张晓强
- 作品数：15 被引量：34H指数：3
- 供职机构：解放军第309医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GRP78/Bip在GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的研究GRP78/Bip在GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗中的表达,探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)与非综合征型聋的相关性。方法敲基因小鼠(6只)Cx26loxp/loxp;Pax2 Cre/+(cCx26)为实验组,野生型BALB/c小鼠(6只)为正常对照组,两组分别选取P8、P12和P21小鼠各2只进行实验。采用耳蜗冰冻切片,免疫组化法检测耳蜗切片中葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)的表达。结果 cCx26小鼠耳蜗的GRP78/Bip表达定位与对照组相同,但在P8和P12时cCx26小鼠耳蜗表达更强,到P21时,在盖膜、耳蜗外侧壁GRP78/Bip表达较对照组减弱,而在顶回仅存的不成熟Corti细胞团中,GRP78/Bip表达与对照组接近。结论 GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗发育成熟之前,其耳蜗中GRP78/Bip表达增高,ERS可能参与了GJB2基因突变导致的非综合征型聋的发生过程。
- 张延平张晓强刘雅丽黄玮孙玉蕊
- 关键词：小鼠基因敲除内质网分子伴侣
- 使用脑干诱发电位仪进行新生儿听力筛查
- 2010年
- 目的探讨临床诊断用ABR仪通过加载Smart Screen程序进行新生儿蜗后病变筛查的可行性。方法 2006年6月至2009年10月在解放军第309医院和解放军第316医院妇产科出生的2864例新生儿中的550例在出生后42d后接受AABR筛查,用美国智听公司诊断用ABR仪加载Smart Screener测试程序进行。AABR采用35dBnHL的短声刺激,刺激率为19.3次/s,叠加500-2000次,在标准隔声室内进行测试。对于筛查不通过者转诊至上级听力诊断中心进行听力评估。结果 550例新生儿中535例通过了初筛,筛查通过率97.27%(535/550),所有测试未通过者转往北京市指定的听力筛查中心,转诊百分比5.24‰(15/2864),诊断听力正常12例,确诊感音神经性聋、先天性小耳畸形和唇腭裂各1例次,占同期出生新生儿的1.05‰(3/2864)。AABR筛查通过的535例婴儿,随访半年以上,听力发育未见明显异常。结论诊断用ABR仪加载Smart Scree-ner测试程序不需要添加额外设备,利用产妇产后42d到医院复查时对婴儿进行筛查,如发现筛查异常还可立即进行诊断性ABR检查,具有一定的推广应用价值。
- 孙玉蕊刘金伟邓惠严张晓强张延平
- 关键词：新生儿听力
- GJB2基因条件敲除小鼠的繁殖、基因型鉴定及听力检测被引量：3
- 2013年
- 目的探讨GJB2基因条件敲除(conditional connexin 26knock out,cCx26KO)小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定方法,为进一步研究GJB2基因突变导致非综合征型聋的机制奠定基础。方法将引进的两对转基因小鼠Cx26loxp/loxp和Pax2-Cre/+进行交配饲养与繁殖,选取子一代雌性Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+小鼠与雄性小鼠Cx26loxp/loxp合笼交配,即获得cCx26KO小鼠。提取鼠尾组织基因组DNA,PCR方法鉴定动物基因型。采用c-ABR检测成年cCx26KO小鼠和野生型小鼠的听力,进一步验证PCR方法的正确性。