富宁
- 作品数：138 被引量：954H指数：14
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- 人Toll样受体-9胞外区N端蛋白的表达及其抗体的制备
- 2005年
- 目的: 构建人Toll 样受体-9(hTLR-9)基因5′端序列的表达质粒,在大肠杆菌中表达,并以表达的hTLR-9-N免疫小鼠制备抗体.方法: 构建 hTLR-9 基因5′端(707～1 167 bp)的硫氧还蛋白(thioredoxin)融合表达质粒pET32a-hTLR-9-N.将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.5 mmol/L IPTG诱导下表达.表达产物用SDS-PAGE 进行鉴定.以8 mol/L 尿素溶解的包涵体作为免疫原,免疫昆明种小鼠制备抗hTLR-9-N的抗体.结果:融合表达质粒pET32a-hTLR-9-N在E.coli BL21 (DE3)中以相对分子质量(Mr)为31 000的包涵体形式表达;Western blot分析证明hTLR-9-N在大肠杆菌中得到正确表达.表达的目的蛋白初步纯化后的纯度达90%以上;以hTLR-9-N为抗原制备的抗血清效价为1∶25 600; 该抗血清可以与转染后稳定表达全长hTLR-9的HEK293细胞产生结合反应.结论:成功地在大肠杆菌中表达hTLR-9 N末端蛋白,制备的抗hTLR-9-N抗体可特异性结合表达全长hTLR-9的真核细胞.
- 李军赵文忠江海燕朱平富宁
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- α^(-SEA)型地中海贫血标志蛋白zeta链蛋白的克隆表达与鉴定被引量：9
- 2005年
- 目的克隆zeta链蛋白基因并在大肠杆菌中表达,经纯化与鉴定,为建立α-SEA型地中海贫血的免疫学筛查方法提供特异性抗原。方法从经处理的K562细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术反转录并将其克隆到pET-21a(+)载体中,测序验证。融合蛋白在大肠杆菌中表达,采用Probond树脂柱纯化融合蛋白,用WesternBlotting和ELISA鉴定。结果成功构建了融合表达载体pET-zeta,融合蛋白得到可溶性表达及纯化,经Westernblotting和商品ELISA试剂盒鉴定显示重组蛋白为zeta链蛋白。结论克隆表达并获得了纯化zeta链蛋白,为地中海贫血的免疫筛选方法的建立提供了抗原。
- 唐磊赵文忠卢晓徐湘民富宁
- 关键词：ZETA克隆
- Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用被引量：19
- 2002年
- 目的 了解慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染者外周血中辅助性T细胞 (Th)内干扰素 γ(IFN γ)、白细胞介素 4 (IL 4 )和转化生长因子 β(TGF β)的表达情况 ,以测定Th1/Th2 /Th3细胞的百分数 ,探明Th细胞各极化群体在慢性HBV感染中的作用。方法 常规分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,在佛波脂 (PMA)、钙离子导入剂伊屋诺霉素Ionomycin、细胞内转运阻断剂莫能星Monensin的刺激下 ,采用流式细胞分析术 (FACS)对慢性HBV感染者外周血单个Th细胞内IL 4、IFN γ和TGF β的表达进行分析。结果 正常对照组 ,2 3% - 18 6 %的CD4 + T细胞为Th1细胞 ,0 9% - 9 2 %为Th2细胞 ;0 7% - 7 1%的细胞仅表达TGF β ,为Th3细胞。在慢性HBV感染者外周血单个CD4 + T细胞中 ,以Th0细胞居多 ;而Th1细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多 ,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎 ,其Th1百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎 ;Th2细胞在慢性HBV感染的不同阶段则较为恒定 (P >0 0 5 ) ,但明显高于对照组 (P<0 0 5 )。Th3细胞的百分数则随着肝组织炎症活动的加剧 ,其比例也明显减少 (P <0 0 5 ) ,在无症状携带者(AsC)组 ,Th3细胞的百分数远高于慢性乙型肝炎组及对照组 (P <0 0 5 )。Th3细胞重叠于Th2细胞之中。
- 姜荣龙冯筱榕郭亚兵卢桥生侯金林骆抗先富宁
- 关键词：慢性乙型肝炎病毒感染白细胞介素-4干扰素-Γ转化生长因子-Β
- 抗HIV-1 gp41合成多肽C34单抗的制备及生物学活性被引量：6
