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转基因生物检测技术研究进展被引量：3: 2011年; 转基因技术的发展,促进了转基因生物(genetically modified organisms,GMO)的数量、多样性不断增加,给GMO检测工作提出了新的挑战,同时也促进了GMO检测方法的发展。GMO检测新方法突破了传统方法中一次只能分析一个靶目标的限制,新方法一次可以检测多个靶目标,向高通量检测的方向发展。作者对最新报道的GMO检测方法作一概述,主要包括实时荧光PCR多靶分析方法,锁式探针-基因芯片方法、液相芯片方法,多重PCR-毛细管电泳方法,生物发光检测方法,以及为GMO检测提供方法决策的支持系统(DSS、GMO示踪)等。; 李全芬李志辉王慧煜韩雪清; 关键词：PCR 高通量 DSS

H1N1和H3N2亚型流感病毒基因芯片检测方法的建立被引量：2: 2011年; 为建立同时能鉴别甲型H1N1和猪流感病毒常见亚型的新型基因芯片检测方法,根据GenBank中已发表的甲型流感病毒MP的基因序列和甲型H1N1(2009)和猪流感病毒H1N1、H3N2亚型的基因序列,设计、筛选并合成7对特异性引物和1对通用引物;根据扩增的靶序列,设计并合成14条特异性探针和3条质控探针,制备了甲型H1N1(2009)流感病毒和猪流感病毒H1N1、H3N2亚型基因芯片;并进行了特异性试验、敏感性试验和田间样品的检测。结果显示,该芯片检测方法与猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等猪常见病毒无交叉反应;对猪H1N1、猪H3N2和甲型H1N1(2009)流感病毒而言,最低可检测到105、104和105稀释的病毒株。结果证实,该方法特异性强、敏感性高,是一种高通量的甲型H1N1和猪流感常见亚型筛查方法。; 王慧煜梅琳侯义宏李全芬林祥梅韩雪清; 关键词：甲型H1N1 猪流感病毒基因芯片

干扰素单克隆抗体的研究进展被引量：4: 2010年; 多功能细胞因子干扰素(IFN)是生物细胞受到适量的干扰素诱生剂刺激后所产生的一类微量的、具有高度生物学活性的糖蛋白,具有广谱抗病毒、抗肿瘤、免疫调节及影响细胞分化等生物活性。与之相对应,抗IFN的单克隆抗体McAb作为一种重要的研究、检测IFN的手段,已被广泛应用于免疫机制研究、免疫功能检测、纯化IFN等领域。综述了各种IFN单克隆抗体、用途及其前景。; 李超林祥梅李全芬韩雪清; 关键词：干扰素单克隆抗体

转基因牛基因芯片检测方法的建立: 转基因技术是把'双刃剑”在给人类带来经济和社会利益的同时,也引发了许多问题。因转基因动物是人类将所需要的优良基因转入受体体内所得,并非自然界本来存在,所以比自然界本来存在的生物更具生存优势和竞争力,同时也加大了它的潜在威...; 李全芬; 关键词：转基因牛多重PCR 基因芯片检测动物源性

牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立被引量：3: 2011年; 建立牛结核病的γ-干扰素(BovIFN-γ)免疫学检测方法。本研究利用rBovIFN-γ抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,通过淋巴细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备抗BovIFN-γ的单克隆抗体,在McAb及多克隆抗体的基础上建立双抗体夹心ELISA,并进一步优化ELISA反应条件。结果表明,获得一株能稳定分泌抗BovIFN-γMcAb的杂交瘤细胞株A12E9,分泌单克隆抗体腹水效价为1∶107,属于IgG1亚类,具有良好的特异性;所建立的双抗体夹心ELISA方法,BovIFN-γ最低检测限为40 ng/mL,与其他蛋白不发生交叉反应,表现出良好的特异性。该方法为建立牛结核病的γ-干扰素诊断方法奠定了基础。; 李超林祥梅梅琳李全芬韩雪清; 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA

转基因牛多重PCR检测方法的建立被引量：3: 2011年; 为建立一种快速检测转基因牛的多重PCR方法,针对牛线粒体16 S rRNA基因(BOS mtD-NA16 S rRNA,BOS)、转基因动物常用标记基因新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)、人乳铁蛋白编码基因(humanlactoferrin gene,hLF)、人-α-乳清蛋白编码基因(humanα-lactalbumin gene,hα-LALBA)和人溶菌酶编码基因(humanlysozyme gene,hLYZ)设计了5对特异性引物,通过对扩增条件的优化,建立转基因牛的多重PCR检测方法。利用人乳铁蛋白转基因牛、人溶菌酶转基因牛、人α-乳清蛋白转基因牛样品和其他转基因动物样品进行了敏感性和特异性试验。结果表明方法具有较好的特异性和敏感性,与转人防御素3基因奶牛样品和转omega-3基因猪样品等均无交叉反应,最低检出限达1 ng,该方法既可筛查转基因牛样品,又可进一步确认转基因牛外源基因,适合转基因牛的快速检测。; 李全芬王慧煜余多慰程涛韩雪清; 关键词：转基因牛多重PCR

甲型H1N1流感病毒基因芯片检测方法的建立: 2009年全球暴发的甲型H1N1流感,是迄今为止暴发的最新动物源性流感病毒感染人事件。2011年初,甲型H1N1流感又一次威胁北半球,大部分国家均面临甲型H1N1流感患者猛增的严峻形势。研究表明,甲型H1N1(2009)...; 王慧煜梅琳李全芬侯义宏韩雪清; 文献传递

牛干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定被引量：1: 2010年; 通过IPTG诱导的大肠埃希菌表达重组牛干扰素-γ融合蛋白(BovIFN-γ),利用GlutathioneSepharose 4 Fast Flow亲和层析柱进行融合蛋白的纯化,纯化后的融合蛋白BovIFN-γ作为抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA筛选,有限稀释法克隆亚克隆获得分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、亚类及稳定性进行鉴定。获得一株稳定分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株A12E9,细胞培养上清和腹水效价可达1∶3 200和1∶160 000。; 李超林祥梅余多慰李全芬李桂芬韩雪清; 关键词：单克隆抗体

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李全芬