张梅英
- 作品数：76 被引量：184H指数：7
- 供职机构：中国医科大学实验动物部更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目国家自然科学基金辽宁省科技厅科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 大鼠显微注射胚胎采集方法的比较
- 2008年
- 目的优化大鼠显微注射前胚胎采集的方法。方法选用最佳超排5周龄SD大鼠,腹腔注射PMSG-HCG,分别用撕开输卵管壶腹部和输卵管伞端冲洗两种方法采集胚胎,比较获得卵数,受精率,注射存活率等的差异。结果冲洗输卵管伞端采集胚胎的方法所得到的受精率、存活率都较高,与撕开输卵管壶腹部方法比较差异显著(P<0.01),胚胎总数无显著性差异(P>0.05)。结论冲洗输卵管伞端采集胚胎的方法为大鼠显微注射前胚胎采集比较好的方法。
- 于洋周生来王惟吕向川张梅英王禄增郑志红
- 关键词：显微注射胚胎采集
- 潮霉素抗性转基因BDF1小鼠模型的建立被引量：1
- 2007年
- 目的建立具有潮霉素(hygromycin)抗性转基因BDF1小鼠,用于制备携有hygromycin抗性筛选标志ES阳性细胞克隆的饲养层。方法通过显微注射的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因片段(5.1kb)导入BDF1受精卵雄原核中,共注射169枚受精卵,然后将129枚受精卵细胞植入同期受孕的受体母鼠输卵管内。结果共产生37只转基因小鼠,经PCR和Southern检测获得9只阳性小鼠,对一只子代鼠进行RT-PCR检测证明hyg基因已经在肾、肌肉、脾内表达。结论成功的建立具有潮霉素抗性的BDF1转基因鼠,该模型动物可以为基因敲除研究提供良好的基础条件。
- 张梅英董婉维汪瑛杨葳李兆阳周生来于洋王惟秦英郑志红王禄增
- 关键词：潮霉素饲养层转基因
- BALB／c－nu／＋小鼠可移植性自发乳腺癌的研究
- 1996年
- 将一例ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／＋小鼠自发乳腺癌移植于同品系小鼠皮下，一年间共传代２４代，成功率达１００％，无自发消退现象，该移植瘤潜伏彻短，生长稳定，免疫组织化学检查均为上皮来源，经光学显微镜检查各代移植瘤形态结构与原代组织结构基本一致，电镜检查细胞排列不规则，胞间可见桥粒，胞质内线粒体、内质网、高尔基复合体丰富，也可见张力原纤维，分泌颗粒．核仁明显；异染色质边集。
- 张梅英修英涛宗阿南王太一
- 关键词：BALB/C小鼠电镜检查免疫组织化学检查胞质
- 清洁级C57BL/6剖腹产和正常产仔鼠成活率和生长的比较观察被引量：4
- 1999年
- 本文对半屏障系统下清洁级Ｃ５６ＢＬ／６小鼠进行剖腹取胎，用触诊法确定妊娠鼠的临产期，剖腹产仔鼠成活率为８９５２％，部腹产和正常产仔鼠出生体重差异不显著（Ｐ＞００５）。用ＩＣＲ母鼠代乳与正常产的仔鼠１～４周龄同期体重比较差异显著或极显著（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１），４周龄头长、体长比较无显著差异（Ｐ＞００５）。
- 张梅英秦英王太一
- 关键词：仔鼠剖腹产C57BL/6诊法
- 绿色荧光蛋白转基因小鼠模型的建立及胚胎冷冻保种被引量：3
- 2007年
- 目的建立绿色荧光蛋白转基因小鼠模型,并采取胚胎冷冻的方法进行保种。方法通过原核显微注射法,把线性化、纯化后的外源基因pEGFP注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠。经鉴定对有表达的转基因鼠进行胚胎冷冻保种。结果移植注射胚胎385枚给30只假孕小鼠共出生了306只后代鼠,经PCR和southern blot检测得到5只阳性小鼠。F2代转基因鼠胚胎冷冻240枚胚胎。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP在小鼠基因组中得到整合,建立了转pEGFP的转基因小鼠模型。
- 汪瑛杨葳郑志红王惟于洋董婉维张梅英王禄增
- 关键词：GFP显微注射法转基因小鼠胚胎冷冻
- 激肽释放酶转基因大鼠模型的建立被引量：3
- 2007年
- 目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG（150-150IU/kg）超排不同周龄（4-8周）SD大鼠比较超排效果的差异，以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件，经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型，通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达。结果4-8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7，5周龄大鼠超排效果最好，与其他周龄大鼠相比有显差异，P〈0.05；显微注射1538枚卵，移植685（44.53%）枚卵于31只受体输卵管中，12（12/31，38.7%）只怀孕，共产仔62只，经PCR检测获得6只阳性鼠，Southern检测3只阳性。对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达。结论成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型，该模型是高血压病研究的理想动物模型。