结果 cCx26KO小鼠繁殖成功后,采用PCR方法鉴定分析,成功获得Cx26loxp/loxp_Pax2Cre/+、Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+、Cx26loxp/loxp、Cx26loxp/-4种基因型小鼠,其繁殖结果符合孟德尔遗传定律。与野生型小鼠相比,cCx26KO小鼠c-ABR反应阈显著升高,约达95dB SPL。结论 PCR方法可准确鉴定子鼠的基因型,雌性Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+小鼠与雄性Cx26loxp/loxp小鼠交配是获得cCx26KO实验小鼠的有效途径。
- 万亚蕊张延平张晓强杨仕明
- 关键词：GJB2基因野生型基因型鉴定感音神经性聋
- 单只小鼠耳蜗总RNA提取方法被引量：1
- 2012年
- 目的探索一种高效、简便的小体积组织RNA提取方法。方法取单只野生型BALB/c小鼠或GJB2条件敲除小鼠cCx26loxp/loxp-Pax2Cre/+(cCx26ko)P10、P18耳蜗膜迷路组织,采用与EP管底部体积、形状均相似的玻璃研磨棒在裂解液中进行组织破碎,提取RNA后用琼脂糖电泳、紫外分光光度计检测所提取RNA的质量和完整性及浓度。结果本实验单只小鼠耳蜗中获得的总RNA紫外光吸光值(260/280)均在1.9～2.1之间,电泳结果显示28S和18S的条带清晰度高,PCR产物扩增出的目的基因片断单一,说明其完整、质量高且纯度高。结论单只小鼠耳蜗总RNA的提取方法操作简便、成本低廉且相对安全和快速,提取效率较高,适合于小体积组织RNA的提取。
- 张晓强张延平
- 关键词：小鼠耳蜗RNA提取
- GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗外毛细胞凋亡时程观察被引量：4
- 2012年
- 目的探讨GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗毛细胞缺失方式和具体时间。方法 GJB2基因条件敲除小鼠cCx26loxp/loxp-Pax2-Cre(cCx26)由转基因小鼠Cx26loxp/loxp与Cx26loxp/--Pax2-Cre小鼠杂交获得,分别选取P8、P14、P18和P21四个发育阶段各6只小鼠进行实验。野生型BALB/c小鼠作为正常对照。常规解剖出耳蜗基底膜,鬼笔环肽-FITC及碘化丙啶(PI)分别染色、铺片,激光共聚焦显微镜观察、拍照。结果与野生型小鼠相比,cCx26小鼠P8时耳蜗外毛细胞纤毛、细胞核形态均未见明显异常改变;P14时,鬼笔环肽染色显示耳蜗中回表皮板疏松,外毛细胞纤毛染色开始不规则,PI染色外毛细胞核排列极性欠佳,细胞核着色不均匀,可见深染的胞核,尚未见明显的外毛细胞缺失;P18时,鬼笔环肽染色显示表皮板出现区域性的模糊和单个外毛细胞纤毛的消失,外毛细胞核出现皱缩、片断化,甚至缺失,这一改变以中回最为明显,底回次之,顶回改变最轻微;P21时,表皮板出现了片状缺失,外毛细胞丢失明显,残余细胞排列紊乱。与野生型小鼠相比,cCx26ko小鼠各阶段内毛细胞纤毛染色不规则,深浅不一,细胞核未见明显形态异常及缺失。结论 GJB2基因缺失可引起小鼠耳蜗Corti器表皮板破损以及外毛细胞的凋亡,表皮板及外毛细胞纤毛的变化开始于P14,P18时外毛细胞出现典型的凋亡表现。
- 张延平张晓强刘雅莉黄玮孙玉蕊
- 关键词：凋亡
- GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗凋亡相关基因差异表达
- 目的 我们既往的研究结果表明GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗外毛细胞在P18时出现典型凋亡表现。为探讨外毛细胞凋亡的原因,本文着重研究GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗中凋亡相关基因的差异性表达情况,进一步探讨GJB2基因突变导致...
