张钦宪
- 作品数：198 被引量：655H指数：11
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- 转染针对黑色素瘤抗原编码基因的短发夹RNA真核表达载体对SGC7901细胞增殖及凋亡的影响
- 2008年
- 目的：观察转染针对黑色素瘤抗原编码基因（NRAGE）的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体对SGC7901细胞增殖及凋亡的影响。方法：用特异性shRNA真核表达载体pSuper-EGFP-NRG转染SGC7901胃癌细胞，经G418筛选，应用RT-PCR方法检测转染细胞NRAGE mRNA的表达，应用流式细胞术检测转染细胞增殖与凋亡。结果：体外培养的pSuper-EGFP-NRG转染的SGC7901胃癌细胞中NRAGE基因被沉默，G0～G1期、G2期细胞百分率降低，S期细胞百分率增多（P〈0．05）。结论：NRAGE基因参与了SGC7901细胞周期和细胞凋亡的调控。
- 程传耀黄忻丁一张娓张钦宪
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA
- 组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体的构建及其在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达被引量：1
- 2006年
- 目的:构建组织型纤溶酶原激活剂(t- PA)真核表达载体,并检测其在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达。方法:以含t PAcDNA的质粒PETPFR为模板,PCR扩增目的片段t PA,HindⅢ和SalⅠ双酶切t- PA,HindⅢ和XhoⅠ双酶切pcDNA3真核表达载体。SalⅠ和XhoⅠ的黏性末端互补,体外连接酶切产物,重组体转化感受态JM109细菌,筛选菌落和测序鉴定。以脂质转染胺试剂LipofectamineTM2000将pcDNA3t PA转染入乳癌细胞系MCF-7,G418筛选。应用原位杂交技术,以地高辛标记的t PAcDNA为探针,显示t PA在MCF7中的瞬时表达。结果:电泳获得目的片段t PA的条带2.1kb,初步鉴定为阳性重组体,测序证实为正确的t PA序列。MCF-7细胞原位杂交显示大部分细胞表达阳性。结论:组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体构建成功,可在乳癌细胞系MCF7中表达。
- 朱晓燕岳保红丁一张钦宪
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体
- 不同品系SV40T转基因小鼠血浆胃泌素水平测定
- 2010年
- 目的:检测不同品系SV40T转基因小鼠血浆胃泌素水平。方法:取已建立的8个品系SV40T转基因小鼠和B6小鼠空腹血,应用ELISA法检测血浆胃泌素水平。结果:B6小鼠、2#、4#、16#、24#、51#、57#、61#和73#品系转基因小鼠血浆胃泌素水平(μg/L)分别为(2.814±0.209)、(1.135±0.114)、(0.853±0.701)、(2.371±0.335)、(1.371±0.190)、(0.685±0.374)、(2.274±0.251)、(2.471±0.251)和(0.986±0.173),9组相比,差异有统计学意义(F=17.449,P<0.001);其中2#、4#、24#、51#及73#品系转基因小鼠血浆胃泌素水平较B6小鼠明显降低(P<0.05)。结论:筛选出了5个稳定表达的SV40T转基因小鼠品系。
- 申琦邵蓓新郜十伟陈辉张钦宪
- 关键词：SV40T抗原胃泌素转基因小鼠
- 核干细胞因子基因siRNA表达载体的构建及鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的构建针对核干细胞因子(NS)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体。方法根据GenBank提供的NS基因AY825265mRNA序列及siRNA设计原则设计siRNA,筛选得到126-144nt,199-217nt和487-505nt3个19bp片段为靶序列;合成带有BamHI、XhoI酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆至载体pRNAT-U6.1中构建重组表达载体;转化DH5α,提取质粒,应用PCR技术和测序方法鉴定重组克隆。转染入食管癌EC9706细胞,检测NS基因沉默情况。结果PCR筛选得到3个目的片段的阳性重组克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Westernblot检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低EC9706细胞中NSmRNA和蛋白水平的表达。结论成功构建出一组针对NS基因的siRNA表达载体,为下一步NS基因的RNA干扰研究鉴定了基础。
- 张功员赵国强尹磊张钦宪
- 关键词：核干细胞因子RNA干扰基因克隆EC9706
- 不同类型人胃黏膜组织中端粒长度随年龄的变化
- 2008年
