物βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(GalC),及多巴胺能神经元标记物酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果:随着共培养时间的延长,神经前体细胞中GFAP阳性细胞数量逐渐减少,而β-Ⅲtubulin阳性细胞数增多,并出现TH阳性神经元。结论:Sertoli细胞抑制体外培养的大鼠皮质神经前体细胞的生长,但具有显著促神经元分化作用,并能够诱导与其共培养的大鼠皮质神经前体细胞分化为多巴胺能神经元。; 李宝园赵焕英赵春礼马存根徐群渊高福禄; 关键词：SERTOLI细胞神经前体细胞

Notch信号转导相关分子的构成、激活机制与调节被引量：4: 2009年; Notch基因是在果蝇体内被发现的，该基因的部分功能缺失会在果蝇翅膀的边缘造成一些缺刻。后续的研究表明，Notch基因位点突变的半合子或纯合子果蝇在胚胎期死亡。在死亡的胚胎中，神经组织取代了上皮组织从而使神经组织异常丰富。1983年，果蝇的Notch基因被克隆。Notch基因编码一种膜蛋白受体，它的配体Delta和Serrate也是膜蛋白，表达在邻近细胞上。当邻近细胞表面的配体结合Notch，Notch的胞内区（notch intracellular domain．NICD）被切割，从细胞膜上脱离，NICD是Notch的活性形式，它被转运进入细胞核并与Su（H）（suppressor of hairless）结合。; 李宝园丰玲王雁春郭敏芳马存根; 关键词：神经前体细胞细胞分化

与Sertoli细胞共培养大鼠大脑皮质神经前体细胞分化中Notch信号相关基因表达分析: 2009年; 目的:检测与Sertoli细胞共培养条件下大鼠大脑皮质神经前体细胞分化过程中Notch信号相关分子的表达变化。方法:分离大鼠Sertoli细胞和大脑皮质神经前体细胞。神经前体细胞与Sertoli细胞共培养条件下,用Real-timePCR相对定量法,分别检测Notch受体Notch1、Notch2、Notch3、Notch4及其配体Delta1、Delta3、Jagged1、Jagged2,以及ngn1、hes1基因的表达变化。结果:培养细胞汇片后第5天,Sertoli细胞Notch1～4基本表达维持不变;其配体Jagged2表达较高,但不表达Delta1;同时也不表达ngn1、hes1。神经前体细胞Notch表达水平较高,尤以Notch1和Notch2为高;而其配体以Jagged1、Jagged2表达较高,前神经因子Hes1有较高表达,而Ngn1表达较低。细胞共培养条件下,Notch受体、配体以及Hes1与神经前体细胞组相比都有明显的下调,而Ngn1却相对有所提高。结论:Sertoli细胞可通过Notch配体的作用,调节神经前体细胞Notch信号分子的表达。在共培养条件下,Sertoli细胞对神经前体细胞Hes1表达有抑制作用,但对Ngn1有正向调节作用,从而影响神经前体细胞的分化。; 李宝园赵焕英赵春礼马存根徐群渊高福禄; 关键词：神经前体细胞 SERTOLI细胞

睾丸支持细胞诱导大鼠神经干细胞向多巴胺能神经元分化作用研究: ＜正＞神经干细胞（Nerual stem cells,NSCs）在一定条件下可被诱导分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。这种分化受到某些内在基因及外在信号分子的共同调节。如能利用NSCs的分化潜能使之在适当诱导因子...; 李宝园丰玲王雁春郭敏芳马存根; 文献传递

黄芪保健酒有效成分的分析测定被引量：4: 2011年; 目的通过测定黄芪保健酒中各种有效成分的含量,为黄芪酒的保健功效和实用价值提供必要的理论依据。方法采用NaNO2-Al(NO3)3比色法测定总黄酮的含量,采用香草醛-硫酸法测定皂苷的含量,采用苯酚-硫酸法测定多糖的含量,使用6300型氨基酸自动分析仪测定氨基酸的含量,采用AAS-6000型原子吸收分光光度计测定微量元素的含量。结果黄芪保健酒中黄酮含量为1.856 mg/g,皂苷的含量为0.835 mg/g,多糖的含量为2.178 mg/g;共有18种氨基酸,其中包括8种人体必需氨基酸;微量元素共有10种,其中钙和镁的含量最高。结论黄芪保健酒具有较高的保健功效和实用价值。; 刘利萍陈洁李宝园解谦

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