姜华军
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫生部抗生素基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金协和青年科研基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人载脂蛋白A-I表达上调剂的发现与活性研究被引量：2
- 2014年
- 目的筛选上调人载脂蛋白A-I(ApoA-I)基因表达的新型活性化合物,并在表达和功能水平对其作用进行研究。方法利用人ApoA-I基因表达上调剂筛选模型对化合物库进行筛选;对发现的活性化合物在ApoA-I启动子水平进行量效关系研究;利用实时荧光定量RT-PCR检测ApoA-I mRNA的表达水平;利用Western blot、ELISA和流式细胞技术检测ApoA-I的蛋白表达;利用胆固醇流出试验检测ApoA-I介导的巨噬细胞胆固醇外流的情况。结果从20 000样次化合物筛选中得到活性化合物5238B-69,在一定浓度范围内存在转录调控活性的量-效关系,当化合物浓度为0.30μg/ml时,上调ApoA-I表达活性达到最高值(408%),EC50为0.01μg/ml。5238B-69能显著上调HepG2细胞中ApoA-I mRNA的水平;同时,Western blot结果显示5238B-69能增加HepG2细胞ApoA-I蛋白的表达。ELISA结果显示,与对照相比,5238B-69作用48 h时,胞外ApoA-I水平增加了48%,流式细胞检测表明,5238B-69作用24 h后,胞内ApoA-I蛋白水平增加了21.4%。功能分析试验显示,5238B-69作用HepG2细胞上调生成的ApoA-I,能促进巨噬细胞RAW264.7内[3H]标记的胆固醇的流出。结论得到一个具有上调ApoA-I表达的活性化合物,在提高ApoA-I表达水平和生物学功能方面均有明显的效果。
- 杜郁贾晓健王丽王丽非姜华军杨帆司书毅杨媛洪斌
- 关键词：载脂蛋白A-I基因表达调控动脉粥样硬化转录水平
- 丹酚酸B在巨噬细胞胆固醇外排中的作用被引量：3
- 2013年
- 目的考察丹酚酸B(SAB)对巨噬细胞胆固醇外排的影响。方法分别采用巨噬细胞RAW264.7和PMA诱导的THP-1细胞,利用流式细胞仪检测丹酚酸B对已摄取DiI-acLDL的细胞外排脂质作用的影响,对RAW264.7细胞表面ABCA1蛋白表达水平的影响。采用ABCA1的抑制剂DIDS及小分子干扰RNA的方法检测ABCA1在丹酚酸B诱导的促进脂质外排过程中的作用。进而利用靶向CD36的小分子干扰RNA,通过抑制CD36的表达,检测CD36在丹酚酸B促进载脂巨噬细胞脂质外排过程中的作用。结果采用DiI荧光标记的脂质检测巨噬细胞对脂质的外排作用,结果显示SAB显著增加了荷脂细胞对DiI-acLDL的外排作用。对脂代谢相关转运蛋白表达的检测结果显示,在荷脂的RAW264.7细胞中,SAB能够以一定剂量依赖的方式增加细胞表面ABCA1蛋白水平的表达。进一步研究显示,上述SAB促进外排的作用可被ABCA1的抑制剂或者siRNA的作用消除,确证了ABCA1在SAB介导的脂质外排过程中的重要作用。同样利用CD36小分子干扰RNA将CD36表达抑制后,SAB促进外排的作用消失,说明SAB介导的细胞脂质的外排作用同样依赖于CD36。结论丹酚酸B通过上调ABCA1的表达,促进巨噬细胞胆固醇或脂质的外排,且该作用依赖于ABCA1及CD36,为SAB抗动脉粥样硬化作用新机制的研究提供了重要依据。
- 王丽姜华军杨帆杜郁贾晓健司书毅洪斌
- 关键词：动脉粥样硬化丹酚酸B抗原CD36胆固醇逆转运
- 人高密度脂蛋白受体基因3'UTR对其mRNA稳定性的影响被引量：3
- 2013年
- 目的考察人高密度脂蛋白受体SR-BI基因3'UTR对其mRNA稳定性的影响。方法以人肝癌细胞株HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增获得SR-BI基因mRNA3'UTR全长序列,克隆至荧光素酶报告基因的下游,分别构建重组质粒pc-luc-3'UTR以及pGL3-CLAp-luc-3'UTR。利用脂质体转染HepG2细胞,进而检测转染后细胞的荧光素酶活性、荧光素酶报告基因mRNA的表达水平以及荧光素酶报告基因mRNA的半衰期。结果通过PCR成功扩增获得人SR-BI基因3'UTR全长序列,分别构建重组荧光素酶报告质粒pc-luc-3'UTR以及pGL3-CLAp-luc-3'UTR,并以pGL3-CLAp-luc-3'UTR转染HepG2细胞建立稳定转染细胞株CLAp-luc-3'UTRHepG2。通过荧光素酶活性检测、实时荧光定量RT-PCR以及mRNA半衰期检测,结果证实SR-BI基因的3'UTR的存在可显著降低荧光素酶活性及其mRNA水平,mRNA半衰期也显著缩短。结论 SR-BI基因3'UTR对其mRNA的稳定性有显著的影响,是SR-BI基因转录后水平调控的关键,为SR-BI基因表达调控提供了一个新机制。
- 王丽贾晓健姜华军杜郁杨帆司书毅洪斌
- 关键词：CD36转录后荧光素酶类
