姚琦
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 内毒素休克小鼠肺血管特异性结合肽的筛选与鉴定
- 尽管重症医学已取得很大发展,但脓毒性休克,脓毒症合并器官功能不全的死亡率仍然很高。大量研究表明,脓毒症是一种具有整体特征性且不断发展变化的、极其复杂的临床综合症,其牵涉因素众多且相互影响,相互促进。传统的单线性研究并不能...
- 姚琦
- 关键词：内毒素休克肺脏
- 文献传递
- 人CAT启动子红色荧光蛋白报告基因载体的构建及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建人过氧化氢酶(CAT)启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为进一步研究CAT表达调控奠定基础。方法以人类基因组DNA为模板,PCR获得-404～+16大小的启动子片段,将其定向插入pDsRed1-1载体,构建pDsRed-CATp红色荧光蛋白报告基因载体。瞬时转染NIH/3T3细胞,观察CAT启动子对H2O2刺激的反应。结果pDsRed-CATp经双酶切及DNA测序分析鉴定准确无误;该载体瞬时转染NIH/3T3细胞,静息状态呈现弱转录,H2O2刺激后,转录水平明显增强。结论成功构建CAT启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,对H2O2刺激反应良好,为研究CAT基因表达调控提供了有效的工具。
- 姚琦黄劭刘亚伟刘靖华姜勇
- 关键词：过氧化氢酶红色荧光蛋白调节基因报告基因
- 大规模噬菌体DNA测序样品制备方法的改进与应用
- 2008年
- 目的优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法,提高筛选效率。方法通过PCR扩增噬菌体环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入目的片段噬菌体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定,并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较。结果PCR扩增法和经典法制备的噬菌体DNA的测序成功率分别为92.73%、93.75%,差异无统计学意义(P>0.05);两种方法制备的同一个噬菌体克隆的DNA经测序鉴定显示测序结果一致;第一轮、第二轮和第三轮淘选产物的噬菌体克隆经PCR扩增和电泳鉴定,发现无插入目的片段的噬菌体克隆检出率逐轮增加分别为1.04%、4.17%和22.69%(P<0.01)。结论PCR扩增含插入目的片段噬菌体DNA的方法可使大规模噬菌体筛选和DNA测序更加方便、快捷、实用,值得推广。
- 刘承武姚琦袁利华牛茂昌刘靖华杨敏冯国开姜勇
- 关键词：噬菌体展示技术DNA噬菌体聚合酶链反应
- 人宫颈癌Hela细胞穿透肽的噬菌体展示技术筛选被引量：2
- 2009年
- 目的细胞穿透肽是近年来发现的具有穿透哺乳动物生物膜功能,并能介导大分子物质跨膜转导的一类小分子肽段。该肽段以其转导效率高,速度快,生物活性好,对细胞损害小等特点,成为药物导向治疗方法研究领域的热点。本研究目的在于利用噬菌体展示技术高通量、系统地筛选人宫颈癌Hela细胞的穿透多肽。方法以Hela细胞作为对象,利用噬菌体随机肽库,采用细胞筛选的方法,筛选具有细胞膜穿透作用的多肽。将筛选得到的穿透多肽与增强型绿色荧光(EGFP)融合表达,通过荧光显微观察技术快速对多肽的穿透功能进行验证。结果通过4轮的噬菌体文库筛选,目的多肽得到了有效而快速地富集。初步的测序和验证得到了3条具有明显介导融合蛋白内化的短肽序列。结论成功建立起基于噬菌体随机肽库的细胞穿透肽筛选技术,为肿瘤导向药物载体的研究开发奠定了基础。
- 刘芸吴向玲江力玮姚琦邓鹏姜勇
- 关键词：细胞穿透肽噬菌体展示
- 小鼠膜联蛋白A1真核表达载体的构建及其细胞内定位
- 2009年
- 目的构建小鼠膜联蛋白A1(annexin-A1,ANXA1)真核表达载体,并检测其在NIH3T3细胞中的表达和定位。方法采用PCR法从小鼠肝cDNA文库扩增ANXA1基因编码序列,并将其克隆至带有血凝素(HA)标记的真核表达载体pcDNA3-HA上,经PCR、酶切和测序鉴定后,将重组质粒pcDNA3-HA-ANXA1瞬时转染NIH3T3细胞,采用细胞免疫荧光法检测目的基因表达情况。结果菌液PCR、双酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pcDNA3-HA-ANXA1构建正确,并可在NIH3T3细胞的胞质、胞核和胞膜中广泛表达。结论成功构建了pcDNA3-HA-ANXA1真核表达载体,该载体中的HA-ANXA1融合基因能在哺乳动物中有效表达并正确定位,为下一步深入研究ANXA1相关的信号通路奠定了基础。
- 姚琦刘爱华邓鹏刘芸姜勇
- 关键词：膜联蛋白A1小鼠转染
- 内毒素休克小鼠肝血管靶向性结合肽的初步研究
- 2010年
- 目的研究肽CLTTWAPAC与内毒素休克BALB/c小鼠肝血管的靶向性结合作用。方法构建pET14b-SBP和pET14b-SBP-CLTTWAPAC原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达纯化蛋白SBP和SBP-CLTTWAPAC。建立内毒素休克小鼠模型,将9只内毒素休克BALB/c小鼠随机均分为3组:①PBS对照组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、PBS和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min);②SBP对照组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、SBP和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min);③SBP-CLT-TWAPAC组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、SBP-CLTTWAPAC和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min)。小鼠左心室灌流后取肝匀浆称重,行噬菌体计数,计算各组肝噬菌体单位重量滴度。结果 PBS对照组与SBP对照组肝噬菌体单位重量滴度差异无统计学意义(435185±57824pfu/gvs468290±74106pfu/g,P>0.05),而SBP-CLTTWAPAC组肝噬菌体单位重量滴度(176059±98506pfu/g)显著降低,与两对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CLTTWAPAC可竞争性抑制噬菌体CLTTWAPAC与内毒素休克小鼠肝血管的结合,进一步证明CLTTWAPAC靶向性结合于内毒素休克小鼠肝血管。
- 冯国开邓鹏姚琦刘锐邓间开姜勇
- 关键词：噬菌体展示
- 内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:利用体内噬菌体展示技术筛选能与内毒素休克小鼠肝脏血管特异性结合的短肽。方法:尾静脉注射噬菌体环七肽库至内毒素休克小鼠体内,循环10min后,回收肝脏中的噬菌体。将回收的噬菌体扩增、纯化,并以此为起始物进行下一轮筛选。经过4轮筛选后,将所得文库与正常小鼠做一次差减筛选。随机挑取噬菌体单克隆进行测序,序列分析后,进行噬菌体的体内回输实验及免疫组化分析,验证所筛得噬菌体克隆的导向情况。结果:经过4轮体内筛选,肝脏中噬菌体回收率逐步提高,证明噬菌体文库在肝脏血管中得到有效富集。DNA测序后发现,10条序列中有5条为LTTWAPA,体内回输实验和免疫组化实验均证实表达该序列的噬菌体能有效地靶向于休克小鼠肝脏血管内皮细胞。结论:筛选到的短肽LTTWAPA能特异性结合于内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞,有可能对内毒素休克的治疗具有重要意义。
- 袁利华刘承武姚琦牛茂昌李志杰邓鹏刘靖华姜勇
- 关键词：噬菌体展示内皮细胞特异性结合肽