- 张延平张晓强李晓瑞
- 文献传递
- GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗凋亡相关基因表达差异研究被引量：3
- 2014年
- 目的研究GJB2基因条件敲除(cCx26Pax2Cre)小鼠耳蜗膜迷路细胞中凋亡相关基因的差异性表达情况,探讨GJB2基因突变导致耳聋的机制。方法由Cx26loxp/loxp和Pax2Cre/+小鼠杂交产生的cCx26Pax2Cre小鼠为实验组,野生型BALB/C小鼠作为正常对照组,两组分别选取P10和P18小鼠各3只,提取耳蜗膜迷路总RNA,反转录成cDNA,用QRT-PCR Array检测两组与凋亡相关的84个功能基因的表达差异。结果与野生型小鼠相比,cCx26Pax2Cre小鼠在P10时,共有16个基因表达有生物学意义(19.05%,16/84),其中14个基因表达下调(87.5%,14/16),包括9个抑制细胞凋亡和促进细胞增殖的基因下调和5个促进细胞凋亡和炎症反应的基因下调,2个基因表达上调(12.5%,2/16),均为促进细胞凋亡的基因,此期促进细胞凋亡的趋势十分明显;在P18时,共有4个基因(4.76%,4/84)表达变化有生物学意义,包括3个基因表达下调(75%),全部为抑制细胞凋亡的基因(100%),1个基因表达上调(25%),为促进细胞凋亡的基因,总体趋势仍为促进细胞凋亡的发生。与P10相比,cCx26Pax2Cre小鼠P18时耳蜗组织中共6个基因表达变化有生物学意义,其中促进细胞凋亡的caspase-8基因和抑制细胞凋亡的No13基因表达上调(33.3%,2/6),4个基因表达下调(66.7%,4/6),包括促进细胞凋亡的Tnfrsf10b、Cideb基因和抑制细胞凋亡的CD40、Bc110基因。结论 GJB2基因敲除后,可能通过上调死亡受体5(death receptor 5,DR5)激活死亡受体途径直接导致细胞凋亡,同时也可能通过caspase-8间接激活线粒体通路使凋亡信号进一步放大,最终引起cCx26Pax2Cre小鼠耳蜗细胞的广泛缺失和听力下降。
- 崔小缓张延平张晓强李丽娜蒋兴旺
- 关键词：凋亡基因
- 中国人常见GJB2基因突变蛋白亚细胞定位研究被引量：3
- 2010年
- 目的研究中国人常见三种GJB2基因突变(c.235de1C,c.299-300delAT,and c.176-191de1(16)bp)的亚细胞定位和致聋机理。方法用MegaTran 1.0将GJB2野生型和三种突变的绿色荧光蛋白融合表达载体转染HEK293细胞,转染48h后用红色ER-TrackerTM复染细胞,激光共聚焦显微镜下观察结果。结果转染野生型质粒后可见细胞膜上出现点状或线状绿色荧光,三种突变融合蛋白质粒转染后均可见HEK293细胞质中有弥漫分布的绿色荧光,而胞膜上没有表达;转染突变质粒的细胞用ER-Tracker TM复染后,激光共聚焦显微镜下见红色和绿色几乎完全重叠,提示上述三种突变蛋白没有出现在细胞膜上,而是滞留在内质网中。结论中国人常见三种GJB2基因突变没有到达细胞膜上形成缝隙连接,而是滞留在细胞内质网中,提示过多的突变蛋白可能通过诱发内质网应激以及后续的内质网应激相关细胞凋亡导致耳聋。
- 张延平刘雅莉张晓强李丽娜孙玉蕊张宗林
- 关键词：感音神经性耳聋
- 坑道噪声及MP3对某部队官兵听力影响的调查研究被引量：4
- 2011年
- 目的为研究坑道混合型噪声及随身听设备对人体听觉系统的影响规律,进一步加强对坑道作业人员的听力防护,调查坑道作业噪声及随身听对部队官兵听觉系统的危害。方法对总参某部从事坑道作业人员73人和长时间使用MP3的人员53人进行问卷调查,除外耳鼻咽喉科其他疾病,进行纯音测听和声导抗检查。听力检查前脱离噪声20小时以上,在隔音室内进行纯音和声导抗检查。用Stata软件对听力检查结果进行统计分析。结果听力检查发现坑道作业组出现语频听力下降3人(4.11%,3/73),平均听阈50dBHL;出现高频听力损伤30人(41.10%,30/73),频率主要为3.0kHz、4.0kHz、6.0kHz、8.0kHz高频区,平均听阈46dBHL。使用MP3的人员中无语频听力下降,高频听力损伤人数为17人(32.08%,17/53),平均听阈45dBHL。坑道作业组语频听力损失比例与长期使用MP3组无统计学差异(P>0.05),高频听力损失两组发生比例差异无显著性(P>0.05)。结论坑道噪声可能引起坑道作业人员的听力下降,需进一步加强噪声防护。长期使用MP3也可引起听力损伤。
- 李丽娜张延平孙玉蕊刘金伟张晓强邓惠严王戈佟明望张俊伟
- 关键词：听力损失随身听
- GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗毛细胞凋亡时程观察
- GJB2基因突变是导致人类非综合症性耳聋的主要原因之一。定向敲除耳蜗GJB2基因后，小鼠出生时耳蜗发育正常，出生后的耳蜗细胞陆续发生凋亡。以往对耳蜗定向敲除GJB2基因小鼠(cCx26ko)耳蜗的扫描电镜观察结果提示内耳...
- 张延平张晓强
- 关键词：GJB2基因耳蜗毛细胞凋亡
- 文献传递