- 郑志红杨葳周生来王维董婉维李兆阳孙强张梅英李华王禄增
- 关键词：转基因高血压
- 具G418抗性NIH3T3细胞饲养层的制备(英文)
- 2006年
- 背景:建立具有抗药(新霉素或潮霉素)性的饲养层细胞是转染外源目的基因胚胎干细胞阳性克隆的筛选必备条件。建成的具有抗药性的NIH3T3细胞系可用于胚胎干细胞其他目的基因的筛选。目的:建立具有G418抗性的NIH3T3细胞系,用于转染pTet-on基因的胚胎干细胞阳性细胞克隆筛选的饲养层。设计:细胞培养观察及DNA检测。单位:中国医科大学实验动物部。材料:NIH3T3细胞由中国医科大学细胞生物教研室惠赠,pWL/neo质粒为美国哈佛大学医学院金壮教授惠赠。G418、白血病抑制因子(胚胎干细胞GRO106U/mL)、DMEM为GIBCOBRL产品,丝裂霉素-C、DIG标记及检测试剂盒为Roche产品,脂质体为Invitrogen产品,均购自沈阳联星生物技术有限公司。方法:①通过脂质体转染的方法,将含有neo基因的质粒pWL/neo导入NIH3T3细胞中。②将细胞传至25mL培养瓶中,加入梯度浓度的G418继续培养,通过观察细胞生长及死亡情况测定G418对NIH3T3细胞最小致死量。③将转染的细胞进行传代,挑取单个细胞的克隆至24孔培养板继续进行筛选扩增,选用正常的NIH3T3细胞加入相同剂量的G418的选择性培养基作为筛选的阴性对照。④采用较低的细胞密度铺板,加入含最小致死量G418的DMEM培养基进行再次筛选;同时选用正常的NIH3T3细胞为对照,使用含有最小致死量G418及未加G418的DMEM培养基进行培养,采用光学显微镜对G418抗性NIH3T3细胞进行观察。⑤选用具有G418抗性的NIH3T3细胞和小鼠胚胎成纤维细胞分别作为饲养层细胞进行传代,采用光学显微镜对培养后胚胎干细胞-D3细胞进行观察,并制备细胞DNA,对其进行PCR和southernblot鉴定。主要观察指标:①G418对NIH3T3细胞最小致死量的测定结果。②G418抗性NIH3T3细胞的筛选结果。③G418抗性NIH3T3细胞的生长观察结果。④胚胎干细胞-D3细胞生长观察结果及G418抗性NIH3T3细胞的鉴定。结果:①G418对NIH3
- 张梅英李华董婉维杨葳汪瑛秦英王禄增王太一
- 关键词：转染饲养层胚胎干细胞抗药性
- 梭鱼幼鱼热忍受温度的研究被引量：20
- 1999年
- 自然界水体温度变化通常表现为缓慢的渐进过程，因而水生生物能长期适应并稳定地生活在其中。然而，随着热（核）电站的兴建，许多湖泊、水库、河流、沿海水域成为其冷却水源，温排水造成该水域水温升高，并不同程度地危害水生生物资源，形成热污染。国外早在５０年代已开...
- 张梅英侯文礼沙少国
- 关键词：梭鱼幼鱼
- 5-脂氧化酶转基因小鼠模型的制备
- 目的建立5-脂氧化酶转基因小鼠,用于动脉粥样硬化的发病机制的研究。方法通过显微注射的方法,将5-脂氧化酶基因片段(6.8kb)导入BDF1受精卵雄原核中,共注射166枚受精卵,然后将90枚受精卵细胞植入同期受孕的受体母鼠...
- 张梅英杨葳李兆阳周生来于洋王惟秦英郑志红王禄增
- 关键词：潮霉素饲养层转基因
- 文献传递
- 一种能实现蛋白可逆表达的敲入载体构建方法被引量：1
- 2016年
- 在细胞或小鼠中使用Cre重组酶(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)条件性地删除或修饰基因是不可逆的,基因删除后蛋白不能恢复表达。FK506-雷怕霉素结合蛋白FKBP L106P不稳定结构域(FKBP L106P destabilization domain)DD-C-Shield1系统可以解决这个问题,能人为控制蛋白表达或降解,避免胚胎致死。本实验以小GTP酶腺苷二磷酸核糖基化因子6(ADP-ribosylation factor 6,ARF6)为例,借助EL350细菌中Red/ET重组作用,使用DD-C-Shield1系统和重叠延伸PCR方法,发展一种通用的可实现蛋白可逆表达的构建敲入载体的方法。该方法缩短了构建时间,减少了重组的步骤,不需要使用rps L-neo DNA、链霉素和酶切位点。此敲入载体两侧同源臂5 kb左右,可用传统的ES打靶方法构建敲入小鼠,经过简单改造也可使用CRISPR/Cas9方法构建敲入细胞或小鼠模型,从而在细胞和动物模型中进行条件性修饰、快速、可逆地调节特异性蛋白表达,以利于发育学研究,为细胞和活体生物严谨调控蛋白功能提供了一种新的策略。
- 王金霞徐影琪魏政立杨葳张梅英郑志红
- 关键词：重叠延伸PCR