- 目的：探讨不同类型人胃黏膜组织中端粒长度随年龄的变化。方法：选择32例胃癌患者（男12例，女20例；年龄20～岁3例，30～岁7例，40～岁10例，50～岁4例，60～69岁8例；肿瘤直径〈3cm 13例，≥3cm 19例；高、中分化6例，低分化19例，黏液腺癌或印戒细胞癌7例；肿瘤侵及黏膜层和黏膜下层3例，深肌层11例，浆膜层18例；有淋巴结转移19例，无淋巴结转移13例）手术切除的癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织标本，用酚-氯仿法抽提基因组DNA，再经限制性内切酶HinfⅠ酶切后，应用Southern杂交技术检测端粒长度，并分析端粒长度与患者年龄以及临床病理指标的关系。结果：正常胃黏膜组织的端粒长度为（6728±1707）bp，且随年龄增长端粒长度缩短（P〈0．05）；癌旁组织的端粒长度为（5969±1659）bp，癌组织的端粒长度为（5088±1712）bp，胃癌和癌旁组织的端粒长度均不随年龄增长而缩短（P均〉0．05）。按正常胃黏膜组织、癌旁组织、胃癌组织的顺序，端粒长度依次缩短（P均〈0．05），且胃癌组织端粒长度与性别、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移等病理指标均无相关性（P均〉0．05）。结论：端粒缩短是胃癌早期发生的分子事件；端粒长度变化不宜作为判断胃癌恶性程度的生物标志。
- 刘书漫李倩如朱晓燕张钦宪
- 关键词：胃黏膜胃癌端粒长度年龄
- siRNA对生长抑素基因表达的抑制作用
- 2006年
- 目的:研究siRNA对生长抑素(SOM)基因表达的抑制作用．方法:根据生长抑素基因序列设计和合成 RNA干扰的靶序列,应用RiboMAXT7体外转录试剂盒合成siRNA并转染胃癌细胞系 SGC-7901,经RT-PCR,免疫组化法检测生长抑素在mRNA和蛋白质水平的抑制效应．结果:成功合成了siRNA(21 bp)．胃癌细胞系 SGC-7901中SOM基因的表达呈强阳性,分布在胞质中,siRNA作用48 h后SOM基因的表达明显抑制,与空转染和空白对照组相比有显著性差异(49．71％±0．056％vs 10．49％±0．021％, 0％,P<0．01)．结论:siRNA可特异性抑制生长抑素基因的表达．
- 朱晓燕岳保红张钦宪
- 关键词：生长抑素RNA干扰
- 纯合子胃壁细胞特异性表达SV40T抗原转基因小鼠品系的建立
- 2010年
- 目的:建立稳定遗传的纯合子SV40T胃壁细胞定位表达转基因小鼠品系。方法:通过定量PCR法比较已知杂合子小鼠和未知阳性小鼠中外源基因的起始模板量来确定小鼠的基因型,并通过测交的方法来验证试验结果。结果:用定量PCR法选育出15只纯合子小鼠,经测交验证它们与野生型小鼠交配所生的后代均为阳性,证明了定量PCR的结果是正确的。通过纯合子之间的全同胞交配建立了6个独立的纯合子品系。结论:定量PCR具有省时、省力及高通量等优点,能够很好地应用于筛选纯合子转基因动物。
- 郜十伟刘书漫陈辉李倩茹金辉张钦宪
- 关键词：转基因胃壁细胞
- ret基因真核表达载体的构建及其瞬时表达
- 2006年
- 目的:构建ret基因真核表达载体pcDNA3.0-RET,为制作转基因动物提供实验基础。方法:利用HandⅢ及NotⅠ限制性核酸内切酶,消化pSK-RET及pcDNA3.0空质粒,获得目的基因及相应载体;通过T4连接酶重组DNA;通过氨苄青霉素(Amp)抗性、酶切鉴定及DNA序列分析,确定阳性克隆。通过脂质体包裹转染NIH3T3细胞,采用Westernblot方法检测载体的瞬时表达状况。结果:Amp抗性筛选阳性;酶切片段电泳分析在5400bp及3300bp处有明显条带;DNA序列分析提示重组基因与实际序列一致;Westernblot结果显示175000处有明显条带。结论:ret基因真核表达载体pcDNA3.0-RET构建成功,并可瞬时表达。
- 郭小兵张钦宪
- 关键词：RET基因
- 羊心脏蒲肯野纤维和蒲肯野纤维-心肌束连接观察被引量：3
- 2007年
- 目的:观察羊心脏蒲肯野纤维的演化过程和蒲肯野纤维与心肌束连接及其演化关系。方法:12只山羊取心脏后,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察。结果:正常成体羊心室肌层内蒲肯野纤维,按组成细胞的演化程度不同分为6级。蒲肯野纤维-心肌束的连接方式随连接所在部位、蒲肯野纤维的演化程度而不同。结论:正常成体羊心室肌层内的蒲肯野纤维为束细胞和(或)心肌细胞组成的动态结构。蒲肯野纤维与心肌束有多种连接方式,但均反映2者存在演化关系。
- 史学义邢文英金辉张娓张钦宪乐晓萍
- 关键词：心脏传导系统
- CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶原核表达载体的构建及其抗药活性分析被引量：2
- 2009年
- 目的分析头孢噻肟—水解酶-14(CTX-M-14)型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)型菌抗药活性,为临床治疗提供参考。方法收集分离产ESBL大肠埃希菌46株,采用PCR克隆目的基因,采用基因重组技术构建pET28a-CTX-M-14质粒,采用BL21大肠埃希菌作为宿主菌进行表达,采用液体稀释法检测其抗药活性。结果PCR扩增条带在约900bp位置处,序列分析结果显示其与目的基因符合;转化子对青霉素类、头孢一、二代及三代中头孢噻肟、头孢曲松耐药,对庆大霉素、四环素、喹诺酮类药物、碳青酶烯类敏感;对头孢他啶体外试验敏感,对加有酶抑制剂的抗生素稳定敏感。结论本研究成功构建了CTX-M-14型ESBL原核表达载体,且具有广泛抗药活性;此为临床合理选择治疗药物提供了理论依据。
- 郭小兵张志坚阎志勇张钦宪
- 关键词：聚合酶链式反应