- 2002年
- 目的制备针对C34和C46单抗, 并以此为工具研究gp41表位,进一步 了解HIV-1包膜蛋白的作用机理和病毒的感染机制,为寻找新的治疗靶点提供抗体工具。 方法常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗C34与C46的单克隆抗体,并鉴定其 特异性位点，还用ELISA法、MTT法及荧光分子探针技术对单抗的生物学活性进行研究。结果获得了3株抗C34单克隆抗体、2株抗C46单抗。此5个单抗均与C34结合 , 并抑制N36肽与C34肽复合物的形成；其中效价最高的1G1对H9/HIVⅢB细胞的生长有刺 激作用 ,对H9/HIVⅢB细胞和MT-2细胞的融合无明显影响。结论得到5株 可与C34反应,并可抑制C34与N36多肽结合的单抗, 其中1G1所识别的表位可能为增强性或刺激性表位。
- 郭海萍刘北一罗海波韩强涛富宁
- 关键词：HIV-1GP41生物学活性
- 模拟金黄色葡萄球菌脂磷壁酸表位的初步筛选与鉴定
- 2015年
- 目的:利用噬菌体展示肽库技术筛选并鉴定可模拟金黄色葡萄球菌细胞壁脂磷壁酸(LTA)的表位。方法:以抗LTA单抗为靶分子,采用液相法对噬菌体12线性肽库进行3轮淘选,夹心ELISA鉴定噬菌体克隆。对阳性噬菌体克隆进行DNA测序并推导氨基酸序列,选择优势序列合成线性肽,ELISA鉴定线性肽与抗体结合特异性。结果:经过三轮液相筛选,得到4个与抗LTA单抗特异性结合的阳性噬菌体克隆,序列分析显示阳性克隆展示4种不同序列。选择与单抗结合最好的序列GHx DFRQxx QPS合成线性短肽L2,ELISA结果显示L2能够与抗LTA单抗特异性结合。结论:利用噬菌体展示肽库筛选技术获得可模拟LTA表位的序列。
- 王湘豫黄钊霞侯晓睿朱平富宁刘北一
- 关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体展示肽库模拟肽
- 突变肽库的构建及其应用——噬菌体展示短肽的改造
- 2005年
- 刘北一富宁
- 关键词：短肽噬菌体展示技术肽库突变靶分子
- 从噬菌体环肽库中筛选TNF-α表位模拟肽的研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :用具有中和活性的抗TNF α单抗 (mAb)J1D9筛选噬菌体环七肽库 ,从中获得可模拟TNF α表位的短肽。方法 :筛选TNF α表位模拟肽 ,并用夹心ELISA法鉴定阳性克隆。结果 :对环七肽库进行 3轮筛选后 ,随机挑选 2 0个噬菌体克隆 ,经ELISA鉴定出 9个阳性克隆。DNA序列分析后 ,推导的氨基酸序列共 3种 :c RRPAQSG c、c NKHNRKI c和c RGMSRKI c。结论 :筛选的环七肽克隆展示肽具有TNF α的抗原性 ,为TNF
- 罗海波刘北一刘艳君朱平富宁
- 关键词：噬菌体肽库表位模拟肽
- 一种特异性识别AOPPs的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种特异性识别AOPPs的单克隆抗体及其应用。发明人通过实验筛选得到了分泌单克隆抗体AP‑4C5的杂交瘤细胞株(保藏编号CCTCC NO.:C202232)，单克隆抗体AP‑4C5能够特异性识别AOPPs中的...
- 刘北一侯晓睿朱平富宁
- 人可溶性CD14检测体系的建立被引量：1
- 2004年
- 目的 建立人可溶性CD14双抗体夹心ELISA检测体系。方法 用抗人CD14单抗为捕获抗体 ,加入待测抗原 ,第二抗体为兔抗人CD14多克隆抗体 ,最后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG。结果 本检测体系灵敏度高 ,可达 5ng ml,特异性强 ,测量范围 5～ 12 0ng ml,重复性好 ,各项技术指标与国外同类产品相当。结论 本检测体系能够检测人体液中和细胞培养上清中sCD14 ,适用于临床及基础研究。
- 江海燕刘艳君朱平韩强涛富宁
- 关键词：可溶性CD14双抗体夹心ELISA法多克隆抗体抗原细胞免疫血清
- 人血小板生成素基因cDNA和基因组DNA的克隆和序列测定被引量：2
- 2001年
- 目的研究内含子和5＇非翻译区对血小板生成素(TPO)基因表达的影响.方法以中国人胎肝mRNA为模板,应用RT-PCR和长距离PCR(LD-PCR)技术扩增了约1.1kb的全长人TPO cDNA.6.2 kb的TPO基因组DNA和TPO基因组中的内含子I,内含子Ⅱ～Ⅳ和内含子Ⅴ.结果全序列分析表明,全部的编码序列、所有的内含子/外显子剪切部位序列同已知一致,个别差异发生在内含子中.结论通过PCR扩增技术,成功地从中国人胎肝组织中克隆了全长人TPO cDNA、TPO基因组DNA及其全部的内含子.
- 宁云山周宏伟周明乾陈泽洪方向东富宁王小宁
- 关键词：血小板生成素基因组DNA内含子克隆
